發(fā)布時(shí)間：2017-10-08 00:14

  本文關(guān)鍵詞：四重PCR檢測副溶血性弧菌及其毒力基因方法的建立

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【摘要】：【目的】建立同時(shí)檢測副溶血性弧菌tox R、tdh、trh、tlh基因的四重PCR快速檢測方法。【方法】分別以副溶血性弧菌的tox R、tdh、trh、tlh 4個(gè)基因?yàn)榘谢?設(shè)計(jì)4對(duì)特異性引物,對(duì)4對(duì)引物濃度和退火溫度進(jìn)行優(yōu)化,獲得最佳引物比例和擴(kuò)增條件,建立快速檢測致病性副溶血性弧菌的四重PCR體系。通過特異性驗(yàn)證、靈敏度驗(yàn)證以及模擬樣品檢測進(jìn)行方法確認(rèn)�！窘Y(jié)果】四重PCR體系擴(kuò)增條帶與預(yù)期相符,即115 bp(tox R)、244 bp(tdh)、418 bp(trh)、759 bp(tlh)4個(gè)目的條帶;用74株副溶血性弧菌和37株非目標(biāo)菌的測試結(jié)果表明,所建立的方法有良好的特異性。該方法對(duì)模板DNA的檢測靈敏度為50μg/L,純培養(yǎng)物的檢測靈敏度為6.7×103 CFU/m L;副溶血性弧菌含量為1.36 CFU/g的人工模擬樣品增菌6 h后,tox R、tlh、tdh、trh 4個(gè)基因可同時(shí)被檢出。【結(jié)論】該方法可實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測攜帶tox R、tdh、trh、tlh 4種基因的副溶血性弧菌,對(duì)開展致病性副溶血性弧菌的檢測研究具有一定現(xiàn)實(shí)意義。
【作者單位】： 集美大學(xué)食品與生物工程學(xué)院;廈門市食品科技研發(fā)檢測中心;廈門市疾病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 副溶血性弧菌 四重PCR toxR基因 tdh基因 trh基因 tlh基因
【基金】：福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.2015J01614) 廈門市海洋經(jīng)濟(jì)創(chuàng)新發(fā)展區(qū)域示范項(xiàng)目(No.13PZP002SF24)~~
【分類號(hào)】：R155.5
【正文快照】： 副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)是在海洋環(huán)境中自然存在的一種嗜鹽革蘭氏陰性細(xì)菌,能夠在不同的鹽度及不同的溫度環(huán)境中生存[1-2]。它廣泛存在于海口、江口以及浮游生物、魚類、蝦類、貝類等水產(chǎn)品中[3-4],是沿海國家普遍存在的食源性致病菌之一[5-9]。副溶血性弧

【相似文獻(xiàn)】

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1 丁珊珊;楊振泉;李寶利;潘志明;焦新安;;檸檬酸和溫度聯(lián)合處理對(duì)海水魚中副溶血性弧菌的殺滅作用[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2013年02期

2 高圍n，

本文編號(hào)：990889