本文關(guān)鍵詞：大鼠不同程度腦損傷后β-APP、PSD95表達(dá)的實驗性研究

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【摘要】：目的:探討自由落體撞擊法制作不同程度腦損傷模型[1];探討β-APP和PSD95[2]在推斷腦損傷形成時間和腦損傷程度中的價值。方法:根據(jù)大鼠腦定位圖譜[3],利用腦定位儀定位于大鼠左側(cè)顱骨中線旁2mm,緊挨冠狀縫后2.5mm的M2區(qū),以此點為中心用牙科鉆開一直徑5mm的圓形窗口,保持大鼠硬腦膜完整。從不同高度,自由落體撞擊,制作不同程度腦損傷模型。同時制作假手術(shù)組,即只在相應(yīng)部位開一圓形窗口,不撞擊。在損傷后2h、6h、12h、24h、3d、7d、12d、14d斷頭法處死大鼠,用咬骨鉗剝離顱骨,取出大鼠腦組織,放于10%中性甲醛固定液中固定24h,取損傷處腦組織進(jìn)行脫水、浸蠟和包埋,制成蠟塊。再經(jīng)過切片機(jī)制成組織切片,用免疫組織化學(xué)技術(shù)對目標(biāo)蛋白進(jìn)行染色,鏡下拍照采集圖片,鏡下觀察β-APP、PSD95在損傷腦組織和正常腦組織中的表達(dá),再借助計算機(jī)圖像處理技術(shù)[4]計算出各組β-APP、PSD95的積分光密度(IOD)。分析實驗數(shù)據(jù),探究其與腦損傷形成時間和腦損傷程度的相關(guān)性。根據(jù)這兩個指標(biāo)的回歸性分析結(jié)果,判別這兩個指標(biāo)在推斷腦損傷程度和腦損傷形成時間中的價值。結(jié)果:實驗數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,1)指標(biāo)β-APP分析結(jié)果:(1)正常組與假手術(shù)2h、6h、12h組β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;與假手術(shù)24h組β-APP的IOD值進(jìn)行比較P0.05;與假手術(shù)3d、7d、12d、14d組β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;假手術(shù)組β-APP的表達(dá),在傷后24h達(dá)到高峰,后逐漸下降至正常組水平,β-APP的IOD值在不同時間表達(dá)的線性回歸二次擬合中R=0.537,二次回歸方程Y=㧟85.138X~2+696.103X+3984.31;(2)正常組與輕度損傷2h、6h、12h組β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05,與輕度損傷24h、3d組β-APP的IOD值進(jìn)行比較P0.05,與輕度損傷7d、12d、14d組β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;輕度損傷組β-APP的表達(dá),在傷后6h開始逐漸升高,傷后3d時達(dá)到高峰,而后逐漸下降,在14d時基本恢復(fù)至正常組水平,其全程表達(dá)趨勢類似鐘形曲線。在損傷后2h至7d段,β-APP的IOD值在輕度損傷后不同時間表達(dá)的線性回歸二次擬合中R=0.519,二次回歸方程Y=㧟0.86X~2+23.211X+5672.158;β-APP的IOD值在輕度損傷后不同時間表達(dá)的線性回歸三次擬合中R=0.784,三次回歸方程Y=0.02X3㧟0.856X~2+112.033X+4591.032(2h-7d),提示損傷時間與β-APP的表達(dá)存在一定的相關(guān)性;(3)正常組與中度損傷2h組β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05,與中度損傷6h、12h、24h、3d組β-APP的IOD值進(jìn)行比較P0.05,與中度損傷7d、12d、14d組β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;中度損傷組β-APP的表達(dá),傷后2h開始升高,傷后3d達(dá)到高峰,在傷后7d降至略高于正常組水平,14d基本恢復(fù)正常;β-APP的IOD值在中度損傷后不同時間表達(dá)的線性回歸二次擬合中R=0.361,二次回歸方程Y=㧟.111X~2+26.856X+6918.023;三次擬合中R=0.784,三次回歸方程Y=0.02X3㧟1.130X~2+144.356X+5487.828(2h-7d),提示在腦損傷后損傷區(qū)β-APP的表達(dá)與損傷時間存在相關(guān)性;(4)正常組與重度損傷2h、6h、12h、24h、3d、7d組β-APP的IOD值進(jìn)行比較P0.05,與重度損傷12d和14d組β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;重度損傷組β-APP的全程表達(dá)趨勢與輕度、中度損傷組相似;β-APP的IOD值在重度損傷后不同時間表達(dá)的線性回歸二次擬合中R=0.454,二次回歸方程Y=㧟1.31X~2+32.479X+7593.545;三次擬合中R=0.820,三次回歸方程Y=0.02X3㧟1.162X~2+151.276X+6147.772,提示β-APP的表達(dá)與損傷時間存在相關(guān)性;(5)同一時間不同程度損傷β-APP的IOD值比較顯示:在2h組,假手術(shù)與輕度、中度損傷β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05,假手術(shù)與重度損傷β-APP的IOD值進(jìn)行比較P0.05;在6h組,假手術(shù)與輕度、中度、重度損傷β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;在12h、24h組,假手術(shù)與輕度損傷β-APP的IOD值進(jìn)行比較,P㧐0.05,假手術(shù)與中度、重度損傷β-APP的IOD值進(jìn)行比較P0.05;在3d組,假手術(shù)與輕度、中度、重度損傷β-APP的IOD值進(jìn)行比較P0.05;在7d組,假手術(shù)與輕度、中度損傷β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05,假手術(shù)與重度損傷β-APP的IOD值進(jìn)行比較P0.05;在12d組,假手術(shù)與輕度、中度、重度損傷β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;在14d組,假手術(shù)與輕度、中度、重度損傷β-APP的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;2)指標(biāo)PSD95,(1)正常組與假手術(shù)2h、6h組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05,與假手術(shù)12h組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P0.05,與假手術(shù)24h、3d、7d、12d、14d組