本文選題：人凋亡抑制蛋白 + 鼻咽癌細(xì)胞　； 參考：《中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志》2013年05期

【摘要】：目的構(gòu)建人凋亡抑制蛋白(human inhibitor of apoptosis protein2,hIAP-2)的shRNA,靶向抑制hIAP-2基因聯(lián)合放療,探討其對(duì)CNE1鼻咽癌細(xì)胞株放射敏感性的影響。方法首先采用MTT法確定最佳放射劑量;再構(gòu)建4條hIAP-2-shRNA沉默片段并用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染CNE1細(xì)胞,最后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Q-PCR)和免疫印跡法(Western blot,WB)篩選出最佳沉默shRNA序列;用最佳沉默shRNA序列轉(zhuǎn)染CNE1細(xì)胞,分別設(shè)置轉(zhuǎn)染放射線照射組與未轉(zhuǎn)染放射線照射組,采用實(shí)時(shí)定量PCR和WB檢測(cè)hIAP-2的基因及其蛋白表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)測(cè)細(xì)胞凋亡,transwell測(cè)細(xì)胞侵襲能力。結(jié)果 MTT法明確4 Gy為最佳放射劑量;Q-PCR和WB檢測(cè)結(jié)果顯示4條hIAP-2-shRNA均能有效抑制hIAP-2 mRNA及蛋白表達(dá)(P0.05),以hIAP-2-shRNA2沉默效果最顯著(P0.05);Q-PCR和WB檢測(cè)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染hIAP-2-shRNA2后照射組與未轉(zhuǎn)染hIAP-2-shRNA2照射組的CNE1細(xì)胞中hIAP-2基因與蛋白表達(dá)比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染hIAP-2-shRNA2后照射組比未轉(zhuǎn)染hIAP-2-shRNA2照射組凋亡率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);transwell檢測(cè)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染hIAP-2-shRNA2后照射組與未轉(zhuǎn)染hIAP-2-shRNA2照射組侵襲能力差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論轉(zhuǎn)染hIAP-2基因沉默后放射可增加鼻咽癌細(xì)胞凋亡率,降低其侵襲能力,能夠起到放療增敏作用。
[Abstract]:Objective to construct the shRNAs of human inhibitor of apoptosis protein 2 hIAP-2 and to investigate the radiosensitivity of CNE1 nasopharyngeal carcinoma cell line by targeting hIAP-2 gene in combination with radiotherapy. Methods four hIAP-2-shRNA silencing fragments were constructed and transfected into CNE1 cells by liposome method, and the best silencing shRNA sequences were screened by real-time fluorescence quantitative PCRQ-PCR and Western blot. CNE1 cells were transfected with the best silencing shRNA sequence. The gene and protein expression of hIAP-2 was detected by real-time quantitative PCR and WB. Apoptosis was measured by flow cytometry and cell invasion was measured by transwell. Results the results of Q-PCR and WB detection showed that 4 Gy was the best dose of MTT. The results of Q-PCR and WB detection showed that all four hIAP-2-shRNA could inhibit hIAP-2 mRNA and protein expression effectively. HIAP-2-shRNA2 silencing effect was the most significant. The results of hIAP-2-shRNA2 silencing and WB detection showed that after hIAP-2-shRNA2 transfection, the irradiation group was not transformed. The expression of hIAP-2 gene and protein in CNE1 cells exposed to hIAP-2-shRNA2 was compared. The results of flow cytometry showed that the apoptosis rate of the irradiated group after transfection of hIAP-2-shRNA2 was significantly higher than that of the group without hIAP-2-shRNA2 transfection. The result of transwell test showed that the rate of apoptosis in the irradiated group after hIAP-2-shRNA2 transfection and that in the untransfected hIAP-2-shRNA2 group was higher than that in the non-transfected hIAP-2-shRNA2 group. The difference of invasion ability was statistically significant (P 0.05). Conclusion the silencing of hIAP-2 gene can increase the apoptosis rate and decrease the invasive ability of nasopharyngeal carcinoma cells.
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院腫瘤科;中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院淋巴瘤血液放療科;中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院 消化內(nèi)二科;
【分類號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：1786279