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室溫下豚鼠過敏反應(yīng)死亡組織和血清中IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶的變化

發(fā)布時(shí)間:2018-04-29 03:40

  本文選題:法醫(yī)病理學(xué) + 過敏反應(yīng)死亡動物模型。 參考:《南方醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文


【摘要】:研究背景 過敏反應(yīng)(anaphylaxis)是機(jī)體受到同一抗原再次刺激后突然發(fā)生的一種嚴(yán)重的、可致命性的、系統(tǒng)性的、免疫活性物質(zhì)介導(dǎo)的高敏反應(yīng)。過敏反應(yīng)死亡(anaphylactic death),指發(fā)生過敏性反應(yīng)導(dǎo)致的突然死亡。引起過敏反應(yīng)死亡的原因,主要為過敏性休克,其他還有喉頭水腫、支氣管痙攣、肺水腫血管性水腫等。過敏性反應(yīng)屬于Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)(type I hypersensitivity reaction),是機(jī)體再次受到同一變應(yīng)原刺激,引起體內(nèi)已經(jīng)結(jié)合特異性IgE的高敏狀態(tài)的肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞等細(xì)胞主動脫顆粒,從而分泌一系列的具有生物活性的化學(xué)介質(zhì)(如組胺、白三烯、前列腺素、血小板活化因子、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子等)和酶(如類胰蛋白酶、類糜蛋白酶、髓過氧化物酶等),同時(shí)多種細(xì)胞因子(如IL-4、IL-5、 IL-6、TNF-a等)也從細(xì)胞釋放出來,上述介質(zhì)、酶和細(xì)胞因子作用于效應(yīng)組織可引起毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)、小血管擴(kuò)張、平滑肌收縮、腺體分泌增加及嗜酸性粒細(xì)胞增多和浸潤等,從而使有效血容量減少導(dǎo)致休克發(fā)生,喉頭水腫、支氣管收縮使呼吸道狹窄導(dǎo)致窒息。速發(fā)型的過敏反應(yīng)是臨床常見的急癥之一,發(fā)病突然,難以預(yù)見,常危急生命。當(dāng)前美國流行病學(xué)調(diào)查資料顯示,每年約有1500人死于過敏反應(yīng),過敏反應(yīng)的終身患病率約在0.05%-2.0%之間,而且并未包括未記錄的、未診斷的、診斷錯(cuò)誤的病例。我國人群過敏反應(yīng)的發(fā)病率和患病率以及死于過敏反應(yīng)的人數(shù)暫時(shí)未有具體的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。法醫(yī)學(xué)鑒定實(shí)踐中,過敏反應(yīng)死亡尸檢時(shí)并無特異性的病理形態(tài)學(xué)改變,要做出過敏性急死的法醫(yī)學(xué)鑒定診斷,必須在排除自身性疾病、中毒及其他暴力性死亡原因的基礎(chǔ)上,結(jié)合過敏原接觸史、臨床癥狀、病理學(xué)資料和實(shí)驗(yàn)輔助檢查資料才可做出診斷。近年來,國內(nèi)外學(xué)者對血清總IgE、組胺、肥大細(xì)胞類胰蛋白酶、類糜蛋白酶、白三烯、血栓素B2、P物質(zhì)等于過敏反應(yīng)的關(guān)系做不少研究,關(guān)于上述物質(zhì)在體外保存條件下的穩(wěn)定性研究也有不少,然而由于死后尸體內(nèi)存在細(xì)胞溶解和化學(xué)降解,上述物質(zhì)在死后尸體血液中的穩(wěn)定性和含量可能有所變化。 目的 法醫(yī)尸體解剖一般在死后一天到數(shù)天不等,那么過敏反應(yīng)死亡血清中過敏反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)的死后變化如何?有報(bào)道類胰蛋白酶在非過敏反應(yīng)死亡(如嚴(yán)重外傷或心肌梗死)的尸體血清中含量隨死亡時(shí)間延長有增加的趨勢。有研究顯示過敏反應(yīng)死亡豚鼠在冷凍的條件下,48h內(nèi)血清和肺組織中IgE隨死后時(shí)間延長無明顯變化。國內(nèi)外研究多為室溫保存下體外或低溫保存下體內(nèi)血清中相關(guān)指標(biāo)的研究,而在室溫條件下尸體血液或組織中的IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶濃度隨死亡時(shí)間變化的研究未見系統(tǒng)報(bào)道。前期實(shí)驗(yàn)參照混合人血清誘發(fā)豚鼠過敏反應(yīng)死亡模型并適當(dāng)改良,通過觀察動物行為反應(yīng)、病理學(xué)技術(shù)和ELISA測定血清總IgE和類胰蛋白酶含量證實(shí)過敏反應(yīng)死亡豚鼠模型的成功建立。