本文關(guān)鍵詞：苯并［a］芘誘導(dǎo)新生幼鼠Glu和GABA神經(jīng)遞質(zhì)釋放及傳導(dǎo)障礙的機(jī)制研究

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【摘要】：苯并[a]芘(Benzo[a]pyrene，B[a]P)是多環(huán)芳烴族化合物(PolycyclicAromatic Hydrocarbon，PAHs)的代表之一，來源分布十分廣泛，其主要是由有機(jī)高分子化合物如煤，石油等有機(jī)物不完全燃燒而生成的，在環(huán)境毒理學(xué)以及職業(yè)病防治領(lǐng)域有重要的意義。以前多關(guān)注的是其致癌、致畸以及致突變性，而近幾年其神經(jīng)毒性以及神經(jīng)發(fā)育毒性也廣泛引起研究者的關(guān)注。前面的相關(guān)苯并[a]芘的神經(jīng)發(fā)育的研究中發(fā)現(xiàn)，B[a]P可以導(dǎo)致幼年SD大鼠神經(jīng)損傷，主要集中在海馬體，從而影響空間學(xué)習(xí)記憶能力，這種毒性損傷與幼年SD大鼠神經(jīng)發(fā)育過程中神經(jīng)遞質(zhì)釋放以及傳導(dǎo)的變化有顯著的相關(guān)性。Glu和GABA是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要遞質(zhì)，在記憶過程中，有著極為重要的作用。但B[a]P誘發(fā)的發(fā)育神經(jīng)毒性是否與它們有關(guān)，尚沒有相關(guān)研究闡述。故本研究以出生后幼年SD大鼠為研究對(duì)象，探討在B[a]P暴露下的神經(jīng)發(fā)育毒性以及關(guān)于神經(jīng)遞質(zhì)釋放與傳導(dǎo)改變的機(jī)制。 目的：結(jié)合先前對(duì)幼年SD大鼠的神經(jīng)發(fā)育期B[a]P染毒所造成神經(jīng)行為的影響，通過染毒的SD幼年大鼠的Glu和GABA神經(jīng)遞質(zhì)的釋放及傳導(dǎo)過程的改變，探討苯并[a]芘的神經(jīng)發(fā)育毒性機(jī)制。 方法：選擇96只健康的5日齡SD幼鼠，雌雄各半，體重差值小于均值10%，隨機(jī)分為溶劑對(duì)照組以及0.02、0.2、2mg／kg·KW B[a]P三個(gè)染毒劑量組，B[a]P溶于植物油中，三個(gè)染毒劑量組按各自劑量每日灌胃染毒一次，溶劑對(duì)照組予以等量的植物油，染毒時(shí)間從PND4持續(xù)至PND20。免疫組化觀察海馬體Glu和GABA神經(jīng)遞質(zhì)釋放變化，電鏡觀察海馬區(qū)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、髓鞘以及突觸的形態(tài)變化。試劑盒測(cè)海馬區(qū)突觸內(nèi)鈣離子的濃度，Western blot法測(cè)海馬區(qū)突觸前膜神經(jīng)遞質(zhì)釋放相關(guān)蛋白SD蛋白、Syntaxin蛋白以及SNAP蛋白的表達(dá)水平。熒光定量PCR法測(cè)海馬區(qū)突觸后膜神經(jīng)遞質(zhì)受體GABA、NMDA以及AMPA的表達(dá)水平。 結(jié)果：1、由免疫組化結(jié)果顯示染毒組海馬組織中GABA、Glu表達(dá)均較對(duì)照組明顯下降；2、由海馬組織的鈣離子熒光定量檢測(cè)結(jié)果顯示染毒組海馬組織的鈣離子溶度較對(duì)照組均明顯降低；3、由海馬體的電鏡結(jié)果中發(fā)現(xiàn)在染毒組幼鼠海馬體神經(jīng)元突觸周圍存在大量的黑色顆粒性物質(zhì)，推測(cè)為一種神經(jīng)顆粒素，且越接近突觸越密集。4、Western Blot結(jié)果顯示：1）Synaptobrevin蛋白的表達(dá)在染毒組海馬體和大腦皮層中對(duì)照對(duì)照組沒有明顯性差異；2）SNAP-25蛋白，在海馬體中，0.2mg/kg和2mg/kg B[a]P劑量染毒對(duì)SNAP-25蛋白表達(dá)的影響與對(duì)照組比較顯著性增加，在大腦皮層中無顯著性差異；3）在海馬體中，B[a]P對(duì)Syntaxin蛋白表達(dá)的影響與對(duì)照組比較無顯著性差異，但是在大腦皮層中，0.2mg/kg和2mg/kg B[a]P劑量染毒組對(duì)Syntaxin蛋白表達(dá)的影響與對(duì)照組比較顯著性降低；4）在海馬體中，0.2mg/kg和2mg/kg B[a]P劑量染毒組對(duì)Synaptophysin蛋白表達(dá)的影響與對(duì)照組比較顯著性增加，但在大腦皮層中，B[a]P劑量染毒組對(duì)Synaptophysin蛋白表達(dá)的影響與對(duì)照組比較無顯著性差異。