本文選題：頭發(fā)　切入點：興奮劑　出處：《北京體育大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的本論文以易被運動員濫用或檢測難度較高的興奮劑為主要研究對象,利用具有高分離效能和結構確證功能的液相色譜-串聯(lián)質譜來探索、建立毛發(fā)中興奮劑(酯類、母體、代謝物)的檢測和評價方法,并使用建立的檢測方法檢測高血壓患者頭發(fā)中的p-阻斷劑(美替洛爾和比索洛爾)和運動員頭發(fā)β2-激動劑(克侖特羅),以證明檢測方法的有效性,為采用毛發(fā)檢測興奮劑建立技術儲備。方法稱取50mg頭發(fā),加入5u1d3-睪酮作內標,100μ1蛋白酶K和100μl二硫蘇糖醇在三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液中55℃水解2小時,加入正戊烷/乙醚,振蕩、離心和冷凍,倒出上層有機相。融化下層后加入磷酸緩沖液、5μl內標和三氯甲烷／異丙醇振蕩、離心和吸取上層液體后兩次有機相混合吹干,最后用甲醇、流動相A和正己烷除去油脂,復溶(90%流動相A)后10μ1進樣分析。由于酯類和非酯類復溶液不同,酯類和非酯類分開處理檢測,酯類50mg頭發(fā),加10μl內標同上水解方法,加入正戊烷,振蕩、離心和冷凍,吹干復溶液(90%流動相B)復溶后20uμ進樣分析。 結果與討論通過優(yōu)化色譜和質譜條件,非酯類和酯類分別采用X BridgeRP18(3.5μm,100mm×2.1mm)和Agilent ZORBAX XDB-C18(3.μ m,50mmX2. lmm)色譜柱,相對應的流速為0.2ml/min和0.4ml/min,最優(yōu)進樣量分別為10μl和20μl和最佳液相組成為2.5mM甲酸銨-0.2%甲酸-甲醇／乙腈(v：v=7：3)和2.5mM甲酸銨-0.2%甲酸-甲醇／乙腈(v：v=7：3)體系。前處理優(yōu)化使非酯類檢測選擇使用正戊烷／乙醚和氯仿／異丙醇兩步液液萃取,酯類選擇了正戊烷液液萃取。方法驗證中得出線性相關系數(shù)、最低檢測限和最低定量限滿足日常定量要求和頭發(fā)中檢測興奮劑靈敏度的要求,大多數(shù)藥物日間精密度20%,日內精密度20%,回收率在50%以上并且基質效應多在80%-120%之間,符合一般驗證要求。將建立的檢測方法進行方法驗證和評估后應用于患高血壓患者頭發(fā)中β-阻斷劑藥物和運動員頭發(fā)中克侖特羅的檢測,做出滿意結果。 結論本研究建立了一套同時檢測多類興奮劑的方法和檢測內源性類固醇內外來源的類固醇酯類的方法,并通過方法驗證和患者和運動員實際頭發(fā)樣檢測證明該方法是可行有效的,為頭發(fā)中興奮劑的檢測提供了技術基礎。
[Abstract]:Objective to establish the stimulant in hair by using liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS), which is easy to be abused by athletes or which is difficult to detect, and to establish the stimulant (ester, parent) in hair by using liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS) with high separation efficiency and structure confirmation function. Methods for the detection and evaluation of metabolites, and for the detection of p- blockers (metiolol and Bisoprolol) in the hair of hypertensive patients and 尾 _ 2-agonist (clenbuterol) in athletes' hair to demonstrate the effectiveness of the method. In order to establish technical reserve for hair detection stimulant, 50mg hair was taken as the internal standard of 5u1d3-testosterone, and 100 渭 1 protease K and 100 渭 l dithiothreitol were hydrolyzed at 55 鈩，

本文編號：1684685