本文關(guān)鍵詞：人類H19基因差異甲基化區(qū)域用于精斑鑒定的研究

  更多相關(guān)文章： 精子鑒定 差異甲基化 H19 MSRE-qPCR 男性不育

【摘要】：目的：本課題通過(guò)調(diào)查父源印記基因H19上游區(qū)域在人體血液、正常精子、少弱精子癥患者精子中的甲基化狀態(tài)，建立利用定量PCR對(duì)精斑及疑有精子的混和斑進(jìn)行鑒定的方法，并初步討論其在法醫(yī)學(xué)、臨床男性不育中的意義。 方法：1.應(yīng)用甲基化敏感性限制性內(nèi)切酶-qPCR(MSRE-qPCR)法，對(duì)32例血液樣本、32例正常精液樣本及17例少弱精子癥患者精液樣本中H19基因上游區(qū)域甲基化水平進(jìn)行分析。 2.對(duì)32例血液樣本、32例正常精液樣H19基因上游區(qū)域甲基化水平結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并確定判定精子的判別值。 3.應(yīng)用MSRE-qPCR法，對(duì)混和了一定比例全血基因組DNA的精子DNA樣本中H19基因上游區(qū)域甲基化狀態(tài)進(jìn)行分析，模擬混和斑中精子含量的鑒定。 結(jié)果：精子父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平明顯高于血液，32例血液樣本中父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平為55.27±8.36%，32例精子樣本中父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平為101.94±11.66%，17例少弱精子癥患者精液樣本中父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平為80.70±22.30%，以97.66-106.21%做為采用MSRE-qPCR方法分析父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平進(jìn)行精液斑判定的判別區(qū)間。 結(jié)論：精子中父源印記基因H19上游區(qū)域具有高甲基化狀態(tài)，可作為鑒定正常精子的特異性標(biāo)記，同時(shí)本文確定了父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平，對(duì)于健康人群，52.25%-58.28%為純血液斑判別區(qū)間，97.66-106.21%為純精液斑判別區(qū)間，66.63-90.28%為血液與精液混合斑判別區(qū)間。異常精子因其甲基化水平變異大，，因而影響未知樣品的正確判別，但若甲基化水平超過(guò)97.66%時(shí)仍可判定為純精液斑。
【關(guān)鍵詞】：精子鑒定 差異甲基化 H19 MSRE-qPCR 男性不育
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：D919
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 第一部分 前言8-11
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)材料與方法11-26
• 1 材料11-15
• 2 方法15-26
• 第三部分 結(jié)果26-35
• 1 非人組織中引物對(duì) A、B、C 擴(kuò)增可能性分析26
• 2 血液及精子 DNA 中 H19 基因上游區(qū)域甲基化狀態(tài)26-28
• 3 甲基化水平檢測(cè)結(jié)果及精斑點(diǎn)的判別28-33
• 4 應(yīng)用 qPCR 技術(shù)結(jié)合 H19 基因組織特異性甲基化模擬疑有精子的混和斑的鑒定33-35
• 第四部分 分析與討論35-42
• 1. 印記基因 H19 甲基化狀態(tài)35-36
• 2. 基因組 DNA 甲基化狀態(tài)檢測(cè)方法36-37
• 3. MSRE-qPCR 法檢測(cè)父源印記基因 H19 上游區(qū)域甲基化狀態(tài)在法醫(yī)學(xué)精子鑒中的意義37-40
• 4. MSRE-qPCR 法檢測(cè)父源印記基因 H19 上游區(qū)域甲基化狀態(tài)在臨床男性不育與輔助生殖技術(shù)中的意義40-42
• 第五部分 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 綜述48-62
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 附錄62-69
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況69-70
• 致謝70-72
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷72

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 皮建華,張德明,郭潤(rùn)勛;組織化學(xué)方法檢測(cè)精液斑的應(yīng)用[J];四川警官高等專科學(xué)校學(xué)報(bào);2003年02期

2 賈靜濤;十九世紀(jì)血痕、精液斑等物證檢驗(yàn)史[J];法醫(yī)學(xué)雜志;1995年02期

3 杜舟,朱遠(yuǎn)亮;對(duì)輸精管結(jié)扎術(shù)后的強(qiáng)奸犯所留精液斑的檢驗(yàn)[J];法律與醫(yī)學(xué)雜志;1997年02期

4 歐炯文，李英碧，吳梅筠;用抗人精子單克隆抗體確證人類精斑與混合斑[J];華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1994年02期

5 鄧瑞予;崔萬(wàn)福;;型特異性沉淀素血清檢驗(yàn)人唾液斑精斑ABO血型的研究與應(yīng)用[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;1987年01期

6 侯一平;吳梅筠;;人類精漿特異性抗原P_(30)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;1988年04期

7 萬(wàn)立華;陳希正;;不同溫度對(duì)精液(斑)中酸性磷酸酶(ACP)活性的影響[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;1986年01期

8 Gill P;洪賢慷;;DNA指紋圖譜在法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用[J];國(guó)際遺傳學(xué)雜志;1986年05期

9 袁勃;;DNA指紋在法醫(yī)中的應(yīng)用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);1986年05期

10 賈淑琴,高富愿,劉雅誠(chéng);一例敵敵畏污染的精斑ABO血型檢測(cè)[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;1995年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 趙嘉言;張娟;吳東;熊惠芬;;精液、血液混合斑痕中之精液ABO系血型測(cè)定初探[A];首屆中國(guó)法醫(yī)物證學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];1993年

2 應(yīng)宗敏;;法醫(yī)物證中單克隆抗A、抗B血清應(yīng)用的體會(huì)[A];第二次全國(guó)法醫(yī)物證學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];1998年

3 劉開(kāi)會(huì);宋國(guó)林;李生彥;;100例同一個(gè)體體液斑中ABH血型物質(zhì)分泌強(qiáng)度的比較[A];首屆中國(guó)法醫(yī)物證學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];1993年

4 孫大宏;侯一平;李英碧;吳謹(jǐn);孟海英;Prina M;王惠;張健;毛炯;;D20S161和D8S384兩個(gè)基因座在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[A];全國(guó)第六次法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要集[C];2000年

5 孫大宏;侯一平;李英碧;吳謹(jǐn);孟海英;Prinz M;王惠;張健;毛炯;;D20S161和D8S384兩個(gè)基因座在法醫(yī)學(xué)中的的應(yīng)用[A];中國(guó)法醫(yī)學(xué)最新科研與實(shí)踐（一）——全國(guó)第六次法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文精選[C];2000年

6 修崇賢;傅穎;封宇;;無(wú)精子精斑的STR基因型檢驗(yàn)研究及在物證鑒定中的應(yīng)用[A];第二屆全國(guó)法醫(yī)DNA檢驗(yàn)技術(shù)研討會(huì)論文專輯[C];2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 嚴(yán)鵬;人類H19基因差異甲基化區(qū)域用于精斑鑒定的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2014年

2 岳陽(yáng)陽(yáng);基于PDP-MCA的MVP分型技術(shù)及其在斑痕鑒別中的應(yīng)用[D];河南科技大學(xué);2012年

3 范光耀;DNA甲基化作為法醫(yī)學(xué)組織標(biāo)記的可行性研究[D];河南科技大學(xué);2010年

4 張艷萍;DYS-714/723/650/713-plex通用引物嵌合復(fù)合擴(kuò)增及在法醫(yī)學(xué)實(shí)際檢案中的應(yīng)用性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號(hào)：1100882