【摘要】：研究背景隨著測序技術的發(fā)展,對KMT5B基因的研究不再僅僅局限于傳統(tǒng)的分子生物學功能方面,如細胞增殖、癌癥發(fā)生等。通過第二代測序技術,越來越多的KMT5B基因的突變在人群中被發(fā)現(xiàn),總結這些突變的臨床表現(xiàn),我們發(fā)現(xiàn)KMT5B突變的患者主要表現(xiàn)為自閉癥、智力障礙等神經發(fā)育性疾病。這表明KMT5B基因可能在神經系統(tǒng)及相關疾病的發(fā)展中起著非常重要的作用,也為我們研究KMT5B基因的功能提供了新的方向。但是目前并未發(fā)現(xiàn)有人使用合適的動物模型及合適的基因編輯技術來進一步研究KMT5B的功能。目的利用斑馬魚模型研究kmt5b基因對于早期神經系統(tǒng)發(fā)育的影響。方法1.使用CRISPR/Cas9技術構建斑馬魚kmt5b基因的突變體系,篩選功能缺失型突變體斑馬魚,并初步觀察突變體胚胎在形態(tài),發(fā)育過程的變化。2.檢測斑馬魚胚胎早期發(fā)育過程中kmt5b基因的時空表達譜。3.使用RNA-seq技術研究斑馬魚kmt5b突變體在轉錄水平上的變化。結果1.利用CRISPR/Cas9技術成功構建了斑馬魚kmt5b基因的突變體系,發(fā)現(xiàn)突變體斑馬魚眼間距變小、體長變短。2.斑馬魚胚胎原位雜交表明kmt5b基因在胚胎早期廣泛表達,在48h及以后主要集中在大腦部位。q PCR結果顯示kmt5b基因在早期發(fā)育時期大量表達,隨著胚胎發(fā)育的進行其表達量越來越低并且保持恒定。3.RNA-seq測序結果顯示kmt5b突變體和野生型斑馬魚之間存在大量差異表達基因,部分差異表達基因富集于與神經系統(tǒng)相關的生物學過程。。結論通過斑馬魚胚胎早期發(fā)育過程kmt5b基因的時空表達譜的觀察,突變體表型的測量,以及RNA-seq測序結果的分析,我們初步認為kmt5b基因突變對神經系統(tǒng)發(fā)育有影響。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：D919
【圖文】：

圖 2 KMT5B 基因的蛋白結構和突變信息馬魚用于研究人類發(fā)病機制 20 世紀初，斑馬魚就成為研究生物醫(yī)學中的發(fā)育學和胚胎學的模式動許多重要的研究被用來確定是否可以利用其胚胎可操作性來回答脊椎題[12, 13]。在 20 世紀 90 年代，在沒有復雜的基礎設施條件下通過兩次

編號target1 GCCTTTGTTCTGGCGAAGAT2 GTGCTGAATGGCAGGAGACA3 GACTGCATCTTCTGACACTC4 GGTTTCGACCAATCAAAGGC5 TGACGCCTTTCTGCCTCCGG6 GTAAGTGCGGTGCAAGCTGG7 GAACAGACTGAAGAAGCTGG8 AATCTAGAAGAGACAAACCG9 TCTACGGGACATTGAACCAG10 GCCAGCTGGTATGAAGTAGA11 GATGGGAGAATCCAAGAACA12 GCCATTCAGCACCATGTTCT success這 12 個 gRNA 靶位點中最終只有第 12 個產生了預期效果，該靶位點的位置第二個外顯子上面，其位置和 kmt5b 的基因結構如圖 3。

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本文編號：2728909