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;假手術(shù)后不同時間表達(dá)的線性回歸二次擬合中R=0.676,二次回歸方程Y=0.015X~2-6.683X+5963.031;(2)正常組與輕度損傷2h組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05,與輕度損傷6h、12h、24h組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P0.05;與輕度損傷3d組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05,與輕度損傷7d組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P0.05,與輕度損傷12d、14d組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;PSD95的表達(dá)在12h出現(xiàn)高峰,3d降至正常組水平,7d組再次出現(xiàn)高峰值,其峰值低于12h組,14d恢復(fù)至正常組水平。PSD95在輕度損傷2h至3d段,其表達(dá)的線性回歸二次擬合中R=0.604,在三次擬合中R=0.998,三次回歸方程Y=0.456X3㧟47.700X~2+3260.473X+6290.71;(3)正常組與中度損傷2h、6h、12h、24h組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P0.05,與中度損傷3d組PSD95的IOD進(jìn)行比較P㧐0.05,與7d組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P0.05,與中度損傷12d、14d組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;PSD95表達(dá)的趨勢同輕度損傷組,在12h、7d組出現(xiàn)峰值,其峰值高于輕度損傷組;PSD95在中度損傷2h至3d段,其表達(dá)的線性回歸二次擬合中R=0.732,在三次擬合中R=0.963,三次回歸方程Y=0.411X3㧟44.329X~2+1076.542X+4668.738(2h-3d);在3d至14d時間段,其表達(dá)的線性回歸二次擬合中R=0.814,在三次擬合中R=0.998,三次回歸方程Y=16.397X3㧟499.261X~2+4403.428X-3197.242;(4)正常組與重度損傷2h、6h、12h、24h組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P0.05,與重度損傷3d組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P0.05,與重度損傷7d、12d組的IOD值進(jìn)行比較P0.05,與重度損傷14d組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;其全程表達(dá)趨勢同輕度損傷組和中度損傷組基本相似;PSD95在中度損傷2h至3d段,其表達(dá)的線性回歸二次擬合中R=0.630,在三次擬合中R=0.972,三次回歸方程Y=0.599X3㧟44.329X~2+63.043X+4059.632;在3d至14d段,其表達(dá)的線性回歸二次擬合中R=0.813,在三次擬合中R=1.000,三次回歸方程Y=21.228X3㧟648.876X~2+5765.61X-5655.324;(5)將假手術(shù)、輕度、中度、重度損傷組在同一損傷時間PSD95表達(dá)情況進(jìn)行比較:2h組,假手術(shù)與輕度損傷組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05,假手術(shù)與中度、重度損傷組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P0.05;6h組,假手術(shù)與輕度、中度、重度損傷組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;12h組,假手術(shù)與輕度、中度、重度損傷組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P0.05;24h組,假手術(shù)與輕度、中度、重度損傷組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P0.05;3d組,假手術(shù)與輕度、中度、重度損傷的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;7d組,假手術(shù)與輕度、中度、重度損傷組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P0.05;12d組,假手術(shù)與輕度、中度、重度損傷組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05;14d組,假手術(shù)與輕度、中度、重度損傷組PSD95的IOD值進(jìn)行比較P㧐0.05。結(jié)論:腦組織中β-APP的表達(dá)與其損傷時間存在一定的回歸曲線關(guān)系,其表達(dá)量有較為明顯的峰值,為推斷腦損傷形成時間提供一定的參考,不同程度腦損傷在同一損傷時間點也存在一定差異,為推斷腦損傷程度提供一定的參考。PSD95的表達(dá)在損傷后12h達(dá)到峰值,在損傷后3d降至正常組水平,損傷后7d再次出現(xiàn)峰值,在傷后14d降至略高于正常組水平,在推斷腦損傷形成時間具有一定的價值,其不同程度損傷在同一時間點存在一定差異,為推斷腦損傷程度提供一定參考價值。
【關(guān)鍵詞】：腦損傷 β-APP PSD95 IOD
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：D919
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-7
• 摘要7-11
• ABSTRACT11-16
• 前言16-20
• 研究內(nèi)容與方法20-30
• 1. 研究內(nèi)容20
• 2. 材料20-22
• 2.1 實驗動物及飼料20
• 2.2 實驗試劑20-21
• 2.3 主要實驗儀器21-22
• 3. 研究方法22-30
• 3.1 實驗分組和模型制作22-24
• 3.2 常規(guī)HE染色步驟24-26
• 3.3 免疫組化（SABC）染色步驟26-28
• 3.4 圖像采集和統(tǒng)計分析28-30
• 結(jié)果30-47
• 討論47-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 綜述62-72
• 參考文獻(xiàn)67-72
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果72-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1106617