在成功建立動物模型的前提下,利用ELISA測定豚鼠血清內(nèi)IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶的含量,探討IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶在室溫條件下豚鼠過敏反應(yīng)死亡后24h內(nèi)的變化情況。 方法 1、混合人血清誘發(fā)豚鼠過敏反應(yīng)死亡模型的改良和過敏反應(yīng)行為的觀察 清潔級雄性豚鼠,共74只,體重250-300g,室溫(24±2)℃,相對濕度為40%-50%,分籠飼養(yǎng),給予標(biāo)準(zhǔn)飼料和飲用水,每天12h日光燈照明,晝夜循環(huán)。將豚鼠隨機(jī)分成原模型實(shí)驗(yàn)組25只和8只陰性對照組,改良模型實(shí)驗(yàn)組25只、8只陰性對照組和8只非致敏對照組。豚鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后注射過敏原致敏。原模型實(shí)驗(yàn)組豚鼠后爪掌皮內(nèi)注射過敏原0.15ml,致敏并置于室溫環(huán)境下飼養(yǎng)3周后,心內(nèi)注射1ml過敏原稀釋液,誘發(fā)過敏反應(yīng),陰性對照組以0.9%的生理鹽水代替過敏原,方法和劑量同實(shí)驗(yàn)組。改良模型實(shí)驗(yàn)組豚鼠分別在第1天和第3天在豚鼠雙側(cè)后爪掌皮內(nèi)注射過敏原各0.1ml,陰性對照組和非致敏對照組以0.9%的生理鹽水代替,方法、劑量同改良模型組,第二次皮內(nèi)注射過敏原并室溫環(huán)境下飼養(yǎng)2周后,足背靜脈注射1ml稀釋的過敏原,誘發(fā)過敏反應(yīng),陰性對照組同種方式注射等量的生理鹽水,非致敏對照組同種方式注射等量的過敏原稀釋液。兩模型實(shí)驗(yàn)組未發(fā)生死亡的豚鼠和所有對照組觀察12h后均頸椎脫臼處死。 建模過程中觀察原模型實(shí)驗(yàn)組、改良模型實(shí)驗(yàn)組和各對照組豚鼠的行為表現(xiàn),豚鼠死后進(jìn)行解剖,觀察器官大體改變并用HE染色觀察豚鼠喉頭、氣管、肺和胃腸道的病理學(xué)改變,利用ELISA測定實(shí)驗(yàn)組和對照組豚鼠血清總IgE和類胰蛋白酶含量。 2、ELISA測定室溫條件下體外保存血清、豚鼠尸體內(nèi)血清及肺臟和胃壁組織總IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶含量變化。 (1)室溫環(huán)境下體外保存的血清中IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶含量測定:0h實(shí)驗(yàn)組解剖動物所得的全部血液靜置至凝固后離心取出血清,每例血樣本均分成4份,其中一份作為0h的血清樣本保存于-80℃至檢測使用,另外3份存放于室溫環(huán)境下,并分別放置1d、2d和3d后測定血清總IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶的含量。 (2)豚鼠尸體內(nèi)血清中總IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶含量測定:114只豚鼠隨機(jī)分成Oh、2h、4h、8h、12h和24h6個(gè)時(shí)間組,每個(gè)時(shí)間組分為11只實(shí)驗(yàn)組和8只對照組。全部豚鼠死亡后均在室溫環(huán)境下置于定制的含絲網(wǎng)的盒子,按時(shí)間分組進(jìn)行動物解剖并取血,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定24h內(nèi)豚鼠血清總IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶含量的變化。 (3)豚鼠肺臟、胃壁組織中的IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶含量:改良模型實(shí)驗(yàn)組和對照組0h的6對豚鼠解剖后分別取部分肺臟和胃壁組織稱重并用生理鹽水清洗干凈,反復(fù)凍融4次后于-80℃冷凍保存?zhèn)溆谩?shí)驗(yàn)前器官組織解凍,每份組織精確稱重并加適量蒸餾水后研磨勻漿,離心后取上清,ELISA測定肺臟和胃壁組織中IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶的含量。 結(jié)果 1、18只改良模型實(shí)驗(yàn)組組豚鼠和13只原模型實(shí)驗(yàn)組豚鼠在注射過敏原后相對安靜,1min左右逐漸出現(xiàn)甩頭、打噴嚏,前爪搔抓鼻部及頭部,四肢肌肉抽搐偶爾出現(xiàn)蹦跳,出現(xiàn)身體平衡性下降后側(cè)倒在地,呼吸急促,鼻尖部皮膚及口唇周圍粘膜發(fā)紺,口腔、鼻腔水樣分泌物增多,出現(xiàn)深大呼吸,部分豚鼠出現(xiàn)二便失禁,最后呼吸停止,心跳維持跳動數(shù)分鐘后停止。