本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞桿菌核酸傳感器及邏輯門(mén)的研究

  更多相關(guān)文章： 銅綠假單胞桿菌 毒素基因 多重LAMP 核酸傳感器 邏輯門(mén) 現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)

【摘要】：銅綠假單胞桿菌造成的污染問(wèn)題日趨嚴(yán)重,而傳統(tǒng)培養(yǎng)基培養(yǎng)和PCR檢測(cè)銅綠假單胞桿菌的方法所需時(shí)間長(zhǎng)、操作復(fù)雜,不能滿足現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的要求。因此,尋求更加經(jīng)濟(jì)高效的檢測(cè)方法非常有必要。本研究針對(duì)銅綠假單胞桿菌的內(nèi)標(biāo)及毒素基因進(jìn)行引物設(shè)計(jì)篩選,并通過(guò)多重LAMP反應(yīng)和膠體金核酸傳感器結(jié)合對(duì)銅綠假單胞桿菌及其毒素進(jìn)行多重檢測(cè)。系統(tǒng)優(yōu)化后該方法可以在50分鐘內(nèi)不依賴復(fù)雜的大型儀器對(duì)銅綠假單胞桿菌及其毒素進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)限為20 CFU/mL,比PCR檢測(cè)技術(shù)更靈敏。同時(shí),將本研究開(kāi)發(fā)的方法應(yīng)用于分子邏輯門(mén),并進(jìn)行自然界水體的實(shí)際樣品檢測(cè)。本研究結(jié)果如下：1.建立銅綠假單胞桿菌及其毒素的等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法。篩選出針對(duì)銅綠假單胞桿菌兩種重要的外毒素基因和內(nèi)標(biāo)基因的特異性引物用于LAMP方法,結(jié)果證實(shí)該方法可以用來(lái)在突發(fā)情況下或者常規(guī)監(jiān)測(cè)研究中,鑒定飲用水和環(huán)境中銅綠假單胞桿菌外毒素的存在性,以判斷其毒性潛力和調(diào)查其致病性。2.建立了多重LAMP與膠體金核酸傳感器結(jié)合同時(shí)檢測(cè)多種基因的方法。將已篩選出的針對(duì)銅綠假單胞桿菌兩種重要的外毒素基因和內(nèi)標(biāo)基因的特異性引物應(yīng)用于多重LAMP體系,結(jié)合膠體金核酸傳感器檢測(cè),驗(yàn)證了該方法的可行性,并對(duì)傳感器的制備進(jìn)行優(yōu)化以提高檢測(cè)性能,最終達(dá)到現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的目的。3. 建立多重膠體金核酸傳感器邏輯門(mén)。應(yīng)用已建立的多重LAMP與膠體金核酸傳感器結(jié)合同時(shí)檢測(cè)多種基因的方法,以銅綠假單胞桿菌內(nèi)標(biāo)基因及兩種毒素基因DNA為輸入條件,以膠體金核酸傳感器的紅色條帶信號(hào)為輸出,建立了YES、AND、OR、INHIBIT、NOR邏輯門(mén)；應(yīng)用所建立的多重膠體金核酸傳感器OR邏輯門(mén),對(duì)飲用水進(jìn)行銅綠假單胞桿菌及其毒素基因的檢測(cè)。
【關(guān)鍵詞】：銅綠假單胞桿菌 毒素基因 多重LAMP 核酸傳感器 邏輯門(mén) 現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R123.1;TP212
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 主要儀器設(shè)備表6-7
• 縮略詞表7-10
• 第一章 緒論10-27
• 1.1 食品微生物安全現(xiàn)狀10-11
• 1.2 食品微生物檢測(cè)技術(shù)的研究概況11-20
• 1.2.1 微生物傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)11
• 1.2.2 微生物試紙片檢測(cè)技術(shù)11-12
