【摘要】：目的：放射性肺損傷是胸部腫瘤放射治療的常見(jiàn)并發(fā)癥,其發(fā)病機(jī)制尚不清楚,缺乏有效的預(yù)測(cè)指標(biāo)和治療措施,成為胸部腫瘤得到有效治療的難題。新近的研究發(fā)現(xiàn)microRNA也參與輻射誘導(dǎo)的生物學(xué)反應(yīng)過(guò)程。而miRNA與放射性肺損傷發(fā)生演變的關(guān)系及其分子生物機(jī)制尚未在PubMed及中國(guó)期刊網(wǎng)檢索到相關(guān)報(bào)道。為此，我們探討了大鼠放射性肺損傷發(fā)生發(fā)展過(guò)程中mRNA和miRNA分子表達(dá)譜差異及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，旨在為進(jìn)一步闡明放射性肺損傷發(fā)生的分子機(jī)制，并探索miRNA在放射性肺損傷中的作用。 方法：建立單次大劑量（20GY）致大鼠右半胸放射性肺損傷模型，動(dòng)態(tài)觀察放射性肺損傷病理變化演變過(guò)程(早期2w,中期12w,晚期26w)，用全基因表達(dá)譜芯片和miRNA芯片篩選大鼠放射性肺損傷的差異表達(dá)基因，并對(duì)其進(jìn)行功能分析和關(guān)聯(lián)分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證芯片結(jié)果。在肺泡細(xì)胞模型上，通過(guò)轉(zhuǎn)染miRNA（miRNA21/Let-7）模擬物和阻遏物，觀察TGF-β信號(hào)通路關(guān)鍵基因(SMAD7,TGFBR2，TGFBR1)RNA及蛋白的表達(dá)變化，驗(yàn)證miRNA與關(guān)聯(lián)靶基因的調(diào)控關(guān)系。 結(jié)果：RNA表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)2183個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，2917個(gè)基因表達(dá)下調(diào)，在肺損傷早、中、晚期有表達(dá)相同的基因，也有各期特異的基因。RNA表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)的信號(hào)通路分析顯示，細(xì)胞因子，趨化因子，TGF-β等信號(hào)通路與放射性肺損傷顯著相關(guān)。miRNA表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)15個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào)，8個(gè)miRNA下調(diào)。mRNA-microRNA關(guān)聯(lián)分析提示：輻射誘導(dǎo)表達(dá)miRNA與輻射誘導(dǎo)表達(dá)mRNA之間存在負(fù)調(diào)控關(guān)系，其中TGF-β信號(hào)通路及相關(guān)miRNA21/Let-7與放射性損傷發(fā)展過(guò)程顯著相關(guān)。通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了miRNA21/Let-7與TGF-β信號(hào)通路關(guān)聯(lián)基因的調(diào)控關(guān)系。 結(jié)論：利用基因芯片檢測(cè)方法可高通量的篩選出大鼠放射性肺損傷發(fā)生發(fā)展演變過(guò)程中差異表達(dá)基因譜，結(jié)果表明輻射對(duì)細(xì)胞的作用涉及到多靶點(diǎn)，多基因，多途徑及多階段。放射性肺損傷的發(fā)生發(fā)展過(guò)程是一個(gè)多細(xì)胞，多基因復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)調(diào)解途徑，差異表達(dá)的miRNA可能參與放射性肺損傷的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，這為進(jìn)一步揭示放射性肺損傷發(fā)生的分子機(jī)制提供了依據(jù)。深入研究這些輻射相關(guān)基因,可能為放射病防治和腫瘤放療提供新的靶點(diǎn)和方法。
【圖文】：

防止大鼠窒息，，將大鼠尾巴夾在左手無(wú)名指固定在左手中。2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉空針抽取麻醉劑 0.1%氯胺酮，按 0.2ml/100g 定量腔部位刺入，感到突破感后即進(jìn)入腹腔，先用麻醉藥總生命體征的變化，如己達(dá)到所需麻醉的程度，則余下注入。2.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的固定麻醉后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保持俯臥位，雙上肢向前，雙下用棉線將四肢固定于木板上。2.2.模擬定位：在常規(guī) X 線模擬機(jī)下確定照射野(右側(cè)半胸照射)并下界為右肺底，內(nèi)側(cè)界為胸骨正中線，外側(cè)界至右側(cè)胸

圖 3-4 示大鼠 CT 模擬定位及照射劑量計(jì)算2.4 大鼠照射過(guò)程：以直線加速器產(chǎn)生的 6MV－X 線照射, 照射野均給予前后兩野對(duì)穿。源皮距98.0cm ，深度為 2.0cm，劑量為 20Gy，能量為 6MV，劑量率為 500cGy/min。A組大鼠一次性照射 20 Gy; B 組大鼠麻醉后不進(jìn)行照射。如圖 5.6
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R730.55

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2530639