本文關(guān)鍵詞：光甘草定通過miR-200c抑制乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的機制研究

  更多相關(guān)文章： 光甘草定 miR-200c E-cadherin 高侵襲性人乳腺癌細胞 裸鼠移植瘤

【摘要】：“營養(yǎng)素及食物中生物活性物質(zhì)與慢性病防治的基礎(chǔ)研究”已成為預(yù)防醫(yī)學的重點研究領(lǐng)域。在慢性非傳染性疾病中,惡性腫瘤在我國人群中居死因的第一位,而癌細胞浸潤和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的主要原因。植物化學物抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的文章對腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制作用時有報道,而甘草的活性成分光甘草定(glabridin,GLA)對腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的研究才剛起步。本研究采用高侵襲性人乳腺癌細胞模型和裸鼠移植瘤模型,從細胞和裸鼠整體動物水平探討光甘草定對乳腺癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及作用機制。從而闡明光甘草定在腫瘤預(yù)防中的意義及其為尋找新的乳腺癌治療靶點提供科學依據(jù)。 目的：采用高侵襲性人乳腺癌細胞系(MDA-MB-231和BT-549細胞)為體外模型,裸鼠移植瘤為體內(nèi)模型,探討GLA對侵襲性乳腺癌細胞遷移、侵襲的影響,以及作用機制。 方法：通過MTS實驗,檢測GLA對乳腺癌MDA-MB-231和BT549細胞增殖的影響；通過細胞劃痕實驗和transwell實驗,探討GLA對MDA-MB-231和BT549細胞侵襲、轉(zhuǎn)移的影響；通過RT-PCR、qRT-PCR、Western blotting實驗檢測GLA是否會通過改變粘附分子的表達,從而逆轉(zhuǎn)乳腺癌細胞的間質(zhì)特征；通過Real time-PCR檢測microRNA-200c (miR-200c),探討GLA是否影響miR-200c的表達。通過轉(zhuǎn)染miR-200c-mimic、anti-miR-200c探討GLA是否是通過miR-200c影響乳腺癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移；通過裸鼠移植瘤實驗,探討GLA在體內(nèi)是否抑制腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和侵襲。 結(jié)果：通過MTS實驗,我們發(fā)現(xiàn)無論是MDA-MB-231還是BT549細胞在GLA濃度低于20μM時,都對細胞的活力沒有影響；通過劃痕實驗,我們發(fā)現(xiàn)GLA可劑量依賴性的抑制MDA-MB-231和BT549細胞的運動；進一步采用transwell實驗發(fā)現(xiàn)：隨著濃度的增加,GLA均可明顯抑制MDA-MB-231和BT549細胞的侵襲和遷移；RT-PCR和Western blotting實驗結(jié)果顯示：GLA可誘導(dǎo)細胞粘附關(guān)鍵蛋白E-cadherin mRNA和蛋白的表達；同時降低間質(zhì)型分子Vimentin mRNA和蛋白的表達；qRT-PCR結(jié)果顯示：在MDA-MB-231和BT549細胞中,GLA可明顯上調(diào)miR-200家族中miR-200c的表達；miR-200c的高表達可以誘導(dǎo)E-cadherin重新表達使E-cadherin的表達升高,進一步轉(zhuǎn)染anti-miR-200c后E-cadherin的表達水平降低,同時Transwell實驗觀察到GLA抑制腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲的能力被削弱；在裸鼠移植瘤中,RT-PCR和Western blotting實驗結(jié)果也顯示：GLA可誘導(dǎo)E-cadherin mRNA和蛋白的表達,同時降低Vimentin mRNA和蛋白的表達；qRT-PCR結(jié)果顯示：與對照組相比,GLA處理組中miR-200c上升。 結(jié)論：光甘草定處理高侵襲性乳腺癌細胞系MDA-MB-231和BT549,可上調(diào)miR-200c的表達,增加關(guān)鍵粘附分子E-cadherin的表達,逆轉(zhuǎn)EMT,從而抑制乳腺癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。因此,miR-200c上調(diào)E-cadherin表達的途徑可能是光甘草定抑制高侵襲性乳腺癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的重要機制。
【關(guān)鍵詞】：光甘草定 miR-200c E-cadherin 高侵襲性人乳腺癌細胞 裸鼠移植瘤
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R151;R737.9
【目錄】：

• 目錄3-4
• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-11
• 材料與方法11-23
• 1 材料11-13
• 2 方法13-23
• 結(jié)果23-46
• 一、光甘草定處理對乳腺癌細胞活力的影響23-24
• 二、光甘草定處理對乳腺癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響24-26
• 三、光甘草定處理對乳腺癌細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的影響26-27
• 四、光甘草定處理對乳腺癌細胞粘附相關(guān)蛋白的影響27-30
• 五、miRNA在光甘草定抑制乳腺癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用30-41
• 六、光甘草定對MDA-MB-231乳腺癌裸鼠移植瘤的生長、轉(zhuǎn)移、侵襲的影響41-46
• 討論46-53
• 綜述53-63
• 參考文獻63-77
• 附錄77-86
• 一、資金資助情況77
• 二、在讀期間發(fā)表相關(guān)論文77-86
• 主要縮略詞中英文對照86-87
• 致謝87

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本文編號：788031