【摘要】：目的:本研究旨在構(gòu)建攜帶人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因的慢病毒載體,探索HG F慢病毒轉(zhuǎn)染脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSC)的方法。方法:應(yīng)用PCR法從帶有HGF基因的質(zhì)粒上釣取目的基因,克隆到GV287載體中。將重組GV287-HGF載體質(zhì)粒和慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,測(cè)定病毒滴度,并轉(zhuǎn)染ADSC。結(jié)果:HGF基因PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果與預(yù)期大小一致,重組GV287-HGF質(zhì)粒PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果正確,酶切后產(chǎn)物測(cè)序分析所得結(jié)果與目的基因序列一致,含有HGF基因的重組慢病毒構(gòu)建正確。通過(guò)ELISA法測(cè)得病毒滴度為5×108TU/ml。HG F重組慢病毒轉(zhuǎn)染ADSC的最佳感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection,MOI)值為50。結(jié)論:本研究構(gòu)建表達(dá)人HGF的慢病毒載體并成功轉(zhuǎn)染ADSC,為進(jìn)一步研究過(guò)表達(dá)HGF的ADSC,治療放射引起的骨髓及重要臟器損傷奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim: to construct lentiviral vector carrying human hepatocyte growth factor (hepatocyte growth factor,HGF) gene and explore the method of HGF lentivirus transfection into adipose-derived mesenchymal stem cells (adipose derived mesenchymal stem cells,ADSC). Methods: the target gene was obtained from plasmid containing HGF gene by PCR method and cloned into GV287 vector. The recombinant GV287-HGF vector plasmid and lentivirus packaging plasmid were co-transfected into 293T cells to determine the virus titer and transfect ADSC.. Results: the results of electrophoresis of PCR products of HGF gene were consistent with the expected size. The results of electrophoresis of recombinant GV287-HGF plasmid PCR products were correct. The result of sequencing analysis after restriction endonuclease digestion was consistent with the sequence of the target gene. The recombinant lentivirus containing HGF gene was constructed correctly. The optimal complex (multiplicity of infection,MOI value of the recombinant lentivirus transfected with 5 脳 108TU/ml.HG F lentivirus was 50. The ELISA assay showed that the titer of the virus was 5 脳 (multiplicity of infection,MOI F recombinant lentivirus. Conclusion: in this study, lentiviral vector expressing human HGF was constructed and successfully transfected into ADSC, to lay a foundation for further study on the treatment of radiation-induced bone marrow and important organ injury by HGF-expressing ADSC,.
【作者單位】： 北京大學(xué)人民醫(yī)院北京大學(xué)血液病研究所;
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2012BAI138B03) 國(guó)家自然科學(xué)基金(81270643) 教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(20120001110026) 北京市自然科學(xué)基金(7132194) 北京市科技計(jì)劃項(xiàng)目(Z111107058811024)
【分類號(hào)】：R730.55

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6 游q，

本文編號(hào)：2469213