本文關鍵詞：七種雙酚類化合物雌激素活性評價及其在食品中檢測方法的建立和應用

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【摘要】：雙酚S（Bisphenol S，BPS）、雙酚F（Bisphenol F，BPF）、雙酚A（Bisphenol A，BPA）、雙酚B（Bisphenol B，BPB）、雙酚AF（Bisphenol AF，BPAF）、四氯雙酚A（Tetrachlorobisphenol A，TCBPA）和四溴雙酚A（Tetrabromobisphenol A，TBBPA）是7種常見的雙酚類化合物，廣泛應用于工業(yè)生產中。同時這7種化合物也是備受關注的環(huán)境內分泌干擾物和污染物。 本研究針對這7種化合物開展了一系列的工作，其中主要內容有：1.比較研究了7中雙酚類化合物的雌激素效應，包括利用WST-8新型四唑鹽細胞增殖實驗，考察了這7種化合物對人乳腺癌細胞T47D和MCF-7的增殖效應，通過實時熒光定量PCR檢測了這7種化合物對雌激素受體α下游基因組織蛋白酶D（CTSD）、乳腺癌雌激素調控蛋白1（GREB1）和三葉因子1（TFF1）表達的調控作用，考察了BPAF對ERK的激活作用。2.利用固相萃取結合LC-MS/MS技術建立了谷物類食品中BPS、BPF、BPA、BPB和BPAF的檢測方法。3.利用固相萃取結合LC-MS/MS技術建立了酒水飲料中這7種雙酚類化合物的檢測方法。4.利用所建立的檢測方法對我國部分省市總膳食樣品中谷物類、豆類、薯類和酒水飲料類中雙酚類化合物進行暴露評估。主要結果如下： 1.在所選濃度范圍內，除了TBBPA，其他6種雙酚類化合物均能顯著刺激T47D和MCF-7細胞的增殖，并且呈現出明顯的劑量效應。通過S曲線擬合，計算得出這6種化合物的半數效應濃度，并得出其雌激素活性大小為：BPAFBPBBPABPFBPSTCBPATBBPA；在所選濃度范圍內，7種雙酚類化合物均能顯著誘導雌激素受體α下游基因的表達；BPAF在100nmol/L濃度下即能快速激活MAPKs信號通路中ERK的磷酸化水平，通過非基因組途徑發(fā)揮其內分泌干擾效應。 2.建立了谷物類食品中五種雙酚類化合物的檢測方法：樣品經乙腈超聲提取兩次后，大米、面粉經HLB柱富集凈化，玉米面經HLB串聯Sep-Pak NH2柱富集凈化，最后用高效液相色譜串聯質譜（LC-MS/MS）檢測目標化合物。5種目標化合物在3種基質中高中低加標水平回收率分別為62.2%-117.4%、61.2%-121.6%和60.8%-112.3%，相對標準偏差小于20%，定量限在0.01-0.25μg/kg之間。應用所建方法，對北京市售的12份谷物類食品進行了檢測，結果發(fā)現BPS、BPA和BPAF檢出率較高，其中BPS和BPA達到100%。 3.建立了酒水飲料中7種雙酚類化合物的檢測方法：樣品上樣前用甲酸將PH調至3-5，果汁、可樂直接經Plexa柱富集凈化、白酒用超純水稀釋一倍后經Plexa柱富集凈化，最后用LC-MS/MS方法檢測目標化合物。7種目標化合物在果汁、可樂和白酒中3個加標水平回收率分別為81.1%-111.1%、59.4%-101.1%、79.2%-102.9%，相對標準偏差小于11%，定量限在0.0015-0.1μg/L之間。將該方法應用于北京市采集的樣品，，檢測發(fā)現BPA檢出率高達88%，而其他幾種物質的檢出率則相對較低。 4.利用上述所建方法，對采集自我國河北、上海、福建和廣西的101份膳食樣品（谷物類、豆類、薯類、水及飲料、酒類）進行檢測，結果發(fā)現BPA和BPS檢出率較高，而BPB、TCBPA和TBBPA均未檢出。
【關鍵詞】：雙酚類化合物 雌激素活性 液相色譜串聯質譜 谷物 總膳食研究
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 中英文縮寫對照表7-12
• 第1章 引言12-20
