本文關(guān)鍵詞：大豆異黃酮代謝產(chǎn)物對秀麗隱桿線蟲的抗衰老作用及其機制研究

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【摘要】：本文以秀麗隱桿線蟲為研究對象,首次研究二氫黃豆苷原(Dihydrodaidzein,簡稱DHD)、二氫染料木素(Dihydrogenistein簡稱DHG)、去氧甲基安哥拉紫檀素(O-desmethylangolensin,簡稱O-Dma)、雌馬酚(Equol,簡稱EQ)以及5-羥基-雌馬酚(5-Hydroxy-equol,簡稱5-OH-EQ)對線蟲壽命的影響,發(fā)現(xiàn)0.2mmol/L的EQ和5-OH-EQ能顯著延長秀麗隱桿線蟲平均壽命,相同濃度的DHD和DHG對線蟲壽命無顯著影響,相同濃度的O-Dma則能顯著縮短線蟲平均壽命。在供試的5種不同大豆異黃酮代謝產(chǎn)物中,產(chǎn)物5-OH-EQ對線蟲壽命延長效果最佳。代謝產(chǎn)物5-OH-EQ為100%左旋-5-羥基-雌馬酚((一)一5-OH-EQ). 通過測定不同濃度的(0.1mmol/L～1.0mmol/L)(一)-5-OH-EQ對線蟲壽命的影響,發(fā)現(xiàn)較低濃度的(一)-5-OH-EQ可顯著延長線蟲壽命,以0.1mmol/L～0-2mmol／L的(一)-5-OH-EQ對線蟲抗衰老效果最佳；當濃度高于08mmol/L時,(-)-5-OH-EQ反而會導致線蟲壽命明顯減短。由于濃度為0.1mmol/L的()-5-OH-EQ和濃度為0.2mmol/L的()-5-OH-EQ在對線蟲抗衰老作用上無顯著差異,因而選用01mmol/L的()-5-OH-EQ對延壽機制進行研究。急性熱應(yīng)激和胡桃醌導致的氧化損傷試驗結(jié)果表明,01mmol/L的()-5-OH-EQ既能顯著增強秀麗隱桿線蟲的耐熱性,同時又能顯著增強線蟲的抗氧化能力,說明()-5-OH-EQ對線蟲的延壽作用可能與增強其對環(huán)境脅迫的抵抗能力相關(guān)。此外,0.1mmol/L的()-5-OH-EQ對秀麗隱桿線蟲生殖能力無明顯影響,表明(-)-5-OH-EQ對線蟲的延壽作用并不是通過生殖和壽命之間的“權(quán)衡利弊”機制進行調(diào)控的。 實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,暴露于01mmol/L(一)-5-OH-EQ的線蟲,其體內(nèi)aaf-2和tub-1的基因表達量顯著下調(diào),表明0.1mmol/L的()-5-OH-EQ對線蟲的延壽作用可能依賴于Insulin/IGF-1信號轉(zhuǎn)導通路。為進一步證實()-5-OH-EQ對線蟲的延壽作用是依賴于Insulin/IGF-1信號轉(zhuǎn)導途徑,我們分別測定了濃度為0.1mmol/L的()-5-OH-EQ對線蟲突變株daf-2(e1370)和daf-16(mu86)壽命的影響。研究結(jié)果表明,0.1mmol/L的(一)-5-OH-EQ對這兩株突變體均無顯著延壽作用,表明(一)-5-OH-EQ對線蟲的延壽作用確實是通過DAF-2/DAF-16Insulin/IGF-1途徑進行調(diào)控的。 值得一提的是,實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,daf-16下游一些與衰老相關(guān)的應(yīng)激因子(如-kn-l,sod-3和hspl6.2)的表達量與對照組相比顯著下調(diào)。有報道稱只有一些強抗氧化劑(如Vc)可導致與衰老相關(guān)的應(yīng)激因子下調(diào)。通過測定大豆異黃酮不同代謝產(chǎn)物體外清除超氧陰離子自由基能力發(fā)現(xiàn),相同濃度下5-OH-EQ的體外清除能力均顯著高于其余大豆異黃酮代謝產(chǎn)物。因此,上述與衰老相關(guān)基因的顯著下調(diào)可能與5-OH-EQ的強抗氧化特性直接相關(guān)。 通過本研究國內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn),大豆異黃酮染料木素代謝產(chǎn)物(一)-5-OH-EQ既可顯著延長線蟲壽命,同時又能顯著增強線蟲耐熱和抗氧化應(yīng)激能力；代謝產(chǎn)物(一)-5-OH-EQ延長線蟲壽命是通過DAF-2/DAF-16Insulin/IGF-1信號轉(zhuǎn)導途徑進行調(diào)控。由于Insulin/IGF-1信號轉(zhuǎn)導途徑在人體內(nèi)也發(fā)揮著極其重要的調(diào)節(jié)作用,本研究為日后將(一)-5-OH-EQ開發(fā)為人類抗衰老藥物提供了重要理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：大豆異黃酮代謝產(chǎn)物 秀麗隱桿線蟲 壽命 抗性 生殖能力 Insulin/IGF-1信號通路
【學位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R151
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略詞表11-12
• 第一章 前言12-20
• 1.1 大豆異黃酮的組成及其代謝產(chǎn)物的生理功能12-14
• 1.1.1 大豆異黃酮的種類及其結(jié)構(gòu)12
• 1.1.2 大豆異黃酮的體內(nèi)代謝12-13
• 1.1.3 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物的生物學功能13-14
• 1.2 大豆異黃酮轉(zhuǎn)化菌株的研究現(xiàn)狀14-15
• 1.3 模式生物——秀麗隱桿線蟲研究概況15-18
• 1.3.1 秀麗隱桿線蟲概述15-16
• 1.3.2 秀麗隱桿線蟲作為抗衰老模型的優(yōu)勢16-17
• 1.3.3 秀麗隱桿線蟲的壽命延長機制17-18
• 1.3.4 秀麗隱桿線蟲作為模式動物在抗衰老藥物方面的研究18
• 1.4 研究意義和創(chuàng)新點18-20
• 1.4.1 研究意義18-19
• 1.4.2 研究的創(chuàng)新點19-20