改良模型實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)反應(yīng)的時(shí)間相對原模型實(shí)驗(yàn)組推遲4min左右。2只改良模型實(shí)驗(yàn)組和1只原模型實(shí)驗(yàn)組豚鼠過敏反應(yīng)癥狀輕微,約20min后恢復(fù)正常。改良模型實(shí)驗(yàn)組豚鼠過敏反應(yīng)死亡發(fā)生率為75%,而原模型實(shí)驗(yàn)組為54.2%。發(fā)生過敏反應(yīng)死亡的豚鼠,鏡下可見喉頭水腫,嚴(yán)重肺氣腫,全身臟器淤血,大部分豚鼠喉頭、氣管、支氣管及胃腸粘膜下可見較多嗜酸性粒細(xì)胞浸潤;原模型實(shí)驗(yàn)組及其對照組全部出現(xiàn)心包積血,5只豚鼠發(fā)生嚴(yán)重心包填塞死亡。原模型實(shí)驗(yàn)組與陰性對照組血清總IgE含量比較,P0.05,認(rèn)為兩者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,原模型實(shí)驗(yàn)組與改良模型實(shí)驗(yàn)組血清總IgE含量比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=16.68,P0.001);改良模型實(shí)驗(yàn)組與原模型實(shí)驗(yàn)組血清類胰蛋白酶含量比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=18.268,P0.001),即改良模型實(shí)驗(yàn)組血清類胰蛋白酶含量升高的更明顯(1.9131.088μg/L)。 2、(1)0h實(shí)驗(yàn)組豚鼠血清于體外室溫環(huán)境放置,血清總IgE含量在0d、1d、2d、3d的含量比較,F=0.386,P=0.7640.05,可認(rèn)為組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;3天內(nèi)血清肥大細(xì)胞類胰蛋白酶含量比較,F=0.005,P=0.9990.05,組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;3天內(nèi)血清肥大細(xì)胞類糜蛋白酶含量比較,F=0.145,P=0.9320.05,組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 (2)實(shí)驗(yàn)組和對照組血清總IgE含量比較,F=35.146,P0.001,可認(rèn)為兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;24h內(nèi)不同死亡時(shí)間組血清總IgE含量比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.575,P=0.7190.05),組間兩兩比較,P值均大于0.05。實(shí)驗(yàn)組和對照組血清類胰蛋白酶含量比較,F=98.444,P0.001,可認(rèn)為兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;24h內(nèi)實(shí)驗(yàn)組不同死亡時(shí)間的血清類胰蛋白酶含量比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,(F=2.881,P=0.0180.05),而對照組不同死亡時(shí)間的比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.892,P=0.4960.05);實(shí)驗(yàn)組0h組和8h組之間比較,P0.05,其余時(shí)間組組間兩兩比較,P值均大于0.05。實(shí)驗(yàn)組和對照組血清類糜蛋白酶含量比較,F=127.608,P0.001,可認(rèn)為兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;24h內(nèi)不同死亡時(shí)間組血清類糜蛋白酶含量比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.819,P=0.5390.05),組間兩兩比較,P值均大于0.05。 (3)過敏反應(yīng)死亡的豚鼠肺臟組織與對照組肺臟中總IgE含量比較,F=0.173,P=0.6860.05,可認(rèn)為兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;類胰蛋白酶含量比較,F=31.92,P0.05,可認(rèn)為兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;類糜蛋白酶含量相比較,F=6.989,P=0.0250.05,可認(rèn)為兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)組豚鼠胃壁組織與對照組胃壁組織IgE含量比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=I.537,P=0.2430.05);類胰蛋白酶含量比較,F=0.989,P=0.3340.05,可認(rèn)為兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;類糜蛋白酶含量比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=65.858,P0.05)。 