• 1.2.3 微生物代謝物檢測(cè)技術(shù)12-13
• 1.2.4 微生物免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)13-14
• 1.2.5 微生物DNA檢測(cè)技術(shù)14-18
• 1.2.6 微生物傳感器檢測(cè)技術(shù)18-20
• 1.3 銅綠假單胞桿菌污染及檢測(cè)現(xiàn)狀20-26
• 1.3.1 銅綠假單胞桿菌風(fēng)險(xiǎn)因子的研究21
• 1.3.2 銅綠假單胞桿菌感染機(jī)制途徑與癥狀21-22
• 1.3.3 銅綠假單胞桿菌耐藥性相關(guān)研究22-23
• 1.3.4 銅綠假單胞桿菌污染情況23-24
• 1.3.5 國(guó)內(nèi)外銅綠假單胞桿菌檢測(cè)方法的研究進(jìn)展24-26
• 1.4 研究目的和研究?jī)?nèi)容26-27
• 1.4.1 研究目的26
• 1.4.2 研究?jī)?nèi)容26-27
• 第二章 銅綠假單胞桿菌及其毒素的LAMP檢測(cè)方法的研究27-36
• 2.1 材料與試劑27-29
• 2.1.1 菌株27
• 2.1.2 主要試劑及配制27-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法29-32
• 2.2.1 微生物培養(yǎng)29
• 2.2.2 環(huán)境及飲用水中銅綠假單胞桿菌的分離及生化鑒定29-30
• 2.2.3 細(xì)菌基因組DNA的提取30-31
• 2.2.4 引物設(shè)計(jì)31
• 2.2.5 銅綠假單胞桿菌基因組的擴(kuò)增31-32
• 2.3 結(jié)果與分析32-35
• 2.3.1 銅綠假單胞桿菌基因組DNA的提取33
• 2.3.2 引物的驗(yàn)證33-34
• 2.3.3 引物特異性驗(yàn)證34
• 2.3.4 銅綠假單胞桿菌及非銅綠假單胞桿菌外毒素基因的LAMP檢測(cè)34
• 2.3.5 飲用水及環(huán)境樣本中銅綠假單胞桿菌外毒素基因的LAMP檢測(cè)34-35
• 2.4 討論35-36
• 第三章 多重LAMP與膠體金核酸傳感器結(jié)合的檢測(cè)方法的建立36-48
• 3.1 材料與試劑36-38
• 3.1.1 試劑與耗材36-37
• 3.1.2 試劑及引物37
• 3.1.3 相關(guān)溶液配置37-38
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法38-40
• 3.2.1 基因組的提取與擴(kuò)增38-39
• 3.2.2 核酸傳感器的制備39-40
• 3.2.3 銅綠假單胞桿菌內(nèi)標(biāo)基因及毒素基因的多重檢測(cè)40
• 3.3 結(jié)果與分析40-47
• 3.3.1 多重LAMP與核酸傳感器結(jié)合的方法建立40-43
• 3.3.2 核酸傳感器的優(yōu)化43-45
• 3.3.3 核酸傳感器性能檢測(cè)45-47
• 3.4 討論47-48
• 第四章 銅綠假單胞桿菌及其毒素膠體金核酸傳感器邏輯門(mén)的建立48-60
• 4.1 材料與試劑48-49
• 4.1.1 試劑與耗材48
• 4.1.2 儀器與器材48
• 4.1.3 相關(guān)溶液配置48-49
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法49-50
• 4.2.1 基因組的提取與擴(kuò)增49-50
• 4.2.2 核酸傳感器的制備50
• 4.3 結(jié)果與分析50-59
• 4.3.1 邏輯門(mén)的實(shí)驗(yàn)原理50-58
• 4.3.2 OR邏輯門(mén)在飲用水樣本中銅綠假單胞桿菌外毒素基因檢測(cè)中的應(yīng)用58-59
• 4.4 討論59-60
• 第五章 結(jié)論與展望60-62
• 參考文獻(xiàn)62-67
• 致謝67-68
• 個(gè)人簡(jiǎn)介68

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本文編號(hào)：670807