【摘要】：目的:杜蘭德線(巴基斯坦和阿富汗的邊界分界線)附近的哈扎拉人與中亞和東亞人有著廣泛的交往。哈扎拉人具有典型的蒙古人面部特征,他們自稱是公元13世紀(jì)前葉成吉思汗軍隊的后裔�？焖偻蛔�(rapidly mutating,RM)Y-STR和PowerPlex?Y23試劑盒(Promega公司,美國)廣泛應(yīng)用于Y染色體單倍型多態(tài)性分析,但是始終缺少巴基斯坦和阿富汗哈扎拉人的群體數(shù)據(jù)。先前基于有限數(shù)量的樣本數(shù)量的Y-STR進(jìn)行的研究表明,哈扎拉是蒙古人的后裔。關(guān)于哈扎拉斯是誰還在繼續(xù)的爭議有三種理論。第一個理論是“他們可能是蒙古土耳其人的起源,是成吉思汗在阿富汗留下的占領(lǐng)軍的后裔”。第二個理論可以追溯到庫山王朝時期,當(dāng)時阿富汗的巴米揚(yáng)是佛教文明的中心舞臺。這個理論的信徒支持他們的邏輯,他們說“哈扎拉人的面部結(jié)構(gòu)與該地區(qū)的佛教壁畫和雕像相似”。第三個也是最被接受的理論是“哈扎拉是混合種族”。因此,我們的目的是檢查所研究的27種Y-STR的潛在法醫(yī)有用性,并闡明哈扎拉種群的人口歷史。方法:總共采集了413份血液樣本,其中153份來自巴基斯坦俾路支省的哈扎拉鎮(zhèn)奎達(dá)(參與者是一項早期研究的一部分,并同意二次使用他們的DNA樣本),260份來自阿富汗的巴米揚(yáng)。該項目和樣品的采集獲得中國醫(yī)科大學(xué)倫理審查委員會的批準(zhǔn)。使用QIAamp?DNA Blood試劑盒(Qiagen,德國)提取基因組DNA。Yfiler?Plus試劑盒(Thermo Fisher Scientific)包含有27個位點(DYS19,DYS385a/b,DYS389I/II,DYS390,DYS391,DYS392,DYS393,DYS437,DYS438,DYS439,DYS448,DYS456,DYS458,DYS635,Y GATA H4,DYS460,DYS481,DYS533 DYF387S1a/b,DYS449,DYS518,DYS570,DYS576and DYS627)。使用ABI公司9700擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增體系為所推薦反應(yīng)體系的一半(12.5μl)。擴(kuò)增產(chǎn)物采用ABI3500(Applied Biosystems,美國)遺傳分析儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳,使用Gene Mapper v.3.2(Applied Biosystems,美國)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。54個樣品在經(jīng)過三個不同試劑盒(GoldenEye Y26,Microreader?Y29和Yfiler?Plus)驗證后,DYS448位點均依然表現(xiàn)為無效等位基因。采用巢式PCR對該基因座所在片段進(jìn)行擴(kuò)增以減少非特異性PCR產(chǎn)物。采用簡單計數(shù)法計算等位基因頻率。根據(jù)Nei's方法計算Y-STR的基因多樣性(gene diversity,GD),也就是單倍型多樣性(single plotype diversity,HD)。通過使用Goldeneye?26Y和Yfiler?Plus試劑盒使得Y-STR的檢出由起初的9位點,到11位點,到Powerplex Y的12位點,再到Y(jié)filer?的17位點和Powerplex Y 23的23位點直到現(xiàn)在的26和27位點。我們也計算了由Yfiler?Plus試劑盒新加入的3個基因座組成的單倍型的單倍型多樣性。根據(jù)不同單倍型計算分辨能力(discrimination capacity,DC)。根據(jù)ΣPi2計算匹配概率(MP),Pi是第i個單體型的頻率。