本文關(guān)鍵詞：丙烯酰胺染毒對仔鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP和S-100β表達(dá)的影響

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【摘要】：丙烯酰胺(Acrylamide,ACR)是一種常見的化工原料,具有神經(jīng)毒性、致癌性、生殖發(fā)育毒性。ACR可以透過胎盤屏障和乳汁傳遞給后代,而胚胎期和哺乳期是神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的重要時期,母源性ACR暴露會對子代神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育造成一定影響。海馬齒狀回是神經(jīng)發(fā)生的重要部位,神經(jīng)細(xì)胞在此增殖、分化并遷移到不同的腦區(qū)。星形膠質(zhì)細(xì)胞(Astrocytes,AS)是腦內(nèi)的支持和營養(yǎng)細(xì)胞,在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中對神經(jīng)細(xì)胞的遷移分化、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)以及突觸的建立等方面起著重要作用。GFAP和S-100β是AS發(fā)育過程中特異性表達(dá)的兩種蛋白。GFAP構(gòu)成AS的細(xì)胞骨架,被公認(rèn)為AS的特征性標(biāo)記物。S-100β是一種鈣結(jié)合蛋白,是腦損傷早期的特異性標(biāo)志物之一,對腦損傷起重要調(diào)控作用。為此,我們擬通過孕鼠灌胃給藥建立SD大鼠ACR的神經(jīng)發(fā)育中毒模型,檢測新生鼠和21d斷乳期大鼠海馬內(nèi)GFAP和S-100β的表達(dá),為進(jìn)一步探究ACR的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育毒性提供新的線索。目的:檢測丙烯酰胺染毒對仔鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP和S-100β的表達(dá)影響,并探討相關(guān)機制。方法:1.動物模型的建立:64只體重為240~280g SD大鼠,雌雄各半,以1:1比例隨機交配,若查到陰道栓者,則認(rèn)為交配成功,并把當(dāng)天定為懷孕第“0”d。每天稱量雌鼠的體重,若懷孕第“6”d體重比懷孕第“0”d體重增長20g,則確定該雌鼠已受孕。將孕鼠隨機分成4組,每組8只,實驗組動物灌胃給藥acr的劑量分別為4mg/kg,8mg/kg和16mg/kg,對照組給予相應(yīng)體積ddh2o,每天1次,連續(xù)兩周。通過觀察孕鼠和子鼠的體重、神經(jīng)行為學(xué)改變以及仔鼠海馬he染色的結(jié)果來評估模型是否成功。2.新生鼠和21d斷乳期大鼠海馬gfap和s-100β的表達(dá):利用免疫組織化學(xué)和westernblot技術(shù)對新生鼠和21d斷乳期大鼠海馬gfap和s-100β的表達(dá)進(jìn)行定性和半定量分析。結(jié)果:1.孕鼠神經(jīng)毒性表現(xiàn)染毒結(jié)束后,8mg/kg組和16mg/kg組的孕鼠與對照組相比,后支撐力明顯下降,其中16mg/kg組呈現(xiàn)重度神經(jīng)中毒癥狀;體重方面結(jié)果顯示,8mg/kg和16mg/kg組的孕鼠體重顯著低于對照組。2.胚胎發(fā)育毒性8mg/kg組和16mg/kg組與對照組相比,新生鼠數(shù)目減少,活胎率降低。此外,16mg/kg組新生鼠體重顯著低于對照組。3.21d斷乳期大鼠神經(jīng)毒性表現(xiàn)與對照組及4mg/kg組相比,8mg/kg組和16mg/kg組21d斷乳期大鼠后支撐力下降,出現(xiàn)與母鼠類似的典型acr神經(jīng)中毒癥狀;體重方面結(jié)果顯示,8mg/kg組和16mg/kg組21d斷乳期大鼠體重低于對照組。4.he染色結(jié)果與對照組相比,隨著acr給藥濃度的加大,實驗組新生鼠海馬顆粒層相鄰神經(jīng)細(xì)胞間隙變大,排列疏松,以16mg/kg最明顯。21d斷乳期大鼠he染色結(jié)果與新生鼠he染色結(jié)果基本一致。5.新生鼠海馬gfap和s-100β的表達(dá):與對照組相比,實驗各組新生鼠海馬內(nèi)的gfap呈現(xiàn)濃度依賴性降低,而s-100β的表達(dá)卻顯著上升。6.21d斷乳期大鼠海馬gfap和s-100β表達(dá)的影響:與對照組相比,實驗各組21斷乳期大鼠gfap呈現(xiàn)濃度依賴性表達(dá)增加,而s-100β的表達(dá)無顯著差異。結(jié)論:(1)ACR具有胚胎發(fā)育毒性,能夠降低新生鼠和21d斷乳期大鼠體重。(2)ACR具有神經(jīng)發(fā)育毒性,能夠誘導(dǎo)21d斷乳期大鼠后支撐力下降以及新生鼠和21d斷乳期大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的致密度降低,可能影響了神經(jīng)細(xì)胞的遷移和分化。(3)ACR降低新生鼠海馬區(qū)GFAP的表達(dá)以及提高新生鼠海馬區(qū)S-100β的表達(dá),可能抑制AS的發(fā)育。(4)ACR提高21d斷乳期大鼠海馬GFAP的表達(dá),可能刺激AS的活化增殖,而對S-100β的表達(dá)沒有影響。
