本文選題：海馬神經(jīng)元　切入點(diǎn)：乙醇　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景與目的:現(xiàn)如今,人們時(shí)常“以酒慶功、以酒交友、以酒助興”。酒其主要成分是乙醇,是一種親神經(jīng)的小分子物質(zhì),能迅速通過(guò)血腦屏障,造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的直接損傷。海馬神經(jīng)元是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中結(jié)構(gòu)和功能最復(fù)雜,最特殊的細(xì)胞之一,對(duì)乙醇毒性作用敏感性較高,長(zhǎng)時(shí)間的乙醇暴露,可引起海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和功能的改變,從而導(dǎo)致認(rèn)知能力和記憶能力的降低。本研究主要通過(guò)構(gòu)建不同濃度乙醇及葡萄籽原花青素(GSP)作用下的原代大鼠海馬細(xì)胞模型,采用激光共聚焦顯微鏡觀察不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變,酶標(biāo)儀測(cè)定SOD活性、MDA及LDH的含量變化,為進(jìn)一步探究乙醇對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)損傷機(jī)制和如何減輕乙醇誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷提供理論依據(jù)。方法:1、從清潔級(jí)(SPF級(jí))的SD大鼠乳鼠(出生24h內(nèi))分離海馬細(xì)胞,培養(yǎng)至第7天,采用SP法進(jìn)行NSE免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定細(xì)胞純度,選擇生長(zhǎng)良好,純度較高的海馬細(xì)胞隨機(jī)分成低劑量、中劑量、高劑量組,在培養(yǎng)液中加入無(wú)水乙醇,使其終濃度為0.5g/L、1.5g/L、3.0g/L。對(duì)照組則加入等量的PBS溶液,細(xì)胞培養(yǎng)箱中分別作用1h、4h、8h、12h、24h;收集細(xì)胞上清液備用,培養(yǎng)液洗3遍后換液后加入低、中、高劑量的葡萄籽原花青素,使其終濃度為1mg/L、2.5mg/L、5mg/L,對(duì)照組加入等量的PBS溶液,細(xì)胞培養(yǎng)箱中分別作用8h、24h。收集細(xì)胞上清液備用。2、采用超氧化物歧化酶測(cè)定試劑盒(WST-1法)、微量丙二醛測(cè)定試劑盒(TBA法)和乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒(微量酶標(biāo)法)分別測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)不同濃度乙醇和葡萄籽原花青素作用下的細(xì)胞上清液中SOD活力、MDA和LDH含量。3、通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度乙醇和葡萄籽原花青素作用下海馬神經(jīng)元形態(tài)的變化。4、統(tǒng)計(jì)分析方法:所得數(shù)據(jù)均用±s表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多因素方差分析,LSD法進(jìn)行兩兩比較,檢驗(yàn)水平α=0.05。結(jié)果:1、不同濃度不同時(shí)間的乙醇和GSP作用下的海馬細(xì)胞上清液中SOD活力、MDA、LDH含量與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05),低劑量乙醇作用后,SOD、MDA、LDH含量變化不明顯,中高劑量乙醇作用后,各時(shí)間點(diǎn)SOD活力值明顯下降,MDA和LDH釋放量則明顯升高。作用1h、4h后,SOD活力值不斷減少,MDA和LDH含量不斷升高,高劑量乙醇作用8h后SOD活性僅為10.67±0.393 U/ml,為最低值;與中劑量相比,8h時(shí)間點(diǎn)處的高劑量GSP組的SOD活力升高了1.09±0.987 U/ml。MDA含量浮動(dòng)最大,降低了0.192±0.002nmol/mL,與8h、24h高劑量乙醇組相比,低GSP組的SOD活力有所升高,MDA含量略降低,與低劑量組相比,8h高劑量GSP組LDH含量變化最為明顯,與中劑量乙醇組相比,GSP組的LDH含量差異較為顯著。與高劑量乙醇組相比,高GSP組LDH含量變化最大,降低了189.78±1.68 U/L。2、不同時(shí)間不同濃度乙醇作用下的原代海馬神經(jīng)細(xì)胞經(jīng)過(guò)免疫熒光染色后,對(duì)照組細(xì)胞胞體形態(tài)多呈梭形、三角形或橢圓形,核居中,胞體飽滿且邊界清晰,發(fā)出一個(gè)或多個(gè)較粗的絲狀突起,相互連接形成神經(jīng)網(wǎng)絡(luò),染色較為均勻,0.5g/L乙醇作用不同時(shí)間的海馬細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化。1.5g/L乙醇作用4h,胞間絲開始減少,作用8h后,受損的細(xì)胞開始分泌神經(jīng)元粘附分子(NCAM),促使部分細(xì)胞開始聚團(tuán),隨著作用時(shí)間加長(zhǎng),細(xì)胞密度明顯降低,有衛(wèi)星現(xiàn)象出現(xiàn),胞間絲斷裂,部分消失;3.0g/L乙醇作用1h后,細(xì)胞已開始聚團(tuán),胞間絲斷裂,變短,隨著作用時(shí)間不斷增加,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增多,海馬細(xì)胞幾乎全部聚團(tuán),核變小,藍(lán)染加深,細(xì)胞呈短棒狀,胞間幾乎不見(jiàn)連接,神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)已完全破壞,部分細(xì)胞已經(jīng)死亡。低中高劑量GSP作用后,可見(jiàn)部分胞體界限變得清晰,胞間絲明顯變粗,染色加深,連接變稠密,部分胞體接近正常,細(xì)胞連接恢復(fù),聚團(tuán)成簇現(xiàn)象明顯減少,可見(jiàn)稀疏的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。結(jié)論:1、乙醇作用海馬細(xì)胞后,上清液中SOD活力值明顯降低,MDA和LDH含量明顯升高,且呈現(xiàn)劑量依賴性趨勢(shì),與作用時(shí)間相關(guān)。說(shuō)明乙醇增強(qiáng)了海馬細(xì)胞氧化應(yīng)激效應(yīng),產(chǎn)生毒性作用。GSP可明顯提高乙醇損傷后海馬細(xì)胞上清液中SOD活力值,降低MDA和LDH的釋放與生成,且呈現(xiàn)劑量依賴性趨勢(shì),提示GSP有抗氧化和保護(hù)海馬細(xì)胞的作用。2、乙醇可使海馬細(xì)胞密度降低,胞體損傷,邊界模糊,胞間絲變細(xì)變短,甚至斷裂消失,數(shù)量減少,破壞神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。GSP對(duì)海馬細(xì)胞形態(tài)有保護(hù)作用,修復(fù)受損的海馬細(xì)胞,高劑量的GSP維持乙醇損傷后海馬細(xì)胞胞體的正常形態(tài),使胞間絲增多變粗,形成稀疏的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：D919

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本文編號(hào)：1582903