【摘要】：研究背景隨著測序技術(shù)的發(fā)展,對KMT5B基因的研究不再僅僅局限于傳統(tǒng)的分子生物學(xué)功能方面,如細(xì)胞增殖、癌癥發(fā)生等。通過第二代測序技術(shù),越來越多的KMT5B基因的突變在人群中被發(fā)現(xiàn),總結(jié)這些突變的臨床表現(xiàn),我們發(fā)現(xiàn)KMT5B突變的患者主要表現(xiàn)為自閉癥、智力障礙等神經(jīng)發(fā)育性疾病。這表明KMT5B基因可能在神經(jīng)系統(tǒng)及相關(guān)疾病的發(fā)展中起著非常重要的作用,也為我們研究KMT5B基因的功能提供了新的方向。但是目前并未發(fā)現(xiàn)有人使用合適的動(dòng)物模型及合適的基因編輯技術(shù)來進(jìn)一步研究KMT5B的功能。目的利用斑馬魚模型研究kmt5b基因?qū)τ谠缙谏窠?jīng)系統(tǒng)發(fā)育的影響。方法1.使用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建斑馬魚kmt5b基因的突變體系,篩選功能缺失型突變體斑馬魚,并初步觀察突變體胚胎在形態(tài),發(fā)育過程的變化。2.檢測斑馬魚胚胎早期發(fā)育過程中kmt5b基因的時(shí)空表達(dá)譜。3.使用RNA-seq技術(shù)研究斑馬魚kmt5b突變體在轉(zhuǎn)錄水平上的變化。結(jié)果1.利用CRISPR/Cas9技術(shù)成功構(gòu)建了斑馬魚kmt5b基因的突變體系,發(fā)現(xiàn)突變體斑馬魚眼間距變小、體長變短。2.斑馬魚胚胎原位雜交表明kmt5b基因在胚胎早期廣泛表達(dá),在48h及以后主要集中在大腦部位。q PCR結(jié)果顯示kmt5b基因在早期發(fā)育時(shí)期大量表達(dá),隨著胚胎發(fā)育的進(jìn)行其表達(dá)量越來越低并且保持恒定。3.RNA-seq測序結(jié)果顯示kmt5b突變體和野生型斑馬魚之間存在大量差異表達(dá)基因,部分差異表達(dá)基因富集于與神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的生物學(xué)過程。。結(jié)論通過斑馬魚胚胎早期發(fā)育過程kmt5b基因的時(shí)空表達(dá)譜的觀察,突變體表型的測量,以及RNA-seq測序結(jié)果的分析,我們初步認(rèn)為kmt5b基因突變對神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育有影響。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：D919
【圖文】：

圖 2 KMT5B 基因的蛋白結(jié)構(gòu)和突變信息馬魚用于研究人類發(fā)病機(jī)制 20 世紀(jì)初，斑馬魚就成為研究生物醫(yī)學(xué)中的發(fā)育學(xué)和胚胎學(xué)的模式動(dòng)許多重要的研究被用來確定是否可以利用其胚胎可操作性來回答脊椎題[12, 13]。在 20 世紀(jì) 90 年代，在沒有復(fù)雜的基礎(chǔ)設(shè)施條件下通過兩次

編號target1 GCCTTTGTTCTGGCGAAGAT2 GTGCTGAATGGCAGGAGACA3 GACTGCATCTTCTGACACTC4 GGTTTCGACCAATCAAAGGC5 TGACGCCTTTCTGCCTCCGG6 GTAAGTGCGGTGCAAGCTGG7 GAACAGACTGAAGAAGCTGG8 AATCTAGAAGAGACAAACCG9 TCTACGGGACATTGAACCAG10 GCCAGCTGGTATGAAGTAGA11 GATGGGAGAATCCAAGAACA12 GCCATTCAGCACCATGTTCT success這 12 個(gè) gRNA 靶位點(diǎn)中最終只有第 12 個(gè)產(chǎn)生了預(yù)期效果，該靶位點(diǎn)的位置第二個(gè)外顯子上面，其位置和 kmt5b 的基因結(jié)構(gòu)如圖 3。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 臧曉霞;紀(jì)明山;左平春;陳仕紅;孫中華;杜芳;;啶酰菌胺對斑馬魚胚胎及成魚的毒性[J];農(nóng)藥;2016年12期

2 沈自慧;楊淋清;吳德生;郭昱嵩;袁建輝;周麗;劉建軍;莊志雄;;基于斑馬魚胚胎進(jìn)行化學(xué)品毒性評價(jià)的方法[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2016年12期

3 王鴻奎;鞏杰;王新;劉東;;非肌性肌球蛋白Ⅱ-C在斑馬魚胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)[J];交通醫(yī)學(xué);2016年01期

4 郭櫻子;欒亞楠;周玉玲;白承連;任湘鵬;;低劑量氯氟氰菊酯對斑馬魚胚胎運(yùn)動(dòng)行為的影響[J];溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2016年07期

5 趙崇軍;田敬歡;倪媛媛;馮婭茹;代一航;王金鳳;樊嬌嬌;楊冉;馬志強(qiáng);林瑞超;;馬錢子對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2016年11期

6 劉迎;胡燕;姜蕾;潘波;秦涵淳;林勇;;6種表面活性劑對斑馬魚胚胎發(fā)育的毒性效應(yīng)[J];生態(tài)毒理學(xué)報(bào);2014年06期

