發(fā)布時間：2017-08-16 20:25

  本文關(guān)鍵詞：食源性致病菌PCR檢測策略的建立和優(yōu)化

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【摘要】：研究背景通過該研究項目,利用PCR方法對14種引起食源性疾病(食物中毒)的致病微生物進(jìn)行檢測并獲得其最佳PCR反應(yīng)條件,根據(jù)每種食源性致病微生物PCR檢測基因的引物的退火溫度的高低以及擴(kuò)增產(chǎn)物片段的大小將其分組進(jìn)行PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化實驗,使多個測試項目在同一批次進(jìn)行PCR檢測,從而大大縮減了檢測時間,給現(xiàn)場疫情處理贏得時間。最終,建立一個快速、簡便、準(zhǔn)確、敏感、特異、有效的微生物檢測平臺,為突發(fā)事件現(xiàn)場調(diào)查處理及患者的治療提供及時準(zhǔn)確的信息和依據(jù)。研究方法從文獻(xiàn)中查找部分食源性致病菌的PCR擴(kuò)增引物序列,同時,在GenBank數(shù)據(jù)庫中查找部分食物性致病菌的特異性基因序列,再依據(jù)特異性的靶序列使用Primer5.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計。依據(jù)退火溫度和擴(kuò)增片段的大小對14種食物中毒致病菌進(jìn)行分組,然后,對多重PCR和多項目同批次PCR的反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化實驗。研究結(jié)果本文利用多重PCR和多項目同批次PCR技術(shù)對14種食物中毒致病菌進(jìn)行了檢測方法的研究,取得了以下成果：1.依據(jù)退火溫度與產(chǎn)物片段大小將14種致病菌分成三組,使它們能夠通過多項目同批次PCR一次性檢測出來。分組方案如下,第一方案：(1)沙門氏菌、副溶血性弧菌、阪崎腸桿菌、奇異變形桿菌、空腸彎曲菌,(2)志賀氏菌、腸出血性大腸埃希菌0157、金黃色葡萄球菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、創(chuàng)傷弧菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌,(3)蠟樣芽胞桿菌、溶血性鏈球菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌；第二方案：(1)沙門氏菌、志賀氏菌、副溶血性弧菌、創(chuàng)傷弧菌、空腸彎曲菌, (2)腸出血性大腸埃希菌0157、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、阪崎腸桿菌、奇異變形桿菌,(3)單核細(xì)胞增生李斯特菌、蠟樣芽胞桿菌、溶血性鏈球菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌。2.優(yōu)化了多項目同批次PCR反應(yīng)體系的退火溫度、引物用量、靈敏度以及引物比例。多項目同批次PCR反應(yīng)體系的最佳退火溫度為52℃；最佳混合引物用量為0.6-0.8μL；基因組DNA檢測靈敏度可達(dá)到8×10-4ng/μL；第一方案致病菌的最佳引物比例分別為1：1：3：3：2,1：1：1：1：3：3,1：1：2；第二方案致病菌的最佳引物比例分別為1：1：1：3：2,1：1：3：3：2,1：1：1：2。3.利用多項目同批次PCR反應(yīng)體系的條件成功從3位食物中毒患者的嘔吐物、腹瀉物以及吃過的可疑食品樣品中檢出副溶血性弧菌。4.將常規(guī)PCR與多重PCR的靈敏度和在食物中毒樣品檢測中的應(yīng)用效果進(jìn)行了比較。常規(guī)PCR的基因組DNA檢測靈敏度可達(dá)到2×10-7ng/μL,而多重PCR的基因組DNA檢測靈敏度只有2×10-6ng/μL；常規(guī)PCR比多重PCR更容易從食物中毒樣品中檢測出致病菌。研究結(jié)論本文利用多項目同批次PCR技術(shù)可以將14種食物中毒致病菌同時完成檢測,建立了一個快速、簡便、準(zhǔn)確、敏感、特異、有效的微生物檢測平臺,從而為突發(fā)事件現(xiàn)場調(diào)查處理及患者的治療提供及時準(zhǔn)確的信息和依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：多項目同批次PCR 多重PCR 常規(guī)PCR 食物中毒
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 縮略詞及相關(guān)符號說明10-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-23
• 結(jié)果23-31
• 討論31-41
• 結(jié)論41-42
• 存在問題及不足42-43
• 參考文獻(xiàn)43-51
• 致謝51-52
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文52-53
• 附件53

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：685368