利用分子生物學(xué)方差分析(AMOVA)和多維尺度分析(MDS)計算了哈扎拉人與世界其他人群的遺傳距離。這兩個分析都是使用YHRD在線工具(http://www.yhrd.org)基于Rst值進(jìn)行的。利用Mega7軟件構(gòu)建了基于Rst距離矩陣的哈扎拉人和參考群體的鄰接系統(tǒng)發(fā)育樹。使用Network4.1.1.2。(http://www.fluxus-engineering.com/sharenet.htm),導(dǎo)入哈扎拉人群23個Y STR數(shù)據(jù)(dy19,dy389ii-i,dy390,dy391,dy393,dy437,dy439,dy456,dy458,dy635,Y_GATA_H4,dy576,dy570,dy481,dy533,dy549,dy460,dy449,dy388)構(gòu)建單倍型的中介(median joining,MJ)網(wǎng)絡(luò)圖。對哈扎拉人、中亞、東亞、俄羅斯和亞洲西南部群體采用R語言進(jìn)行線性判別分析(LDA),并使用使用XLSTAT(http://www.xlstat.com/en/)計算STR間的相關(guān)性。結(jié)果:獲得了哈扎拉人413個男性個體的Y-STR單倍型。有54個樣品在DYS448位點顯示為無效等位基因。共檢出380種不同的單倍型。計算了哈扎拉人不同Y-STR基因座的等位基因頻率和GD值。27個Y-STR位點共檢出240個等位基因。DYF387S1在阿富汗和巴基斯坦的哈扎拉人群體中雜合度最高,分別為0.9242和0.8792。在阿富汗和巴基斯坦哈扎拉人中雜合度最高和最低的均為DYS449和DYS627,分別為0.8468、0.7949和0.3916、0.2383。將所有的哈扎拉人合并統(tǒng)計,DYF387S1雜合度最高,DYS437最低,分別為0.9257和0.4053。在阿富汗的哈扎拉人群體中,我們觀察到27個STRs上有240個不同的等位基因,而在巴基斯坦的153個哈扎拉人群體中,我們觀察到27個Y STRs上有188個等位基因,30個Y STRs上有204個等位基因。阿富汗哈扎拉人的等位基因頻率為0.0038~0.6654,巴基斯坦哈扎拉人的等位基因頻率為0.0065~0.8627。我們對7個層面的法醫(yī)學(xué)參數(shù)進(jìn)行了評估,分別是9個YSTRs基因座,11個Y-STRs基因座,PowerPlex Y12 STRs基因座,Y-filer 17STRs基因座,Y21STRs基因座,Y27 Yfiler Plus基因座,以及6個快速突變YSTRs基因座。在巴基斯坦的哈扎拉人中分辨能力(DC)從47.06%(9 Y-STRs位點)到99.35%(Y27 Yfiler plus位點),單倍型多樣性(HD)從0.9316(9 Y-STRs位點)到0.9999(Y27 Yfilerplus位點)。在阿富汗的哈扎拉人中分辨能力(DC)從41.15%(9 Y-STRs位點)到88.46%(Y27 Yfiler plus位點),單倍型多樣性(HD)從0.9708(9 Y-STRs位點)到0.9937(Y27 Yfilerplus位點)。將哈扎拉人數(shù)據(jù)整合之后,分辨能力(DC)從40.19%(9 Y-STRs位點)到92%(Y27 Yfiler plus位點),單倍型多樣性(HD)從0.9689(9 Y-STRs位點)到0.9992(Y27 Yfilerplus位點)。有意思的是,Yfiler plus試劑盒中包含的6個快速突變Y STRs檢測到較高的單倍型多樣性。在巴基斯坦哈扎拉人,在153個單倍型中共檢測到139(90.84%)種不同單倍型,其中131(85.62%)種單倍型只出現(xiàn)過一次。而在阿富汗哈扎拉人中,在260個單倍型中共檢測到188(72.30%)種不同單倍型,其中152(58.46%)種單倍型只出現(xiàn)過一次。通過PPY 23位點顯示,6個快速突變Y STRs多樣性幾乎相同。