7 何秋霞;董貞蘭;楚杰;孫桂金;韓利文;韓健;劉可春;;蘆薈大黃素對斑馬魚胚胎發(fā)育及運(yùn)動(dòng)行為學(xué)的毒性研究[J];山東科學(xué);2015年03期

8 陳怡君;蒲韻竹;顏慧;鐘玉緒;王卓;李春杰;查曉丹;趙寶全;劉萍;;冰片對斑馬魚胚胎發(fā)育的安全性評價(jià)[J];中國藥房;2014年19期

9 劉迎;胡燕;姜蕾;潘波;秦涵淳;林勇;;5種酰胺類除草劑對斑馬魚胚胎發(fā)育的毒性效應(yīng)[J];農(nóng)藥;2014年11期

10 王雪;彭維兵;王希敏;劉可春;陳錫強(qiáng);張?jiān)?;富馬酸二甲酯對斑馬魚胚胎早期發(fā)育的影響[J];動(dòng)物學(xué)雜志;2013年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 沈自慧;吳德生;郭昱嵩;;基于斑馬魚胚胎進(jìn)行化學(xué)品毒性評價(jià)的方法[A];2016年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2016年

2 陳錫強(qiáng);韓利文;王希敏;王思鋒;侯海榮;劉可春;;促滲劑氮酮對斑馬魚胚胎的透皮作用及其毒性影響(英文)[A];2012年中國藥學(xué)大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

3 張利軍;郭家彬;苑曉燕;史慧勤;趙君;束玉磊;彭雙清;;應(yīng)用斑馬魚胚胎和幼魚評價(jià)布洛芬的心臟毒性[A];2013年（第三屆）中國藥物毒理學(xué)年會暨藥物非臨床安全性評價(jià)研究論壇論文摘要[C];2013年

4 侯佳;桂永浩;張立鳳;王躍祥;宋后燕;鐘濤;;視黃酸缺乏對斑馬魚胚胎心臟發(fā)育的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次全國兒科中青年學(xué)術(shù)交流大會論文匯編（上冊）[C];2008年

5 常成;朱加進(jìn);孫啟;;瓶裝水對斑馬魚胚胎生長發(fā)育的影響[A];2017浙江省營養(yǎng)學(xué)會年會暨西湖營養(yǎng)學(xué)術(shù)論壇資料匯編[C];2017年

6 于永利;楊景峰;王思珍;董武;;高殘留農(nóng)藥福美雙對斑馬魚胚胎體節(jié)以及脊索的影響[A];持久性有機(jī)污染物論壇2010暨第五屆持久性有機(jī)污染物全國學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

7 巴雅斯胡;楊景峰;于永利;王思珍;董武;;高殘留農(nóng)藥代森鋅誘導(dǎo)斑馬魚胚胎脊索變形[A];持久性有機(jī)污染物論壇2011暨第六屆持久性有機(jī)污染物全國學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

8 楊維超;苑曉燕;張利軍;吳衛(wèi)東;彭雙清;;納米二氧化硅致斑馬魚胚胎發(fā)育毒性的初步研究[A];2014線粒體毒性與基于毒性通路的安全性評價(jià)新策略學(xué)術(shù)研討會暨中國毒理學(xué)會毒理學(xué)替代法與轉(zhuǎn)化毒理學(xué)專業(yè)委員會成立大會論文集[C];2014年

9 涂文清;徐超;劉維屏;;乙草胺對于斑馬魚胚胎在發(fā)育和免疫毒性方面的對映體選擇性[A];第四屆全國分子手性學(xué)術(shù)研討會暨2011綠色手性論壇論文摘要集[C];2011年

10 朱小山;朱琳;李燕;端正花;;富勒烯(C_(60))對斑馬魚胚胎發(fā)育毒性的初步研究[A];第三屆全國環(huán)境化學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前7條

1 實(shí)習(xí)生 楊陽;斑馬魚可為癌癥病人試藥[N];科技日報(bào);2017年

2 記者 張夢然;燃煤中發(fā)現(xiàn)未知潛在毒副產(chǎn)品[N];科技日報(bào);2017年

3 記者 劉霞;科學(xué)家繪出首個(gè)脊椎動(dòng)物發(fā)育藍(lán)圖[N];科技日報(bào);2008年

4 記者 陳丹;研究發(fā)現(xiàn)一些3D打印物品有毒[N];科技日報(bào);2015年

5 宗華 編譯;為細(xì)胞“立傳”[N];中國科學(xué)報(bào);2018年

6 記者 毛黎;2008年10大科學(xué)突破[N];科技日報(bào);2008年

7 本報(bào)駐日內(nèi)瓦記者 陳建;“中國創(chuàng)新”領(lǐng)跑日內(nèi)瓦發(fā)明展[N];經(jīng)濟(jì)日報(bào);2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 葛舒超;穩(wěn)態(tài)強(qiáng)磁場延遲斑馬魚早期發(fā)育[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2019年

2 楊帆;Cul4a通過上調(diào)scl和gata1表達(dá)促進(jìn)斑馬魚初級造血紅系發(fā)育[D];山東大學(xué);2019年

3 周作瓊;hprg1b基因的干細(xì)胞系建立及其作用研究[D];湖南師范大學(xué);2017年

4 黨W

本文編號：2728909