發(fā)布時(shí)間：2017-03-25 04:11

  本文關(guān)鍵詞：Hippo-TAZ信號(hào)通路在調(diào)控模擬微重力效應(yīng)下BMSCs成骨分化中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：空間微重力效應(yīng)下人體幾乎所有生理系統(tǒng)都會(huì)受到不同程度的影響,其中骨質(zhì)丟失是宇航員遇到的嚴(yán)重問(wèn)題之一。一般認(rèn)為該效應(yīng)由骨形成減少及過(guò)度骨吸收導(dǎo)致。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是一類主要存在于骨髓腔內(nèi)的成體干細(xì)胞,具有多向分化能力,是成骨細(xì)胞的主要來(lái)源細(xì)胞之一。許多研究證實(shí)微重力效應(yīng)會(huì)阻礙BMSCs成骨分化,但促進(jìn)其成脂分化。鑒于微重力效應(yīng)下BMSCs成骨分化受阻部分導(dǎo)致了骨形成減少,且該現(xiàn)象的機(jī)理仍不明晰,因此深入探究微重力效應(yīng)下BMSCs成骨分化行為及其相關(guān)的分子機(jī)理,將對(duì)解釋微重力效應(yīng)下骨質(zhì)丟失提供理論依據(jù),對(duì)預(yù)防及干預(yù)空間環(huán)境下的骨質(zhì)丟失提供新思路。TAZ(Transcriptional coactivator with PDZ-binding motif)是Hippo信號(hào)的核心因子之一。作為轉(zhuǎn)錄共激活因子,可與成骨分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Runx2(Runt-related transcription factor 2)結(jié)合,促進(jìn)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄。此外TAZ被鑒定為力學(xué)信號(hào)響應(yīng)分子,細(xì)胞外力學(xué)信號(hào)及細(xì)胞內(nèi)骨架張力都對(duì)TAZ的激活有顯著影響。因此,本實(shí)驗(yàn)首先利用全骨髓貼壁法從SD大鼠后肢股骨分離BMSCs;通過(guò)地基旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器模擬微重力效應(yīng)(Simulated microgravity,SMG)并考察了SMG對(duì)BMSCs成骨分化的影響;進(jìn)一步檢測(cè)了SMG對(duì)轉(zhuǎn)錄共激活因子TAZ激活的影響,并觀察了F-actin在SMG下的重構(gòu)特點(diǎn);通過(guò)細(xì)胞松弛素B(Cyt B)及Jasplakinolide(Jasp)重構(gòu)F-actin并研究F-actin的解聚及聚合對(duì)BMSCs成骨分化及TAZ激活的影響;最后探究SMG效應(yīng)下Jasp及溶血磷脂酸(LPA)對(duì)TAZ激活及BMSCs成骨分化的干預(yù)效果。結(jié)果顯示,細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定結(jié)果證實(shí)分離得到的細(xì)胞為BMSCs;SMG顯著抑制BMSCs成骨分化相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá),并抑制TAZ的表達(dá)及其核內(nèi)定位;F-actin在SMG效應(yīng)下出現(xiàn)了明顯解聚現(xiàn)象;Cyt B及Jasp處理實(shí)驗(yàn)證實(shí)解聚F-actin會(huì)顯著抑制TAZ核內(nèi)定位和BMSCs成骨分化,且該效應(yīng)不通過(guò)TAZ上游激酶LATS介導(dǎo);Jasp及LPA都可通過(guò)F-actin-TAZ維持SMG效應(yīng)下BMSCs成骨分化。據(jù)此本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了SMG對(duì)BMSCs成骨分化的抑制作用,并證實(shí)了SMG效應(yīng)通過(guò)F-actin解聚阻礙TAZ激活從而抑制BMSCs成骨分化的機(jī)理,更重要的是,發(fā)現(xiàn)Jasp及LPA可通過(guò)F-actin-TAZ有效維持SMG下BMSCs成骨分化。本研究工作揭示了Hippo-TAZ在SMG效應(yīng)下BMSCs成骨分化中的作用,闡明了F-actin通過(guò)TAZ調(diào)控BMSCs成骨分化的機(jī)理,并提出了針對(duì)骨質(zhì)丟失可能的干預(yù)靶點(diǎn),為微重力相關(guān)疾病的預(yù)防和治療提供了理論參考
【關(guān)鍵詞】：模擬微重力 BMSCs TAZ 細(xì)胞骨架 成骨分化
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R852.22
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-10
• 英文縮寫及中文對(duì)照表10-11
• 1 緒論11-16
• 1.1 研究背景11-14
• 1.1.1 微重力效應(yīng)下的骨質(zhì)丟失11
• 1.1.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞11-12
• 1.1.3 Hippo-TAZ信號(hào)通路12-14
• 1.2 研究目的、意義及主要內(nèi)容14-16
• 1.2.1 研究目的和意義14-15
• 1.2.2 主要研究?jī)?nèi)容15-16
• 2 微重力效應(yīng)模擬裝置16-19
• 2.1 引言16
• 2.2 微重力效應(yīng)模擬裝置16-18
• 2.3 討論18
