本文關(guān)鍵詞：人源甲狀腺髓樣癌噬菌體抗體庫的構(gòu)建及初步鑒定

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【摘要】：目的：應(yīng)用噬菌體抗體展示技術(shù),構(gòu)建大容量天然人源甲狀腺髓樣癌噬菌體單鏈抗體庫。 方法：提取甲狀腺髓樣癌病人癌周淋巴結(jié)總RNA,通過RT-PCR方法獲得抗體可變區(qū)基因VH和VL基因片斷，以它們?yōu)槟０宸謩e擴(kuò)增VH-Linker和VL-Linker，再用SOE-PCR技術(shù)將之拼接組裝成scFv基因片段后引入酶切位點(diǎn)sfiI和NotI。將scFv基因克隆入噬菌粒栽體pCANTAB-5E后經(jīng)電轉(zhuǎn)入大腸桿菌Ecoli TG1，，之后經(jīng)輔助噬菌體M13K07超感染，構(gòu)建人源甲狀腺髓樣癌噬菌體單鏈抗體庫。PCR鑒定scFv片段陽性插入率，1.0%瓊脂糖凝膠電泳鑒定陽性克隆雙酶切產(chǎn)物。 結(jié)果：甲狀腺髓樣癌周圍淋巴結(jié)總RNA的瓊脂糖電泳結(jié)果可見清晰的28S、18S條帶；VH基因的大小約為370bp，VL基因?yàn)?50bp，組裝后的scFv基因約為750bp。用pUC19標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒測(cè)定轉(zhuǎn)化效率達(dá)到108cfu/μg，scFv的陽性插入率為87.5％(21/24)。結(jié)論：成功地構(gòu)建了人源甲狀腺髓樣癌噬菌體展示文庫，為進(jìn)一步篩選具有甲狀腺髓樣癌細(xì)胞特異性的人源噬菌體單鏈抗體奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R736.1;R730.44

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 趙巖,王清明,付學(xué)奇,陳吉中,范國(guó)才,陳惠鵬;噬菌體抗體庫的構(gòu)建及抗乳腺癌細(xì)胞單鏈抗體的篩選[J];生物工程學(xué)報(bào);2004年05期

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本文編號(hào)：1157357