發(fā)布時間：2018-03-11 21:06

  本文選題：dystrophin　切入點：utrophin　出處：《北京體育大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：Utrophin是dystrophin的同源蛋白,在dystrophin蛋白不足時有替代dystrophin的潛力。本研究選用EIMD為切入點采用損傷特征明顯的離心運動方式模擬“高住低訓”模式,從utrophin蛋白的角度來研究低氧對EIMD膜損傷影響及可能的分子機制。方法：將70只八周齡健康的SD雄性大鼠(體重196.75±8.14g)隨機分成：安靜組(C)；常氧下運動,常氧組(N)；常氧下運動,低氧組(H)；后兩組又隨機分為3個亞組：24H組、48H組、72H組。共7組,每組10只。低氧環(huán)境的氧濃度為12.7%。每組各取2只腹腔注射熒光染料EBD (Evans blue dye,伊文氏藍)來檢測肌細胞膜通透性。運動方式采用坡度為-16度的大負荷間歇性下坡跑,運動速度為26.8米/分,運動5分鐘×10組,組間歇1分鐘。運動結束后,取大鼠小腿腓腸肌用Western blot、RT-PCR和熒光免疫組化方法進行dystrophin基因表達、utrophin蛋白含量和基因表達等指標的測定。結果：一次性離心運動后N24h和H24h組均出現EBD陽性纖維,常氧組EBD陽性細胞數先增加后減少,低氧組EBD陽性細胞數逐漸降低,均顯著高于安靜組(P0.05)。低氧組和常氧組dystrophin基因表達量隨時間推移均逐漸下降,且均明顯低于安靜組(P0.05)。與安靜組相比,H24h和H48h組utrophin蛋白含量顯著增高(P0.05),72h組降低明顯,恢復至接近安靜組水平。隨著時間推移,低氧各組utrophin蛋白含量持續(xù)升高,均明顯高于安靜組(P(0.05)。Utrophin各組基因表達與蛋白含量變化并不完全相符,說明該蛋白的表達除了由基因轉錄調節(jié)的控制外,還可能存在其他的調節(jié)機制。結論：1.一次性離心運動后低氧暴露不僅使骨骼肌細胞膜損傷提前,而且會延緩肌細胞膜的修復。2.一次性離心運動后低氧暴露使utrophin蛋白的表達增加。
[Abstract]:Objective: Utrophin is the homologous protein of dystrophin and has the potential to replace dystrophin when the dystrophin protein is insufficient. In this study, we used EIMD as the starting point to simulate the "high living and low training" model by centrifugal exercise with obvious damage characteristics. To study the effect of hypoxia on EIMD membrane damage and its possible molecular mechanism from the point of view of utrophin protein. Methods: 70 healthy SD rats (body weight 196.75 鹵8.14 g) were randomly divided into three groups: quiet group, normoxic group, normoxic group, normoxic group, normoxic group, normoxic group, and normal oxygen group. The latter two groups were randomly divided into 3 subgroups, 1: 24 H group, 48 H group and 72 H group. 10 rats in each group were given oxygen concentration of 12.70.Two rats in each group were injected intraperitoneally with fluorescent dye EBD Evans blue dye (Yi Wen's blue) to detect the permeability of muscle cell membrane. The speed of exercise was 26.8 m / min, 5 minutes 脳 10 group, the interval of group was 1 minute. The content and expression of dystrophin gene in gastrocnemius muscle of rats were determined by Western blottir RT-PCR and fluorescence immunohistochemistry. Results: EBD positive fibers were found in N24 h and H24 h groups after single centrifugation. The number of EBD positive cells in normoxic group increased first and then decreased, and the number of EBD positive cells in hypoxic group decreased gradually, which was significantly higher than that in quiet group. The expression of dystrophin gene in hypoxia group and normoxic group decreased gradually with the passage of time. Compared with the rest group, the content of utrophin protein in H24 h and H48 h groups decreased significantly and recovered to the level of quiet group. With time, the content of utrophin protein in hypoxic groups continued to increase. The expression of Utrophin gene was not consistent with the change of protein content, which indicated that the expression of the protein was controlled by gene transcription. There may be other regulatory mechanisms. Conclusion 1. Hypoxic exposure after one time centrifugation can not only lead to early damage of skeletal muscle cell membrane, but also delay the repair of muscle cell membrane. 2. Hypoxia exposure after one time centrifuge exercise can increase the expression of utrophin protein.
【學位授予單位】：北京體育大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R87

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