結(jié)論 1、通過改良致敏方式和致敏時(shí)間,成功的提高了豚鼠過敏反應(yīng)死亡的發(fā)生率。改良模型組豚鼠過敏原注射方式為外周靜脈注射,避免因心腔注射引起的心包填塞。血清中IgE和類胰蛋白酶含量和原模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,為后續(xù)研究血清總IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶的死后變化提供更好的實(shí)驗(yàn)載體。 2、(1)根據(jù)室溫體外環(huán)境下放置的血清中總IgE、肥大細(xì)胞類胰蛋白酶和肥大細(xì)胞類糜蛋白酶含量的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果,室溫體外環(huán)境下,尚不能認(rèn)為3天內(nèi)血清總IgE、肥大細(xì)胞類胰蛋白酶和類糜蛋白酶含量發(fā)生明顯變化,可見上述指標(biāo)3天內(nèi)于室溫保存是相對穩(wěn)定的。 (2)室溫環(huán)境下0h,2h,4h,8h,12h和24h時(shí)間段實(shí)驗(yàn)組豚鼠體內(nèi)血清總IgE含量相比較P0.05,因此尚不能認(rèn)為24h內(nèi)室溫環(huán)境下過敏反應(yīng)死亡豚鼠體內(nèi)的血清總IgE含量有差異。從文獻(xiàn)上看IgE的生成和消除,血清IgE水平的升高是初次接觸過敏原后數(shù)星期內(nèi)的結(jié)果,而發(fā)生過敏反應(yīng)并不馬上引起已經(jīng)升高的血清總IgE水平再次升高,存活大鼠的血液循環(huán)中IgE的半衰期約為12h,而IgE的主要消除方式是血管內(nèi)到血管外的重分布,發(fā)生過敏反應(yīng)后沒有立即生成IgE,而且死后血管內(nèi)IgE的重新分布緩慢,加之IgE本身比較穩(wěn)定,這可能是24h內(nèi)室溫環(huán)境下體內(nèi)血清總IgE含量未有變化的原因。 類胰蛋白酶主要存在于肥大細(xì)胞的顆粒,除少數(shù)其他細(xì)胞外(如嗜堿性粒細(xì)胞)其他細(xì)胞不存在類胰蛋白酶成分,血清類胰蛋白酶水平的升高一般由肥大細(xì)胞脫顆粒引起。肺臟和心臟存在大量的肥大細(xì)胞,是重要的過敏反應(yīng)靶器官,發(fā)生過敏反應(yīng)時(shí)肺臟和心臟的肥大細(xì)胞均可被激活而脫顆粒,使肥大細(xì)胞相關(guān)介質(zhì)(類胰蛋白酶、類糜蛋白酶、組胺等)分泌到細(xì)胞間質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示室溫條件下實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間組組間比較P0.05,發(fā)現(xiàn)心內(nèi)血的類胰蛋白酶在豚鼠發(fā)生過敏反應(yīng)死后24h內(nèi)有升高的趨勢,而且實(shí)驗(yàn)組肺臟類胰蛋白酶含量明顯高于對照組(F=31.92,P0.05),這可能與發(fā)生過敏反應(yīng)過程中大量的類胰蛋白酶分泌到肺臟和心臟的細(xì)胞間質(zhì)以及類胰蛋白酶的死后彌散至心內(nèi)血有關(guān)。 類糜蛋白酶也是一種肥大細(xì)胞特異的絲氨酸蛋白酶,儲存于肥大細(xì)胞的分泌顆粒。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組和對照組豚鼠血清類糜蛋白酶含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=127.608,P0.001),而肺臟組織中類糜蛋白酶含量差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.989,P=0.0250.05),這可能與肺組織中肥大細(xì)胞主要為只表達(dá)類胰蛋白酶的MCT和類糜蛋白酶的宿主防御功能導(dǎo)致過敏反應(yīng)發(fā)生后血清中類糜蛋白酶進(jìn)入肺組織抵御外來的過敏原有關(guān)。24h內(nèi)室溫條件下過敏反應(yīng)死亡豚鼠尸體心內(nèi)血清中類糜蛋白酶含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可能是肺組織中肥大細(xì)胞類型主要為MCT,類糜蛋白酶于死后彌散量不大。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號】:D919.1