• 第二章 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物的合成與制備20-25
• 2.1 試驗材料20-21
• 2.1.1 藥品和試劑20
• 2.1.2 主要試驗儀器與設(shè)備20-21
• 2.2 試驗方法21-22
• 2.2.1 主要培養(yǎng)基及溶液的配制21
• 2.2.2 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物的合成與制備21-22
• 2.2.3 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物的體外抗氧化活性22
• 2.2.4 統(tǒng)計學分析22
• 2.3 試驗結(jié)果22-24
• 2.3.1 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物的合成與制備22-23
• 2.3.2 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物對超氧陰離子的體外清除作用23-24
• 2.4 討論24
• 2.5 小結(jié)24-25
• 第三章 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物對秀麗隱桿線蟲壽命的影響25-33
• 3.1 試驗材料25-27
• 3.1.1 菌種和線蟲來源25
• 3.1.2 培養(yǎng)基25
• 3.1.3 藥品與試劑25
• 3.1.4 主要儀器25-26
• 3.1.5 培養(yǎng)基、緩沖液及主要溶液配制26-27
• 3.2 試驗方法27-29
• 3.2.1 線蟲的培養(yǎng)27
• 3.2.2 線蟲的同步化27-28
• 3.2.3 線蟲的液體培養(yǎng)28
• 3.2.4 試驗組培養(yǎng)板的準備28
• 3.2.5 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物對秀麗隱桿線蟲壽命的影響28
• 3.2.6 統(tǒng)計學方法28-29
• 3.3 結(jié)果與分析29-32
• 3.3.1 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物DHD對秀麗隱桿線蟲壽命的影響29
• 3.3.2 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物DHG對秀麗隱桿線蟲壽命的影響29-30
• 3.3.3 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物雌馬酚對秀麗隱桿線蟲壽命的影響30
• 3.3.4 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物O-Dma對秀麗隱桿線蟲壽命的影響30-31
• 3.3.5 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物(-)-5-OH-EQ對秀麗隱桿線蟲壽命的影響31-32
• 3.4 討論32
• 3.5 小結(jié)32-33
• 第四章 左旋-5-羥基-雌馬酚對秀麗隱桿線蟲壽命及抗性的影響33-41
• 4.1 試驗材料33-34
• 4.1.1 菌種和線蟲來源33
• 4.1.2 培養(yǎng)基33
• 4.1.3 藥品與試劑33
• 4.1.4 主要儀器33-34
• 4.1.5 培養(yǎng)基、緩沖液及主要溶液配制34
• 4.2 試驗方法34-35
• 4.2.1 (-)-5-OH-EQ對秀麗隱桿線蟲壽命的影響34
• 4.2.2 (-)-5-OH-EQ對秀麗隱桿線蟲生殖能力的影響34
• 4.2.3 (-)-5-OH-EQ對秀麗隱桿線蟲抵抗外界急性熱應(yīng)激能力的影響34-35
• 4.2.4 (-)-5-OH-EQ對秀麗隱桿線蟲抗氧化損傷能力的影響35
• 4.2.5 統(tǒng)計學方法35
• 4.3 結(jié)果與分析35-39
• 4.3.1 (-)-5-OH-EQ對秀麗隱桿線蟲壽命的影響35-36
• 4.3.2 (-)-5-OH-EQ對秀麗隱桿線蟲生殖能力的影響36-37
• 4.3.3 (-)-5-OH-EQ對秀麗隱桿線蟲抵抗外界急性熱應(yīng)激能力的影響37-38
• 4.3.4 (-)-5-OH-EQ對秀麗隱桿線蟲抵抗外界氧化應(yīng)激能力的影響38-39
• 4.4 討論39
• 4.5 小結(jié)39-41
• 第五章 左旋-5-羥基-雌馬酚延長線蟲壽命的分子機制研究41-50
• 5.1 試驗材料41-42
• 5.1.1 線蟲來源41
• 5.1.2 培養(yǎng)基41
• 5.1.3 藥品與試劑41-42
• 5.1.4 主要儀器42
• 5.1.5 培養(yǎng)基、緩沖液及主要溶液配制42
• 5.2 試驗方法42-44
• 5.2.1 秀麗隱桿線蟲的大量培養(yǎng)42
• 5.2.2 提取線蟲總RNA42-43
• 5.2.3 線蟲RNA的反轉(zhuǎn)錄43
• 5.2.4 Quantitative real-time PCR擴增43-44
• 5.2.5 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物(-)-5-OH-EQ對線蟲突變株壽命的影響44
• 5.2.6 統(tǒng)計學方法44
• 5.3 結(jié)果與分析44-48
• 5.3.1 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物(-)-5-OH-EQ對線蟲體內(nèi)與壽命相關(guān)基因表達量的影響44-46
• 5.3.2 大豆異黃酮代謝產(chǎn)物(-)-5-OH-EQ對線蟲突變株壽命的影響46-48
• 5.4 討論48-49
• 5.5 結(jié)論49-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-57
• 在讀期間發(fā)表的學術(shù)論文57-58
• 作者簡歷58-59
• 致謝59-60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：800069