為了評估巴基斯坦和阿富汗的哈扎拉人與居住在其他國家和鄰近地區(qū)人口之間的關(guān)系,我們通過計算遺傳距離,將我們的數(shù)據(jù)與YHRD中其他人口進(jìn)行了比較。AMOVA結(jié)果表明,哈扎拉人與南亞人中,阿富汗人(Rst=0.0381),阿富汗哈扎拉(Rst=0.0473)和來自伊朗阿爾達(dá)比勒的土耳其人(Rst=0.0868)遺傳距離較近;而與伊朗亞茲德的的瑣羅亞斯德教人(Rst=0.4451)、印度特里普拉邦的Riang人(Rst=0.4988)和印度賈坎德邦的蒙怲人(Rst=0.5324)遺傳距離較遠(yuǎn)。在東亞、中亞和俄羅斯聯(lián)邦,哈扎拉人與哈薩克斯坦的哈薩克人(Rst=0.0399)最近,其次是中國吐魯番的維吾爾族人(Rst=0.0523)還有中國甘肅的黃色維吾爾族人(Rst=0.0603);而與中國湖南苗族人(Rst=0.3579),中國西雙版納傣族人(Rst=0.3728)和中國廣東連南瑤族人(Rst=0.4597)遺傳距離較大。我們還構(gòu)建了基于Fst值的鄰接系統(tǒng)進(jìn)化樹(NJ),用于評估哈扎拉人和之前發(fā)表的來自南亞的93個種群之間的進(jìn)化關(guān)系。來自巴基斯坦和阿富汗的哈扎拉人與來自阿富汗的阿富汗人、來自巴基斯坦開伯爾-普赫圖赫瓦省的普什圖人聚集在一起。此后,我們將哈扎拉人與先前發(fā)表的49個來自東亞(中國、日本、韓國和蒙古)、中亞和俄羅斯聯(lián)邦的人群進(jìn)行了比較。哈扎拉人與哈薩克人、維吾爾人、吉爾吉斯人和蒙古人聚集在一起。使用在線Y染色體單倍群預(yù)測軟件(http://www.nevgen.org/)對Y染色體單倍群進(jìn)行預(yù)測。C2(以前稱為c3*簇)是巴基斯坦和阿富汗哈扎拉人最常見的單倍群。由MDS散點圖中可以看出,阿富汗的哈扎拉人與阿富汗的阿富汗人和阿富汗北部的帕坦人更近,這與Haber等人的研究結(jié)果一致。巴基斯坦的哈扎拉人與哈薩克人和蒙古人更接近,這與之前的研究結(jié)果相似。結(jié)論:總之,哈扎拉種群的遺傳變異及其與幾個相關(guān)種群的比較是使用各種統(tǒng)計檢驗進(jìn)行的。這表明哈扎拉人口與中亞和蒙古人口密切相關(guān)。在以前的研究中,星團(tuán)概況為10-16-25-10-11-13-14-12-11-11-11-12-8-10-10,為位點DYS389I-DYS389b-DYS390-DYS391-DYS392-DYS393-DYS388,DYS425,DYS426,DYS434,DYS435,DYS436,DYS437,DYS438,DYS439。在目前的研究中,在目前的研究中,最常見的單倍型是在43個個體中發(fā)現(xiàn)的15-13-29-24-10-11-13-14-11-12位點DYS19-DYS389I-DYS389IIDYS390-DYS391-DYS392-DYS393-DYS437-DYS438-DYS439,而在9個個體中發(fā)現(xiàn)的14-13-29-8-11-13-14-11-11,在8個個體中發(fā)現(xiàn)的15-13-29-24-11-11-13-14-11-12。這些單倍型是蒙古人和哈薩克人中最常見的單倍型。這10個Y STR的等位頻率幾乎與哈薩克斯坦中亞的哈薩克族人口相似,并且與內(nèi)蒙古的蒙古人口相似。我們的研究結(jié)果有助于破譯巴基斯坦哈扎拉人口的起源,并支持他們有哈薩克和蒙古血統(tǒng)的觀點。法醫(yī)參數(shù)計算表明,在法醫(yī)案件工作的潛在應(yīng)用中具有較高的辨別鑒別能力。我們在DYS448位點檢測到54個無效等位基因,相當(dāng)于該位點13%的無效等位基因相當(dāng)于該位點等位基因的16%。這是迄今為止人口中DYS448無效等位基因的最高百分比。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：D919

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本文編號：2688553