本文關(guān)鍵詞：氯乙烯生物標(biāo)志物測(cè)定方法研究

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【摘要】：氯乙烯(VCM)是一種重要的工業(yè)化合物,我國(guó)是氯乙烯的生產(chǎn)和使用大國(guó),由氯乙烯共聚物合成的性能各異的樹(shù)脂在我國(guó)各行業(yè)都有廣泛的應(yīng)用。氯乙烯毒性較大,可以對(duì)心、肺、腦、血液等多個(gè)器官和系統(tǒng)產(chǎn)生毒性,長(zhǎng)期接觸可致肝臟和脾臟損害、肢端溶骨癥；氯乙烯是明確的人類(lèi)致癌物,可致肝血管瘤,1987年氯乙烯單體被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)列為1類(lèi)致癌物。我國(guó)《工作場(chǎng)所有害因素職業(yè)接觸限值》規(guī)定氯乙烯時(shí)間加權(quán)平均容許濃度(PC-TWA)為10 mg/m3,短時(shí)間接觸容許濃度(PC-STEL) 20mg/m3,國(guó)內(nèi)外尚未制定氯乙烯代謝產(chǎn)物的職業(yè)生物接觸限值,為制定職業(yè)接觸生物限值提供技術(shù)基礎(chǔ)特進(jìn)行本研究。氯乙烯進(jìn)入人體后,大部分以原型形式隨呼吸經(jīng)肺排出體外,其余部分主要在肝臟中通過(guò)肝乙醇脫氫酶(ADH2)和肝微粒體細(xì)胞色素P450酶(主要是CYP2E1)代謝轉(zhuǎn)化,其代謝終產(chǎn)物氯乙酸、羥乙基半胱氨酸、亞硫基二乙酸(TDGA)由尿液排出體外；氯乙烯在代謝過(guò)程中產(chǎn)生的活性中間產(chǎn)物(主要為CEO和CAA)可以與DNA等大分子物質(zhì)發(fā)生烷化反應(yīng),形成εdA、7-(2’-氧代乙基)鳥(niǎo)嘌呤、εdC和N2,3εdG四種DNA加合物。研究表明,尿液中的TDGA含量與氯乙烯的外暴露濃度具有強(qiáng)相關(guān)性,其可以作為氯乙烯的暴露生物標(biāo)志物,但目前缺乏前處理簡(jiǎn)單、操作便捷、適于推廣的檢測(cè)方法。目前有研究認(rèn)為氯乙烯導(dǎo)致的εdA DNA加合物可以作為氯乙烯的生物有效劑量標(biāo)志物,而其所致的εdC DNA加合物是否能作為氯乙烯的生物標(biāo)志物則缺乏相應(yīng)的數(shù)據(jù)支持。本文建立了氯乙烯代謝產(chǎn)物TDGA的固相萃取-離子色譜測(cè)定法,初步探討εdA和εdC作為氯乙烯生物標(biāo)志物的適用性。研究?jī)?nèi)容主要包括以下兩部分內(nèi)容：1.建立了測(cè)定尿液中TDGA的固相萃取-離子色譜法。尿液樣品經(jīng)離心、C18固相萃取小柱凈化后,由AS19陰離子交換色譜柱分離,電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè),以保留時(shí)間定性,峰面積與外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的測(cè)定范圍為0.05-50μg/ml,相關(guān)系數(shù)r=0.9999,方法檢出限為0.10μg/ml,方法定量下限為0.30μg/ml,批內(nèi)精密度為1.3%-5.1%,批間精密度為0.50%～8.8%,方法加標(biāo)回收率為80.1%-104.2%。樣品在-20℃條件下可保存14 d。樣品中共存和可能共存的氯乙酸、二氯乙酸、三氯乙酸及其它內(nèi)源性離子化合物均不干擾其測(cè)定。采用該法對(duì)氯乙烯職業(yè)接觸和對(duì)照組人員尿中的TDGA進(jìn)行了檢測(cè)應(yīng)用,結(jié)果顯示氯乙烯職業(yè)接觸組大部分都能檢測(cè)出TDGA,而對(duì)照組TDGA均小于方法檢出限。2.以職業(yè)暴露氯乙烯操作工為接觸組和非職業(yè)暴露的相似工齡的職業(yè)行政人員為對(duì)照組,采用同位素內(nèi)標(biāo)[15N5]-εdA和[15N3]-sdC UPLC-ESI-MS/MS方法對(duì)接觸組和對(duì)照組人員的血液中氯乙烯DNA加合物εdA、εdC進(jìn)行了檢測(cè),以離子色譜法對(duì)尿中的TDGA進(jìn)行了檢測(cè),統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示暴露組血樣中εdA和εdC水平都高于對(duì)照組血樣中εdA和εdC水平,且差異具有顯著性(P0.05)；εdA和εdC水平具有顯著相關(guān)性：未發(fā)現(xiàn)吸煙、飲酒和年齡對(duì)εdA和εdC的水平有顯著的影響；初步驗(yàn)證了εdA、εdC作為氯乙烯暴露標(biāo)志物的適用性。