• 2.4 本章小結(jié)18-19
• 3 SMG對(duì)BMSCs成骨分化及TAZ表達(dá)的影響19-36
• 3.1 引言19-20
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料20-22
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物20
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器20
• 3.2.3 主要試劑及溶液配制20-22
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法22-29
• 3.3.1 全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)BMSCs22-23
• 3.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原23
• 3.3.3 BMSCs向成骨細(xì)胞的誘導(dǎo)分化23
• 3.3.4 SMG效應(yīng)下BMSCs的培養(yǎng)23
• 3.3.5 RT-PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)變化23-25
• 3.3.6 Real-time PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)變化25-26
• 3.3.7 堿性磷酸酶酶活檢測(cè)26-27
• 3.3.8 茜素紅染色27
• 3.3.9 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)變化27-29
• 3.3.10 siRNA沉默靶基因29
• 3.3.11 統(tǒng)計(jì)分析29
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-34
• 3.4.1 BMSCs鑒定結(jié)果29-30
• 3.4.2 BMSCs成骨分化誘導(dǎo)30
• 3.4.3 SMG抑制BMSCs成骨分化30-31
• 3.4.4 SMG抑制TAZ的表達(dá)31-32
• 3.4.5 SMG效應(yīng)下LPA通過(guò)上調(diào)TAZ促進(jìn)BMSCs成骨分化32-33
• 3.4.6 SMG效應(yīng)下LPA通過(guò)Rho-Rock通路上調(diào)TAZ的表達(dá)33-34
• 3.5 討論34-35
• 3.6 本章小結(jié)35-36
• 4 SMG效應(yīng)下F-actin調(diào)控BMSCs成骨分化的機(jī)理36-52
• 4.1 引言36-37
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料37-39
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物37
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器37
• 4.2.3 主要試劑及溶液配制37-39
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法39-41
• 4.3.1 MTT檢測(cè)細(xì)胞活性39
• 4.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡39
• 4.3.3 Real-time PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)變化39
• 4.3.4 堿性磷酸酶酶活檢測(cè)39
• 4.3.5 茜素紅染色39
• 4.3.6 核蛋白的提取39-40
• 4.3.7 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)變化40
• 4.3.8 siRNA沉默靶基因40
• 4.3.9 F-actin熒光染色及分維形數(shù)分析40-41
• 4.3.10 統(tǒng)計(jì)分析41
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-49
• 4.4.1 F-actin的解聚通過(guò)阻礙TAZ核內(nèi)定位抑制BMSCs成骨分化41-44
• 4.4.2 SMG加速F-actin解聚及抑制TAZ核內(nèi)定位44-45
• 4.4.3 SMG下Jasp通過(guò)F-actin-TAZ通路維持BMSCs成骨分化45-46
• 4.4.4 SMG下LPA通過(guò)F-actin-TAZ通路維持BMSCs成骨分化46-49
• 4.5 討論49-51
• 4.6 本章小結(jié)51-52
• 5 結(jié)論與展望52-53
• 5.1 主要結(jié)論52
• 5.2 論文的不足之處及后續(xù)工作的展望52-53
• 致謝53-54
• 參考文獻(xiàn)54-61
• 附錄61
• A 作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄61
• B 作者在攻讀碩士學(xué)位期間參加的學(xué)術(shù)會(huì)議61

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳哲;Hippo-TAZ信號(hào)通路在調(diào)控模擬微重力效應(yīng)下BMSCs成骨分化中的作用研究[D];重慶大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：Hippo-TAZ信號(hào)通路在調(diào)控模擬微重力效應(yīng)下BMSCs成骨分化中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：266643