【關(guān)鍵詞】：丙烯酰胺 仔鼠 海馬 GFAP S-100β
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 序言12-17
• 1.ACR的理化性質(zhì)和體內(nèi)代謝12-13
• 2.ACR的神經(jīng)發(fā)育毒性研究現(xiàn)狀13-14
• 3.星形膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)發(fā)育中的作用14-15
• 4.ACR對星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響研究現(xiàn)狀15
• 5.研究目的和意義15-17
• 材料與方法17-29
• 1. 實驗材料17-19
• 1.1 主要試劑17-18
• 1.2 主要儀器和耗材18-19
• 1.3 實驗動物19
• 2. 實驗方法19-29
• 2.1 常用試劑的配置19-21
• 2.2 動物造模21-22
• 2.3 動物取材22-24
• 2.4 石蠟包埋和切片制作24-25
• 2.5 蘇木素-伊紅染色（HE染色）25
• 2.6 免疫組織化學(xué)檢測25-26
• 2.7 Western blot檢測26-28
• 2.8 統(tǒng)計學(xué)分析28-29
• 結(jié)果29-50
• 1.孕鼠神經(jīng)毒性表現(xiàn)29-31
• 1.1 孕鼠神經(jīng)行為學(xué)改變29
• 1.2 孕鼠體重變化29-31
• 2.胚胎發(fā)育毒性31-35
• 2.1 新生鼠出生一般狀況31-32
• 2.2 新生鼠體重變化32-33
• 2.3 1d斷乳期大鼠神經(jīng)毒性表現(xiàn)33-35
• 2.3.1 1d斷乳期大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變33-34
• 2.3.2 1d斷乳期大鼠體重變化34-35
• 3. 新生鼠和 21d斷乳期大鼠海馬HE染色結(jié)果35-37
• 3.1 新生鼠海馬HE染色結(jié)果35-36
• 3.2 21d斷乳期大鼠海馬HE染色結(jié)果36-37
• 4. ACR對新生鼠海馬GFAP表達(dá)的影響37-40
• 4.1 新生鼠海馬GFAP免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果37-39
• 4.2 新生鼠海馬GFAP Western blot半定量分析實驗結(jié)果39-40
• 5. ACR對新生鼠海馬S-100β 表達(dá)的影響40-43
• 5.1 新生鼠海馬S-100β 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果40-42
• 5.2 新生鼠海馬S-100β Western blot半定量分析實驗結(jié)果42-43
• 6. ACR對 21d斷乳期大鼠海馬GFAP表達(dá)的影響43-46
• 6.1 21d斷乳期大鼠海馬GFAP免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果43-45
• 6.2 21d斷乳期大鼠海馬GFAP Western blot半定量分析實驗結(jié)果45-46
• 7. ACR對 21d斷乳期大鼠海馬S-100β 表達(dá)的影響46-50
• 7.1 21d斷乳期大鼠海馬S-100β 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果46-48
• 7.2 21d斷乳期大鼠海馬S-100β Western blot半定量分析實驗結(jié)果48-50
• 討論50-61
• 1.ACR具有胚胎發(fā)育毒性50-52
• 2.ACR具有神經(jīng)發(fā)育毒性52-54
• 3.ACR對仔鼠海馬GFAP表達(dá)的影響54-58
• 3.1 ACR對新生鼠海馬GFAP表達(dá)的影響54-56
• 3.2 ACR對 21d斷乳期大鼠海馬GFAP表達(dá)的影響56-58
• 4.ACR對仔鼠海馬S-100β 表達(dá)的影響58-61
• 4.1 ACR對新生鼠海馬S-100β 表達(dá)的影響59-60
• 4.2 ACR對 21d斷乳期大鼠海馬S-100β 表達(dá)的影響60-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-71
• 中英文縮寫語對照表71-72
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章72-73
• 附件73-81
• 致謝81

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本文編號：823600