本文關(guān)鍵詞：胸腺細(xì)胞分化抗原-1DNA甲基化在硫酸鈹致人胚肺成纖維細(xì)胞纖維化中的作用研究

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【摘要】：目的觀察硫酸鈹(Be SO4)刺激下人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5)中胸腺細(xì)胞分化抗原-1(Thy-1)DNA甲基化改變情況,Thy-1m RNA及蛋白的變化,纖維化相關(guān)因子膠原蛋白Ⅰ、膠原蛋白Ⅲ、α-SMA m RNA及蛋白的改變,探討Thy-1DNA甲基化在Be SO4致肺纖維化中的作用。用甲基化轉(zhuǎn)移酶酶抑制劑5-氮雜胞苷(AZC)干預(yù)MRC-5進(jìn)一步驗(yàn)證Thy-1DNA甲基化變化。使用組蛋白乙�；敢种苿┣乓志谹(TSA),觀察MRC-5中是否同時(shí)存在組蛋白乙�；�。同時(shí)觀察在這兩種抑制劑的作用下,纖維相關(guān)因子和Thy-1的表達(dá)情況。方法建立離體MRC-5培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?以終濃度分別為1.0、10.0、100.0μmol/L的Be SO4染毒(設(shè)為低、中、高劑量組),對(duì)照組不作染毒處理;另設(shè)AZC干預(yù)組,終濃度為10.0μmol/L的硫酸鈹和10.0μmol/L AZC混合液處理組(Be SO4+AZC組)和TSA干預(yù)組,終濃度為10.0μmol/L的硫酸鈹和0.5μmol/L TSA混合液處理組(Be SO4+TSA組)。分別在染毒24、48和72 h后收集細(xì)胞,采用實(shí)時(shí)定量式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)膠原蛋白Ⅰ、膠原蛋白Ⅲ和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)和Thy-1 m RNA相對(duì)表達(dá)水平;巢式降落式甲基化特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)Thy-1 DNA甲基化水平;蛋白免疫印跡法(western-blot)檢測(cè)膠原蛋白Ⅰ、膠原蛋白Ⅲ、α-SMA和Thy-1蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果1.MRC-5細(xì)胞中膠原蛋白Ⅰ、膠原蛋白Ⅲ和α-SMA的m RNA的蛋白相對(duì)表達(dá)水平均呈隨染毒劑量增加而增加的趨勢(shì)(P0.05或P0.01));低、中、高劑量組膠原蛋白Ⅰ、膠原蛋白Ⅲ和α-SMA的m RNA和蛋白相對(duì)表達(dá)水平均呈隨著染毒時(shí)間的增加而升高的趨勢(shì)(P0.05或P0.01));AZC和TSA干預(yù)后,24、48、72h時(shí)間點(diǎn),Be SO4+AZC組、Be SO4+TSA組3個(gè)指標(biāo)的蛋白相對(duì)表達(dá)水平均低于中劑量組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);2.24、48、72h時(shí)間點(diǎn)上,中、高劑量組Thy-1 DNA甲基化水平均高于對(duì)照組(P0.05或P0.01);低、中、高劑量組Thy-1 DNA甲基化水平呈隨染毒劑量增加而增加趨勢(shì)(P0.05);AZC和TSA干預(yù)后,48、72h時(shí)間點(diǎn)上,Be SO4+AZC組、Be SO4+TSA組Thy-1DNA甲基化水平均低于中、高劑量(P0.05);3.24、48、72h時(shí)間點(diǎn)上,低、中、高劑量組MRC-5細(xì)胞Thy-1 m RNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)水平均低于對(duì)照組(P0.01或P0.01);AZC和TSA干預(yù)后,48、72h時(shí)間點(diǎn)上,Be SO4+AZC組、Be SO4+TSA組Thy-1蛋白的相對(duì)表達(dá)水平均高于中劑量組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論在硫酸鈹刺激下可導(dǎo)致MRC-5細(xì)胞纖維化的發(fā)生,該過(guò)程中Thy-1DNA甲基化程度升高,Thy-1m RNA表達(dá)水平降低,可能是硫酸鈹致肺纖維化的重要機(jī)制之一,在該過(guò)程中可能同時(shí)存在組蛋白乙�；�。
【關(guān)鍵詞】：硫酸鈹 胸腺細(xì)胞分化抗原-1 膠原蛋白 α-平滑肌肌動(dòng)蛋白 肺纖維化 DNA甲基化 組蛋白乙酰化 人胚肺成纖維細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-8
• 符號(hào)說(shuō)明8-11
• 前言11-15
• 材料與方法15-29
• 結(jié)果29-40
• 討論40-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 綜述 表觀遺傳學(xué)的DNA甲基化和組蛋白修飾52-63
• 綜述參考文獻(xiàn)58-63
• 致謝63-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文64

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