本文選題：急性心肌梗塞　切入點：慢性心力衰竭　出處：《鄭州大學》2014年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：慢性心力衰竭（CHF）簡稱心衰，是各種心臟疾病的最終結局和主要死因，而冠心病尤其是心肌梗塞是造成心衰的主要病因，在心衰的病程中，很多因素參與了其發(fā)生發(fā)展，如rass激活，氧化應激，心室重塑等，各種因素互為因果，病理生理機制錯綜復雜，近年發(fā)現(xiàn)大麻素系統(tǒng)也參與了心衰的發(fā)病過程，大麻素包括外源性和內源性大麻素系統(tǒng)（EC），EC的配體主要有：內源性花生四烯酸乙醇胺（AEA）和2-花生四烯酸甘油（2-AG），EC的受體主要有：CB1及CB2。研究顯示，終末期心衰AEA及2-AG水平均顯著升高；CB1略有下調而CB2顯著上調，但其在心衰中的作用及機制不明。 目前對心室重塑的評價尚缺乏理想的指標，，可通過基因水平檢測調亡基因或抗調亡基因的表達評估細胞層面的心肌重塑，通過檢測心肌膠原蛋白的含量評估基質層面的心室重塑，脯氨酸是一種非必須氨基酸，在體內絕大部分存在于膠原纖維中，且在不同型別膠原中占總蛋白量比例恒定，測定組織中羥脯氨酸含量可反映膠原纖維含量；檢測心肌組織Caspase-3，bcl-2，p65的表達。研究通過結扎大鼠冠狀動脈，復制心肌梗塞心衰模型，研究心衰嚴重程度與EC的關系，及ec激活對心衰和心室重構的影響。 第一章內源性大麻素系統(tǒng)在不同程度心力衰竭大鼠中的變化 目的： 本章通過復制大鼠心衰模型，4周后觀察不同程度心力衰竭大鼠血清AEA、2-AG水平及心肌組織CB1與CB2表達與心功能及膠原生成的關系。 方法： SPF級健康成年SD大鼠100只，通過冠狀動脈結扎術,制作心肌梗死模型。冠脈結扎術后4周，再次以同樣方法麻醉大鼠，固定于手術臺，M型超聲測定EF及左室內徑。測定結束后，處死全部大鼠,腹主動脈取血4～5毫升，-80℃保存，以備檢測�？焖偃〕鲂呐K，在液氮速凍后保存于-80℃冰箱，備用。測定BNP含量（ELISA）；用超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒和丙二醛(MDA)試劑盒測定鼠血清SOD活性和MDA含量；AEA及2AG測定（高效液相色譜法）；心肌組織膠原含量檢測（氯胺T法）；Masson膠原纖維染色；RT-PCR方法檢測目的基因相對表達量；蛋白印跡法(Westem Blot)檢測心肌組織CB1和CB2蛋白表達；應用SPSS13.0軟件醫(yī)學統(tǒng)計軟件包進行數據資料的統(tǒng)計學處理。 結果： 制作心肌梗死模型術4周末存活55只，以BNP第一分位數（P25）及第三分位數（P75）將所有心力衰竭大鼠平均分為3組分別標注為Group1；Group2；Group3，組間比較差異顯著。研究發(fā)現(xiàn)內源性大麻素組分與心力衰竭的嚴重程度相關，隨心衰加重血清AEA、2-AG水平顯著升高；CB2顯著上調；輕中度心衰CB1變化不明顯，重度心衰CB1顯著上調，說明在心衰的自然病程中，CB1處于低表達狀態(tài)，而終末期心衰CB1顯著上調。提示主要是CB2而不是CB1介導了心衰的病理生理過程。隨心衰加重AEA、2-AG水平升高，心室膠原含量顯著升高，反映氧化應激狀態(tài)及炎癥反應指標均呈明顯正相關關系。 結論： 內源性大麻素水平與心功能相關，隨著心衰加重，血清內源性大麻素水平遞增，心肌膠原含量增多，同時發(fā)現(xiàn)內源性大麻素水平與氧化應激相關，隨著內源性大麻素水平的升高，氧化應激指標丙二醛顯著升高，隨著心衰的加重，大麻素受體CB2表達的增加，丙二醛升高，呈正相關，而大麻素受體CB2的表達在輕中度心衰變化不明顯，嚴重心衰狀態(tài)下也顯著升高。表明內源性大麻素系統(tǒng)參與了心衰的發(fā)病過程，但無法確定這種變化在CHF中發(fā)揮的是有益抑或有害的作用，因此有必要進一步探討CB2激活對心衰的作用及機制。 第二章大麻素受體CB2激動劑對心力衰竭大鼠氧化應激與 細胞凋亡的影響 目的： 本章通過復制大鼠心衰模型，并以CB2受體激動劑JWH015激活CB2受體，或改變CB2受體的表達水平進行干預，4周后觀察其對動物心功能、氧化應激和細胞凋亡的影響 方法： 同時通過復制大鼠心力衰竭模型，基因克隆、腺病毒制備和注射；超聲下監(jiān)測大鼠心功能；以JHW015激活CB2受體，或于蛋白水平改變受體表達水平，將AEA、2-AG水平，CB1及CB2表達量與MDA含量和SOD活性作一相關分析。觀察CB2受體激動在心力衰竭中的作用，及其與氧化應激、細胞凋亡的關系。 結果： Pearson相關分析結果顯示，AEA及2-AG水平與MDA呈正相關，與SOD活性呈負相關；CB2亦顯示出類似改變。激動CB2受體或過表達CB2受體均可緩解心力衰竭；同時減輕氧化應激、抑制凋亡促進蛋白Caspase3活性，增加抗凋亡蛋白Bcl-2表達；CB2受體活化，可顯著抑制NK-κB中的活性成份，p65亞基。 結論： 1.內源性大麻素組分與心力衰竭的嚴重程度相關，隨心衰的加重，血清AEA及2-AG水平顯著，心肌組織CB2表達顯著上調，而CB1表達在輕中度心衰中變化不明顯，重度心衰中也顯著升高，說明在心衰的自然病程中，CB1可能處于低激活狀態(tài)； 2.隨著AEA、2-AG水平的升高和CB2表達的上調，心肌膠原含量增加。 3.CB2受體上調可改善心功能及抑制心室重塑，對心力衰竭有益，其機制可能與其抗氧化應激，減少凋亡相關蛋白活化及抑制NF-κB的活性及表達有關。 第三章心肌細胞CB2受體激動抑制NF-κB活性并減輕氧化應激損傷 目的： 研究CB2受體與及NF-κB信號通路主要執(zhí)行者p65表達及活性的關系，進一步探討CB2受體激動對心肌細胞保護作用的分子機制。 方法： 在前述實驗基礎上，以心肌細胞為研究對象，采用消化酶消化法分離培養(yǎng)乳鼠心肌細胞，以免疫熒光染色法進行細胞純度鑒定，蛋白印跡檢測CB2受體激動后p65的表達情況，同時通過在心肌細胞中改變其不同CB2功能狀態(tài)（下調、激活或抑制），電泳遷移率變化試驗（EMSA）法，檢測CB2受體激動后核蛋白NF-κB在細胞內的分布情況及功能狀態(tài)。所有統(tǒng)計分析均使用GraphPad-Prism進行。正態(tài)分布計量結果以均數±標準差表示；多組間比較采用方差分析，以SNK法校正兩兩比較；兩組間比較采用成組設計t-檢驗完成。 結果： 蛋白印跡結果顯示CB2受體激動后可抑制p65表達。同時，EMSA結果顯示，CB2受體激動后核蛋白與NF-κB探針序列結合能力增強，突變探針反應證實了結合序列的特異性；Super-Shift反應進一步證實核蛋白中與靶序列結合的為NF-κB。下調或抑制CB2導致NF-κB出現(xiàn)相反結果，進一步證實CB2受體激動具有抑制NF-κB的作用。 結論： CB2受體激動可直接顯著地抑制轉錄因子NF-κB激活，并抑制其作為轉錄因子的轉錄活性，抑制心肌細胞凋亡及減輕氧化應激，提示CB2受體可能介導大鼠心肌梗死后心力衰竭的保護機