5、qPT-PCR結(jié)果顯示：1）在海馬中，0.2mg/kg和2mg/kg B[a]P劑量染毒對(duì)Grin1基因表達(dá)的影響與對(duì)照組比較顯著性降低，但是在大腦皮層中，0.2mg/kg和2mg/kg B[a]P劑量染毒對(duì)Grin1基因表達(dá)的影響與對(duì)照組比較顯著性增加；2）在海馬和大腦皮層中，0.2mg/kg和2mg/kg B[a]P劑量染毒對(duì)Grin2b基因表達(dá)的影響與對(duì)照組比較顯著性增加；3）在海馬中，0.2mg/kg和2mg/kg B[a]P劑量染毒對(duì)Gria1基因表達(dá)的影響與對(duì)照組比較顯著性增加，但是在大腦皮層中，0.2mg/kg和2mg/kg B[a]P劑量染毒對(duì)Gria1基因表達(dá)的影響與對(duì)照組比較顯著性降低；4）在海馬和大腦皮層中，0.2mg/kg和2mg/kg B[a]P劑量染毒對(duì)Gria2基因表達(dá)的影響與對(duì)照組比較顯著性增加；5）在海馬和大腦皮層中，0.2mg/kg和2mg/kg B[a]P劑量染毒對(duì)Gabra1基因表達(dá)的影響與對(duì)照組比較顯著性增加；6）在海馬和大腦皮層中，0.2mg/kg和2mg/kg B[a]P劑量染毒對(duì)Gabbr1基因表達(dá)的影響與對(duì)照組比較顯著性增加。 結(jié)論：B[a]P對(duì)幼鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力的損傷的可能機(jī)制有1）海馬區(qū)氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)Glu和GABA的減少，2）海馬區(qū)突觸內(nèi)的鈣離子濃度下降相關(guān)，3）染毒組海馬區(qū)突觸區(qū)產(chǎn)生的神經(jīng)顆粒素，4）SNAP-25、Synaptophysin蛋白在海馬區(qū)的表達(dá)增強(qiáng)，Syntaxin蛋白在大腦皮層中表達(dá)下降；5）在海馬體中，Grin1基因表達(dá)降低，，Grin2b、Gria1、Gria2、Gabra1、Gabbr1基因表達(dá)增高，在大腦皮層中，Gria1基因表達(dá)降低，Grin1、Grin2b、Gria2、Gabra1、Gabbr1基因表達(dá)增高。
【關(guān)鍵詞】：苯并[a]芘 神經(jīng)遞質(zhì) 免疫組化 免疫印跡法 qRT-PCR
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-14
• 1 前言14-18
• 2 材料與方法18-23
• 2.1 動(dòng)物模型的建立：18
• 2.2 B[a]P 對(duì)海馬區(qū)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì) Glu 與 GABA 含量的影響檢測(cè)18-19
• 2.3 海馬區(qū)突觸內(nèi)鈣濃度的測(cè)量19
• 2.4 電鏡觀察海馬區(qū)突觸內(nèi)的形態(tài)學(xué)變化19
• 2.5 海馬區(qū)突觸前膜神經(jīng)遞質(zhì)釋放-胞吐作用的檢測(cè)19-21
• 2.6 海馬區(qū)突觸后膜受體表達(dá)水平的檢測(cè)21-23
• 3 結(jié)果23-32
• 3.1 海馬、皮層區(qū)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸（Glu）與γ-氨基丁酸（GABA）含量的變化23-25
• 3.2 海馬組織內(nèi)鈣濃度的測(cè)量25
• 3.3 電鏡觀察海馬區(qū)超微結(jié)構(gòu)25-26
• 3.4 海馬、皮層區(qū)突觸前膜神經(jīng)遞質(zhì)釋放-胞吐作用的檢測(cè)26-29
• 3.5 海馬、皮層區(qū)突觸后膜受體表達(dá)水平的檢測(cè)29-32
• 4 討論32-38
• 全文總結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-46
• 文獻(xiàn)綜述46-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 致謝57-58
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文58-59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 涂白杰,陳勝,高雅娟,鄔堂春;高劑量苯并[a]芘染毒損傷小鼠腦組織的形態(tài)學(xué)研究[J];中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志;2002年01期

本文編號(hào)：779739