【關(guān)鍵詞】：固相萃取 離子色譜 亞硫基二乙酸 DNA加合物 UPLC-ESI-MS/MS
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R134.4
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 前言10-18
• 1 研究的目的和意義10
• 2 氯乙烯概述10-12
• 3 亞硫基二乙酸(TDGA)及其檢測(cè)方法研究現(xiàn)狀12-15
• 3.1 氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法13-14
• 3.2 伏安法14
• 3.3 毛細(xì)管電泳法14-15
• 3.4 液相-質(zhì)譜聯(lián)用法15
• 4 氯乙烯的DNA加合物15-18
• 第一部分 固相萃取-離子色譜法測(cè)定尿液中的亞硫基二乙酸18-37
• 1 前言18-21
• 1.1 固相萃取法概述18-19
• 1.2 離子色譜法概述19-21
• 2 實(shí)驗(yàn)部分21-24
• 2.1 儀器和試劑21-22
• 2.2 色譜條件22
• 2.3 樣品采集、運(yùn)輸與保存22
• 2.4 尿液的前處理方法22-23
• 2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的配制和樣品測(cè)定23-24
• 2.6 尿樣密度的校正24
• 3 結(jié)果與討論24-36
• 3.1 檢測(cè)方法的選擇24-25
• 3.2 離子色譜條件的優(yōu)化25-27
• 3.3 樣品前處理方法的選擇27-28
• 3.4 固相萃取條件的優(yōu)化28-30
• 3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、線(xiàn)性范圍與檢出限30-32
• 3.6 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)32-33
• 3.7 精密度實(shí)驗(yàn)33-34
• 3.8 樣品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)34
• 3.9 干擾實(shí)驗(yàn)34-36
• 4 實(shí)際樣品測(cè)定36
• 5 小結(jié)36-37
• 第二部分 氯乙烯暴露生物標(biāo)志物的研究37-53
• 1 前言37-38
• 2 研究對(duì)象38
• 3 實(shí)驗(yàn)部分38-46
• 3.1 儀器38-39
• 3.2 試劑39-40
• 3.3 標(biāo)準(zhǔn)品的合成40
• 3.4 標(biāo)準(zhǔn)品的純化40-42
• 3.5 標(biāo)準(zhǔn)品的定量42-43
• 3.6 樣品處理43-44
• 3.7 儀器條件44-45
• 3.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的配制45-46
• 3.9 血樣中εdA和εdC以及尿液中TDGA含量的檢測(cè)46
• 3.10 數(shù)據(jù)分析方法46
• 4 結(jié)果46-50
• 4.1 研究對(duì)象的一般情況46-47
• 4.2 樣品中εdA、εdC、TDGA測(cè)定結(jié)果47
• 4.3 樣品中εdA、εdC和TDGA統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果47-50
• 5 討論50-53
• 5.1 暴露組與對(duì)照組的選擇50-51
• 5.2 Etheno-DNA加合物指標(biāo)的選擇51-52
• 5.3 DNA加合物檢測(cè)方法的選擇52
• 5.4 氯乙烯暴露生物標(biāo)志物分析52-53
• 6 小結(jié)53
• 結(jié)論53-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 碩士期間發(fā)表的論文61-62
• 致謝62-63
• 附錄一 發(fā)表文章一63-69
• 附錄二 發(fā)表文章二69-77
• 附錄三 綜述77-91
• 附錄四 個(gè)人簡(jiǎn)介91

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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本文編號(hào)：775127