發(fā)布時(shí)間：2017-09-18 22:21

  本文關(guān)鍵詞：不同無(wú)機(jī)納米材料對(duì)GFP基因轉(zhuǎn)染效率的影響和結(jié)核保護(hù)性抗原基因TB10.4真核表達(dá)載體的構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 無(wú)機(jī)納米 細(xì)胞毒性 轉(zhuǎn)染 熒光表達(dá) 重組質(zhì)粒

【摘要】：目的：隨著納米技術(shù)與生物醫(yī)學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展和交叉融合，無(wú)機(jī)納米材料在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用日益廣泛，為疾病的治療、疫苗設(shè)計(jì)、早期診斷提供了新的思路。20世紀(jì)80年代以來(lái)全球結(jié)核病疫情日趨嚴(yán)峻，新型高效的結(jié)核病疫苗和診斷試劑的研發(fā)越發(fā)迫切。將無(wú)機(jī)納米材料應(yīng)用到結(jié)核疫苗的研究有望取得某些突破性進(jìn)展。本研究選取3種無(wú)機(jī)納米材料（納米SiO2、ZnO納米管和ZnO納米棒），探究它們的細(xì)胞毒性和對(duì)綠色熒光蛋白（GFP，Green Fluorescent Protein)基因轉(zhuǎn)染效率的影響，并構(gòu)建基因TB10.4的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pEGFP-N1-TB10.4，為進(jìn)一步將納米材料運(yùn)用到結(jié)核疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。 方法：利用3種納米材料分別作用于THP-1細(xì)胞和RAW267.4細(xì)胞，確定對(duì)細(xì)胞活性無(wú)明顯影響的最適轉(zhuǎn)染濃度，，進(jìn)而裝載GFP真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染RAW267.4細(xì)胞，在熒光顯微鏡下觀測(cè)綠色熒光蛋白的表達(dá)情況，與脂質(zhì)體和裸質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率相比較進(jìn)而確定納米材料對(duì)GFP基因的轉(zhuǎn)染效率。利用分子生物學(xué)技術(shù)克隆結(jié)核分枝桿菌保護(hù)性抗原TB10.4基因并將其與真核表達(dá)載體pEGFP-N1連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-N1-TB10.4。結(jié)果：1.確定了對(duì)細(xì)胞活性無(wú)明顯影響的最適轉(zhuǎn)染濃度，納米SiO2最適作用濃度為50μg/mL；ZnO納米棒和納米管最適作用濃度均為10μg/mL； 2.納米材料轉(zhuǎn)染組在轉(zhuǎn)染后24h和48h均觀測(cè)到綠色熒光蛋白的表達(dá)，表達(dá)率為5%，顯著低于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組。 3.成功克隆結(jié)核分枝桿菌保護(hù)性抗原TB10.4基因并構(gòu)建真核表達(dá)重組質(zhì)粒pEGFP-N1-TB10.4。結(jié)論：1.無(wú)機(jī)納米顆粒的細(xì)胞毒性隨著濃度的增加而升高，并與納米顆粒的粒徑、形狀、分散性及表面修飾等物理化學(xué)性質(zhì)有關(guān)； 2.3種無(wú)機(jī)納米顆粒有介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞的功能，但轉(zhuǎn)染效率不及脂質(zhì)體； 3.成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-N1-TB10.4。
【關(guān)鍵詞】：無(wú)機(jī)納米 細(xì)胞毒性 轉(zhuǎn)染 熒光表達(dá) 重組質(zhì)粒
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 前言7-8
• 第一章 文獻(xiàn)綜述8-12
• 1.1 納米材料概述8
• 1.2 無(wú)機(jī)納米材料在診斷中的應(yīng)用8-9
• 1.3 無(wú)機(jī)納米材料在治療中的應(yīng)用9-10
• 1.4 無(wú)機(jī)納米材料在預(yù)防中的應(yīng)用10
• 1.5 展望10-12
• 第二章 材料與方法12-24
• 2.1 材料12-15
• 2.2 方法15-24
• 第三章 結(jié)果與分析24-40
• 3.1 無(wú)機(jī)納米顆粒細(xì)胞毒性的檢測(cè)結(jié)果24-35
• 3.2 無(wú)機(jī)納米顆粒運(yùn)載 pEGFP-N1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 RAW267.4 細(xì)胞35-36
• 3.3 結(jié)核保護(hù)性抗原基因 TB10.4 的克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建36-40
• 第四章 討論40-42
• 第五章 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 作者簡(jiǎn)介48-49
• 致謝49

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 閆國(guó)和,粟永萍,王軍平,汪代杰,艾國(guó)平,王鋒超,冉新澤,程天民;重組真核表達(dá)載體pEGFP-N1/PDGF-A的構(gòu)建及真皮干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年20期

2 羅忠;蔡開(kāi)勇;張蓓璐;段霖;劉艾萍;龔端;;介孔硅納米儲(chǔ)存器在智能藥物釋放系統(tǒng)的應(yīng)用[J];化學(xué)進(jìn)展;2011年11期

3 趙宇亮,柴之芳;納米生物效應(yīng)研究進(jìn)展[J];中國(guó)科學(xué)院院刊;2005年03期

4 陳霞;徐聞歡;徐娟;趙聃;王迎偉;;結(jié)核桿菌ESAT-6抗原多表位DNA疫苗的構(gòu)建與表達(dá)[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年04期

5 劉蓉娜;方習(xí)靜;張愛(ài)華;楊曉明;張雅婷;閉蘭;;結(jié)核DNA疫苗質(zhì)粒pVAX1-Rv3407的構(gòu)建及體外表達(dá)[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2012年02期

本文編號(hào)：877832