本文關(guān)鍵詞：氟化鈉誘導(dǎo)氧化應(yīng)激激活ERK和JNK促進(jìn)大鼠卵巢細(xì)胞凋亡

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【摘要】：目的： 氟化物廣泛存在于自然界，已作為添加劑用于牙膏、漱口水等，能夠有效地預(yù)防齲齒。然而，氟化物的安全劑量范圍較窄，長期接觸過量的氟化物將對人體造成危害，如氟骨癥，氟斑牙等。近年來氟化物的研究發(fā)現(xiàn)過量的氟化物與生殖能力存在一定的關(guān)聯(lián)，研究證實(shí)了氟化鈉會損害雄性生殖系統(tǒng)，包括破壞睪丸結(jié)構(gòu)、使精子喪失受精能力等，還會導(dǎo)致生殖激素分泌紊亂、子代發(fā)育異常等。課題組前期基礎(chǔ)研究亦發(fā)現(xiàn)氟化鈉暴露可導(dǎo)致大鼠妊娠率顯著降低，血清中氧化應(yīng)激指標(biāo)、類固醇激素（雌二醇E2和孕酮P4）分泌減少、卵巢萎縮及卵泡發(fā)育障礙。因此，本研究旨在進(jìn)一步探索氟化鈉對卵巢細(xì)胞損傷的分子機(jī)制，為防控氟危害提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.分別建立大鼠氟化鈉暴露模型和原代培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞氟化物染毒模型。 2.運(yùn)用MTT法檢測氟化鈉對細(xì)胞活力的影響，通過計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC50）中選擇適宜的氟化鈉濃度。 3.采用免疫組化、Western blot、TUNEL法、流式細(xì)胞術(shù)和DAPI染色法檢測卵巢組織和顆粒細(xì)胞的凋亡改變，并用ELISA法分別測定卵巢組織和顆粒細(xì)胞的活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）、過氧化氫酶（CAT）的活性和丙二醛（MDA）等含量變化。 4．利用Western blot檢查并分析氟化鈉影響卵巢組織和顆粒細(xì)胞凋亡的主要信號通路途徑。 結(jié)果： 1．氟化鈉暴露的大鼠血清及卵巢組織中的氟離子濃度比對照組顯著增高，表明氟化鈉染毒動物模型構(gòu)建成功。 2．建立原代分離培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞系，經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定，卵巢顆粒細(xì)胞純度超過95%。 3．氟化鈉暴露組的卵巢組織細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著增加，凋亡相關(guān)信號分子Bcl-2、Bax和Caspase-3改變明顯，F(xiàn)CM與DAPI染色證實(shí)氟化鈉可誘導(dǎo)卵巢顆粒細(xì)胞發(fā)生凋亡，且不同濃度的氟化鈉會對顆粒細(xì)胞產(chǎn)生不同的毒性效應(yīng)。 4．在氟化鈉暴露的大鼠卵巢和原代培養(yǎng)的顆粒細(xì)胞中，ROS，SOD，CAT和GSHPx的活性以及MDA含量均顯著增高，即在體和體外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)氟化鈉可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激發(fā)生。 5．Western blot檢測顯示氟化鈉暴露可顯著上調(diào)JNK和ERK的磷酸化效率，ERK和JNK的特異性抑制劑可部分降低磷酸化的JNK和ERK表達(dá)，ROS特異性抑制劑可同時抑制二者的磷酸化。在氟化鈉作用下，單獨(dú)抑制ERK或JNK后，Bcl-2的表達(dá)部分上調(diào)，而Bax和casepase-3則部分下調(diào)；若同時抑制ERK和JNK信號通路后，Bcl-2的表達(dá)顯著上調(diào)，而Bax和casepase-3則明顯下調(diào)。ROS抑制劑DPI也有與聯(lián)合抑制ERK和JNK信號通路相似的挽救效應(yīng)。以上結(jié)果表明ERK和JNK參與了氟化鈉誘導(dǎo)的卵巢顆粒細(xì)胞凋亡。 結(jié)論： 氟化鈉可通過引發(fā)氧化應(yīng)激，激活ERK、JNK信號通路，進(jìn)而誘導(dǎo)具有分泌功能的卵巢顆粒細(xì)胞凋亡，降低雌孕激素分泌水平，最終導(dǎo)致大鼠妊娠率降低。本研究為闡明氟化鈉的雌性生殖毒性分子機(jī)制提供了可靠的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，對于防控環(huán)境中的氟危害有重要意義。
【關(guān)鍵詞】：氟化鈉 雌性生殖 卵巢細(xì)胞凋亡 氧化應(yīng)激 MAPK信號通路
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-15
• 1 材料15-17
• 2 方法17-27
• 3 結(jié)果27-37
• 3 討論37-39
• 全文總結(jié)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 文獻(xiàn)綜述43-55
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文56-57

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本文編號：673614