本文關(guān)鍵詞：自噬在高碘神經(jīng)毒性中的作用研究

  更多相關(guān)文章： 高碘 神經(jīng)毒性 自噬 氧化應(yīng)激

【摘要】：碘(Indine)是人體必需微量元素之一,人體碘缺乏或碘過(guò)量都有可能引起相應(yīng)的疾病。大量流行病學(xué)資料和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提示高碘可引起以學(xué)習(xí)記憶損害為主的神經(jīng)毒性,但其引起神經(jīng)毒性的途徑機(jī)制仍不清楚。自噬是細(xì)胞的代謝方式之一,它可以通過(guò)如清除細(xì)胞內(nèi)大分子物質(zhì)、代謝產(chǎn)物等方式保護(hù)受損細(xì)胞;但過(guò)度的自噬則有可能引發(fā)細(xì)胞死亡,稱為自噬性死亡或Ⅱ型程序性細(xì)胞死亡(Ⅱ-Programmol/Led Cell Death,Ⅱ-PCD)。有關(guān)高碘神經(jīng)毒性的一系列研究結(jié)果也表明,高碘可使動(dòng)物腦組織產(chǎn)生自由基,降低抗氧化酶活性以及引起DNA損傷,而這些改變都可以誘導(dǎo)自噬發(fā)生,但自噬在高碘神經(jīng)毒性中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究以人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y細(xì)胞)為研究對(duì)象,研究高濃度碘對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞自噬水平的影響,探討自噬在高碘所致SH-SY5Y細(xì)胞死亡中的作用,為進(jìn)一步研究高碘的神經(jīng)毒性提供依據(jù)。第一部分高碘對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞自噬水平的影響目的:研究高濃度碘化物對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞自噬水平的影響方法:不同濃度KI(0、10、20、30 mmol/L)處理SH-SY5Y細(xì)胞24 h后,采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力;使用透射電子顯微鏡觀察自噬體結(jié)構(gòu),多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)自噬囊泡示蹤劑丹酰戊二胺(Monodansylcadaverine,MDC)熒光強(qiáng)度;并采用PCR和Western blot方法分別檢測(cè)自噬相關(guān)分子LC3、Beclin1和p62在基因和蛋白水平的表達(dá)情況,觀察KI對(duì)于自噬相關(guān)基因和蛋白的劑量-效應(yīng)關(guān)系。結(jié)果:CCK-8結(jié)果顯示,10 mmol/L KI染毒組細(xì)胞存活率與對(duì)照組相比較無(wú)差異(P0.05),20 mmol/L KI染毒組細(xì)胞存活率與對(duì)照組和10 mmol/L染毒組相比明顯下降(P0.05),30 mmol/L KI染毒組細(xì)胞存活率與其余三組相比較顯著下降(P0.05)。電鏡結(jié)果顯示,對(duì)照組未見(jiàn)異常變化,10 mmol/L染毒組細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)輕微的線粒體擴(kuò)張但未見(jiàn)明顯的雙層膜自噬體結(jié)構(gòu),20 mmol/L染毒組細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)明顯的線粒體腫脹及雙層膜自噬體結(jié)構(gòu),在30 mmol/L染毒組中以上改變更加明顯。20、30 mmol/L KI染毒組MDC熒光強(qiáng)度比對(duì)照組明顯上升(P0.05),而10 mmol/L KI染毒組無(wú)明顯差異。與對(duì)照組相比,30 mmol/L KI染毒組自噬相關(guān)基因和蛋白LC3、Beclin1和p62表達(dá)均明顯上升(P0.05),而10、20 mmol/L KI染毒組中LC3、Beclin1和p62表達(dá)與對(duì)照組無(wú)差異(P0.05)。結(jié)論:一定劑量的KI可致SH-SY5Y細(xì)胞死亡,能誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生自噬,且二者存在著劑量依賴性的自噬相關(guān)分子表達(dá)的上調(diào)。第二部分自噬在高濃度碘化物神經(jīng)毒性中的作用目的:探討自噬在高濃度碘化物神經(jīng)毒性中所發(fā)揮的作用方法:應(yīng)用1 mmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)或200μmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)與30 mmol/L KI同時(shí)處理細(xì)胞,24 h后檢測(cè)自噬相關(guān)分子LC3、Beclin1和p62的表達(dá)變化;以不同濃度(0、10、20、30 mmol/L)KI和1 mmol/L 3-MA共同處理細(xì)胞,24 h后運(yùn)用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力。結(jié)果:與單純30 mmol/L KI染毒組相比,30 mmol/L KI+3-MA和30 mmol/L KI+NAC干預(yù)組的自噬相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)均明顯下降(P0.05);施加干預(yù)后,20、30 mmol/L KI染毒組的細(xì)胞存活率比干預(yù)前顯著上升(P0.05)。結(jié)論:高碘誘導(dǎo)的自噬可能通過(guò)氧化應(yīng)激和PI3K/Akt/mT OR通路介導(dǎo),自噬作為一種死亡方式參與高碘的神經(jīng)毒性作用。
【關(guān)鍵詞】：高碘 神經(jīng)毒性 自噬 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明9-10
• 前言10-12
• 一、高碘對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞自噬水平的影響12-28
• 1.1 材料和方法12-22
• 1.2 結(jié)果22-26
• 1.3 討論26-27
• 1.4 小結(jié)27-28
• 二、自噬在高碘神經(jīng)毒性中的作用28-45
• 2.1 材料和方法28-39
• 2.2 結(jié)果39-43
• 2.3 討論43-44
• 2.4 小結(jié)44-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明50-51
• 綜述 p62蛋白與選擇性自噬51-59
• 綜述參考文獻(xiàn)55-59
• 致謝59-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷60

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本文編號(hào)：819400