【摘要】：第一部分建立放療后EA.Hy926細(xì)胞因子持續(xù)分泌模型 目的：建立常規(guī)分割照射后,血管內(nèi)皮細(xì)胞持續(xù)分泌細(xì)胞因子TGF-β1模型。 方法：2Gy分割劑量的X線(每天一次,每周五次,總計(jì)28Gy)照射指數(shù)生長期的人臍靜脈融合細(xì)胞株EA.Hy926,照射野為30x30cm,源皮距為100cm。設(shè)置三個(gè)平行樣本,在末次照射后1月,2月,3月,4月,5月提取mRNA,以未照射組為對照組,采用RT-PCR方法摸索各基因的最佳實(shí)驗(yàn)條件,實(shí)時(shí)定量qRT-PCR (quantitive Real Time-Polymerase Chain Reaction)方法檢測TGF-β1mRNA水平的變化。于末次照射后1月,2月,3月,4月,5月提取細(xì)胞總蛋白,采用western bloting法測定TGF-β1蛋白水平的表達(dá)情況。 結(jié)果：經(jīng)2Gy×14次放療后1月到5月,人臍靜脈血融合細(xì)胞株EA.HyY926細(xì)胞TGF-β1mRNA,與對照相比,表達(dá)均升高(P0.05)。在蛋白水平,與對照組相比,TGF-β1蛋白持續(xù)升高(P0.05)。 結(jié)論：常規(guī)分割照射血管內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞因子TGF-β1于照射后持續(xù)表達(dá)。TGF-β1與血管內(nèi)皮細(xì)胞纖維化,血管狹窄和閉塞等晚期放射反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。提示細(xì)胞因子可作為放射反應(yīng)的作用靶點(diǎn),預(yù)防晚期放射反應(yīng)的發(fā)生。 第二部分卡托普利與放療相互作用對血管內(nèi)皮細(xì)胞EA.Hy926的影響 目的：探討血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)抑制劑卡托普利(Cap)作用于不同放療時(shí)間點(diǎn)的EA.Hy926細(xì)胞,細(xì)胞因子AngⅡ、NF-κB和TGF-β1等變化情況。 方法：MTT法檢測Cap作用于EA.Hy926細(xì)胞最大有效濃度為10-3mol/1。實(shí)驗(yàn)分組為①細(xì)胞中加入Cap再進(jìn)行2Gy×14次放療；②細(xì)胞放療2Gy×7次加入Cap再進(jìn)行2Gy×7次放療；③細(xì)胞2Gy×14次放療后加入Cap。對照組為④完全未照射組；⑤照射前僅加入卡托普利組；⑥照射2Gy×14次組。照射條件為：6MV X線(每天一次,每周五次,總計(jì)28Gy),分割劑量2Gy,照射野為30x30cm,源皮距為100cm,劑量率為200cGy/min。設(shè)置三個(gè)平行樣本,在末次照射后提�。簃RNA,以未照射組為對照組,采用RT-PCR方法摸索各基因的最佳實(shí)驗(yàn)條件,實(shí)時(shí)定量qRT-PCR方法檢測TGF-β1mRNA水平的變化。于末次照射后提取細(xì)胞總蛋白,采用western bloting法測定TGF-β1、Iκ-Bα蛋白水平的表達(dá)情況。于末次照射后取細(xì)胞上清,放射免疫法檢測AngⅡ表達(dá)情況。于末次照射后取細(xì)胞核蛋白,電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMS A法)檢測細(xì)胞NF-κB活性情況。 結(jié)果：卡托普利不論在放療前、中、后作用于EA.Hy926細(xì)胞,相對于空白對照組而言,在mRNA水平上,TGF-β1表達(dá)升高,但是未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；相對于單純放療組而言,TGF-β1表達(dá)下降,但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在蛋白水平,通過western bloting檢測,單純放療后組較空白對照組Iκ-Ba表達(dá)升高,NF-κB轉(zhuǎn)錄活性增加�？ㄍ衅绽饔媒M相對空白對照組IK-Bα表達(dá)降低；相對于單純放療組Iκ-Bα表達(dá)降低。 結(jié)論：血管緊張素Ⅱ抑制劑卡托普利通過阻斷血管緊張素Ⅱ的表達(dá),進(jìn)而削弱NF-κB轉(zhuǎn)錄活性,減少TGF-β1表達(dá),從而使細(xì)胞纖維化發(fā)生減少。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R730.55

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2585769