• 1.1 前言12-13
• 1.3 雙酚類化合物的毒理學效應13-14
• 1.4 雙酚類化合物在環(huán)境基質中的暴露水平14-16
• 1.4.1 雙酚類化合物在室內灰塵中的暴露水平15
• 1.4.2 雙酚類化合物在土壤和沉積物中的暴露水平15
• 1.4.3 雙酚類化合物在水中的暴露水平15-16
• 1.5 雙酚類化合物在食品中的暴露水平16
• 1.6 食品基質中雙酚類化合物的分析方法16-17
• 1.7 立題背景與研究內容17-20
• 1.7.1 選題依據17-18
• 1.7.2 研究內容18-20
• 第2章 7 種雙酚類化合物雌激素活性的評價20-37
• 2.1 主要儀器、試劑及材料20-21
• 2.2 細胞培養(yǎng)21
• 2.3 細胞增殖實驗21-22
• 2.4 細胞相關基因的表達22-25
• 2.4.1 細胞總 mRNA 的提取22-23
• 2.4.2 cDNA 模版的制備23
• 2.4.3 熒光定量 PCR23-25
• 2.5 Western blot 實驗25
• 2.6 統計學處理25-26
• 2.7 實驗結果26-34
• 2.7.1 BPs 對乳腺癌細胞增殖影響26-28
• 2.7.2 7 種雙酚類化合物和雌二醇半數效應濃度28-29
• 2.7.3 BPs 對雌激素受體α下游基因表達水平的影響29-33
• 2.7.4 Western blot 實驗結果33-34
• 2.8 討論34-36
• 2.9 本章小結36-37
• 第3章 谷物類食品中 5 種雙酚類物質檢測方法的建立37-47
• 3.1 實驗材料與方法37-40
• 3.1.1 儀器與試劑37-38
• 3.1.2 標準溶液的配制38
• 3.1.3 樣品前處理38
• 3.1.4 色譜質譜條件38-39
• 3.1.5 質量控制39-40
• 3.1.6 方法學40
• 3.2 結果與討論40-45
• 3.2.1 前處理條件的優(yōu)化40-43
• 3.2.2 方法學確證43-45
• 3.3 實際樣品的測定及分析45
• 3.4 本章小結45-47
• 第4章 酒水及飲料中 7 種雙酚類物質檢測方法的建立47-55
• 4.1 實驗材料與方法47-49
• 4.1.1 實驗試劑與儀器47
• 4.1.2 樣品前處理47-48
• 4.1.3 色譜質譜條件48
• 4.1.4 標準溶液的配制48
• 4.1.5 質量控制48
• 4.1.6 方法學確證48-49
• 4.2 結果與討論49-53
• 4.2.1 前處理條件的優(yōu)化49-52
• 4.2.2 方法學確證52-53
• 4.3 實際樣品的測定及分析53-54
• 4.4 本章小結54-55
• 第5章 雙酚類化合物檢測方法在中國部分省市膳食暴露評估中的應用55-64
• 5.1 實驗方法55-58
• 5.1.1 調查地區(qū)選擇55-56
• 5.1.2 總膳食聚類56
• 5.1.3 樣品采集及處理56
• 5.1.4 樣品分析56-57
• 5.1.5 質量控制57-58
• 5.1.6 攝入量評估方法58
• 5.1.7 數據處理58
• 5.2 結果與討論58-62
• 5.2.1 膳食樣品中 BPs 檢測狀況58-60
• 5.2.2 BPs 在膳食樣品中的分布60-61
• 5.2.3 我國居民雙酚類化合物攝入量水平61-62
• 5.3 本章小結62-64
• 第6章 結論與展望64-66
• 6.1 結論64
• 6.2 展望64-66
• 致謝66-68
• 參考文獻68-73
• 碩士期間研究成果73

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 楊蘊嘉;牛宇敏;楊奕;張晶;邵兵;;在線固相萃取-液相色譜串聯質譜法測定飲用水中的雙酚A和壬基酚[J];衛(wèi)生研究;2013年01期

本文編號：882857