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2 ;抗病毒中藥易產(chǎn)生過敏反應(yīng)[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2008年

3 記者 王樂民;警惕鼻炎寧制劑引起嚴(yán)重過敏反應(yīng)[N];健康報(bào);2010年

4 賀達(dá)維;局部瘙癢——當(dāng)防中藥過敏[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2006年

5 是明啟;警惕藥物引起過敏[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

6 雷波;防范右旋糖酐的輸液反應(yīng)[N];健康報(bào);2006年

7 胡云華;抗過敏藥也能引起過敏反應(yīng)[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)(漢);2006年

8 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院06級醫(yī)學(xué)博士 易善永;謹(jǐn)防抗過敏藥引起的過敏反應(yīng)[N];保健時(shí)報(bào);2008年

9 楊碧蓮;中藥過敏反應(yīng)不可小視[N];中國醫(yī)藥報(bào);2008年

10 謝運(yùn)凌;夏季用藥當(dāng)心致光過敏[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 高彩榮;過敏性休克和猝死的法醫(yī)病理學(xué)診斷研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

2 錢衛(wèi)珠;新型抗IgE人源化單克隆抗體的結(jié)構(gòu)與功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

3 周波;重組抗IgE人源化單克隆抗體藥效學(xué)及藥代動力學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 楊彬;工程化的人抗人IgE抗體的制備[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

5 張全明;屋塵螨特異性免疫治療抑制IgE易化變應(yīng)原結(jié)合的檢測方法的建立和驗(yàn)證[D];華中科技大學(xué);2013年

6 周學(xué)武;大鼠羊水栓塞后類胰蛋白酶、補(bǔ)體C3、C4、核因子-κB的變化及地塞米松干預(yù)的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

7 喬海靈;青霉素過敏病人特異性IgE和IgG抗體、相關(guān)細(xì)胞因子及其基因多態(tài)性[D];鄭州大學(xué);2005年

8 楊靜;青霉素過敏病人特異性IgE、IgG及嗜堿性粒細(xì)胞CD63、CD203c水平的變化[D];鄭州大學(xué);2006年

9 楊崇美;腸易激綜合征患者食物過敏的初步研究[D];山東大學(xué);2006年

10 趙蕾;小麥紋枯病菌產(chǎn)生的一種胞外蛋白酶及其致病機(jī)理的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳炯垣;室溫下豚鼠過敏反應(yīng)死亡組織和血清中IgE、類胰蛋白酶和類糜蛋白酶的變化[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

2 付立平;類胰蛋白酶和類糜蛋白酶表達(dá)在過敏性反應(yīng)死亡與冠心病猝死中的法醫(yī)學(xué)意義[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

3 陳紅;類胰蛋白酶等介質(zhì)在豚鼠藥物過敏性休克組織表達(dá)及意義[D];吉林大學(xué);2008年

4 武文杰;海洛因中毒者血漿類胰蛋白酶及類糜蛋白酶含量的測定[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

5 郭朝書;腹瀉型腸易激綜合征病人結(jié)腸粘膜類胰蛋白酶改變及其對內(nèi)臟感覺的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

6 陳麗珠;腹瀉型腸易激綜合征患者升結(jié)腸黏膜類胰蛋白酶、α1-抗胰蛋白酶的表達(dá)變化及其意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

7 舒嵐;高IgE綜合征的臨床特征和分子診斷[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

8 陳翠翠;杠柳新苷類化合物對東方粘蟲和小地老虎幼蟲中腸蛋白酶活性的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

9 貝寧;肥大細(xì)胞蛋白酶激活受體表達(dá)及功能初探[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

10 阮景云;中西醫(yī)結(jié)合治療小兒咳嗽變異性哮喘發(fā)作期血清總IgE水平變化[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2010年



本文編號:1818259

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