本文關鍵詞：人類H19基因差異甲基化區(qū)域用于精斑鑒定的研究

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【摘要】：目的：本課題通過調查父源印記基因H19上游區(qū)域在人體血液、正常精子、少弱精子癥患者精子中的甲基化狀態(tài)，建立利用定量PCR對精斑及疑有精子的混和斑進行鑒定的方法，并初步討論其在法醫(yī)學、臨床男性不育中的意義。 方法：1.應用甲基化敏感性限制性內切酶-qPCR(MSRE-qPCR)法，對32例血液樣本、32例正常精液樣本及17例少弱精子癥患者精液樣本中H19基因上游區(qū)域甲基化水平進行分析。 2.對32例血液樣本、32例正常精液樣H19基因上游區(qū)域甲基化水平結果進行統(tǒng)計學分析，并確定判定精子的判別值。 3.應用MSRE-qPCR法，對混和了一定比例全血基因組DNA的精子DNA樣本中H19基因上游區(qū)域甲基化狀態(tài)進行分析，模擬混和斑中精子含量的鑒定。 結果：精子父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平明顯高于血液，32例血液樣本中父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平為55.27±8.36%，32例精子樣本中父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平為101.94±11.66%，17例少弱精子癥患者精液樣本中父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平為80.70±22.30%，以97.66-106.21%做為采用MSRE-qPCR方法分析父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平進行精液斑判定的判別區(qū)間。 結論：精子中父源印記基因H19上游區(qū)域具有高甲基化狀態(tài)，可作為鑒定正常精子的特異性標記，同時本文確定了父源印記基因H19上游區(qū)域甲基化水平，對于健康人群，52.25%-58.28%為純血液斑判別區(qū)間，97.66-106.21%為純精液斑判別區(qū)間，66.63-90.28%為血液與精液混合斑判別區(qū)間。異常精子因其甲基化水平變異大，，因而影響未知樣品的正確判別，但若甲基化水平超過97.66%時仍可判定為純精液斑。
【關鍵詞】：精子鑒定 差異甲基化 H19 MSRE-qPCR 男性不育
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：D919
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 第一部分 前言8-11
• 第二部分 實驗材料與方法11-26
• 1 材料11-15
• 2 方法15-26
• 第三部分 結果26-35
• 1 非人組織中引物對 A、B、C 擴增可能性分析26
• 2 血液及精子 DNA 中 H19 基因上游區(qū)域甲基化狀態(tài)26-28
• 3 甲基化水平檢測結果及精斑點的判別28-33
• 4 應用 qPCR 技術結合 H19 基因組織特異性甲基化模擬疑有精子的混和斑的鑒定33-35
• 第四部分 分析與討論35-42
• 1. 印記基因 H19 甲基化狀態(tài)35-36
• 2. 基因組 DNA 甲基化狀態(tài)檢測方法36-37
• 3. MSRE-qPCR 法檢測父源印記基因 H19 上游區(qū)域甲基化狀態(tài)在法醫(yī)學精子鑒中的意義37-40
• 4. MSRE-qPCR 法檢測父源印記基因 H19 上游區(qū)域甲基化狀態(tài)在臨床男性不育與輔助生殖技術中的意義40-42
• 第五部分 結論42-43
• 參考文獻43-48
• 綜述48-62
• 參考文獻57-62
• 附錄62-69
• 攻讀學位期間發(fā)表論文情況69-70
• 致謝70-72
• 個人簡歷72

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本文編號：1100882