[Abstract]:Chronic heart failure (CHF) referred to as heart failure, is the ultimate outcome of various heart diseases and the main cause of death and coronary heart disease, especially myocardial infarction is the main cause of heart failure, in the course of heart failure, many factors involved in its occurrence and development, such as RASS activation, oxidative stress, ventricular remodeling, various factors of pathophysiological mechanism of reciprocal causation. Perplexing, found in recent years that the cannabinoid system is also involved in the pathogenesis of heart failure, including cannabinoid exogenous and endogenous cannabinoid system (EC), EC ligands are: endogenous four arachidonic acid ethanolamine (AEA) and 2- four arachidonic acid glycerol (2-AG), EC receptor mainly has: the study of CB1 and CB2. show that the final at the end of heart failure AEA and 2-AG levels were significantly increased; CB1 and CB2 were significantly increased slightly reduced, but its role in heart failure and the mechanism is unclear.
The evaluation on ventricular remodeling is not ideal index, can be used in gene level detection of apoptosis gene or anti apoptosis gene expression of myocardial remodeling in evaluation of cell level, the level of ventricular remodeling was assessed to detect myocardial collagen matrix, proline is a non essential amino acid in the body, mostly exists in the collagen fibers the proportion of the total amount of protein, and constant in different type of collagen, the determination of hydroxyproline in tissue can reflect the collagen fiber content; detection of myocardial Caspase-3, Bcl-2, p65 expression. Through the study of coronary artery ligation in rats, copy the model of myocardial infarction heart failure, to study the relationship between the severity of heart failure and EC, and the effects of EC activation on ventricular remodeling and heart failure.
Chapter 1 Changes of endogenous cannabinoid system in rats with different degrees of heart failure
Objective:
After replicating the rat heart failure model, we observed the relationship between the levels of AEA and 2-AG and the expression of CB1 and CB2 in cardiac tissue and cardiac function and collagen production in 4 weeks after heart failure in rats.
Method錛

本文編號：1599930