本文關鍵詞：鄰苯二甲酸丁基芐酯小鼠神經毒性的體內和體外研究

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【摘要】：目前研究已經發(fā)現(xiàn)了有關于鄰苯二甲酸丁基芐酯(Butyl benzyl phthalate, BBP)的生殖、發(fā)育、氧化損傷及內分泌具有一定的毒性干擾作用,然而BBP對動物和人類的神經毒性以及BBP在體內具體的作用機制究竟是怎么樣的呢?目前還尚待進一步深入的進行研究與探索。 本研究采用體外細胞活力測定、神經細胞毒性實驗、凋亡作用和體內整體動物小鼠行為學實驗、酶活測定、顯微熒光技術相結合的實驗方法,來進行BBP神經毒性的綜合評價。本研究還平行比較了BBP、DBP以及它們共同的代謝產物MBP對細胞的毒性效應；通過對腦組織切片進行分析、神經遞質的變化情況來初步探討B(tài)BP對小鼠學習與記憶能力的影響情況以及可能存在的分子機制。 本研究在體外研究中主要是通過MTT法和Hoechst33258染色來進行鄰苯二甲酸丁基芐酯的細胞毒性評價；通過對染毒細胞ROS、MDA、GSH含量的檢測來探究BBP對小鼠神經瘤細胞的氧化損傷效應。分別采用濃度為的BBP、DBP、MBP來染毒細胞,通過對染毒細胞ROS、MDA、GSH含量的檢測來比較這三種物質對小鼠神經瘤細胞的毒性強弱。 在進行體內試驗時,利用一系列的濃度梯度分別為0(對照組),50,250及1,250mg/kg的BBP連續(xù)兩個周對實驗小鼠進行灌胃染毒,同時通過一系列的行為學經典實驗：Morris水迷宮,懸尾試驗以及強迫游泳試驗,反映BBP對小鼠學習記憶能力的影響。分別測定了腦、肝、腎組織的氧化損傷水平。為了進一步探究BBP毒性的可能存在的分子機制,測得了左腦組織中5-HT ((5-hydroxytryptamine)和p-CREB含量的變化情況。 根據(jù)實驗結果發(fā)現(xiàn)BBP對細胞和組織均有損傷作用。大腦海馬切片圖顯示,隨著BBP的暴露,小鼠海馬區(qū)細胞不完整性逐漸在增加,當BBP的暴露濃度達到了最高濃度組即1,250mg/kg時,海馬區(qū)細胞開始凋亡,而且約有1/3的背側海馬細胞(控制小鼠空間學習記憶能力)受到損傷,BBP高濃度的暴露造成了海馬CA1區(qū)與DG區(qū)的神經元表現(xiàn)出遲發(fā)性的空間學習記憶功能障礙。在BBP暴露之后,降低了神經遞質5-HT的水平,從而通過cAMP/PKA所介導的信號通路下調了CREB磷酸化水平,進一步減弱了CREB的下游分子事件,從而影響了行為學的表現(xiàn)。
【關鍵詞】：鄰苯二甲酸丁基芐酯 Morris水迷宮 5-HT pCREB 顯微熒光觀察 cAMP 氧化損傷
【學位授予單位】：華中師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 1. 文獻綜述11-17
• 1.1 BBP簡介11-12
• 1.2 BBP的理化性質12-13
• 1.3 BBP的來源與用途13-14
• 1.3.1 BBP的來源13
• 1.3.2 BBP的用途13-14
• 1.4 BBP的毒性作用研究進展14-15
• 1.4.1 生殖毒性14
• 1.4.2 發(fā)育毒性14-15
• 1.4.3 氧化損傷和內分泌干擾作用15
• 1.5 研究背景、內容以及意義15-17
• 2. 材料與方法17-29
• 2.1 實驗材料17-18
• 2.1.1 受試細胞及受試動物17
• 2.1.2 實驗儀器17-18
• 2.1.3 實驗所需主要試劑及試劑盒18
• 2.2 BBP對N_2a細胞毒性作用實驗方法18-22
• 2.2.1 培養(yǎng)N_2a細胞18-19
• 2.2.2 染毒液的配制19
• 2.2.3 細胞鋪板和細胞染毒19-20
• 2.2.4 測定N_2a細胞MTT20
• 2.2.5 測定ROS(氧自由基)水平及顯微熒光照相20-21
• 2.2.6 BBP對細胞中丙二醛(MDA)含量的影響21
• 2.2.7 BBP對細胞中谷胱甘肽(GSH)含量的影響21
• 2.2.8 觀察N_2a細胞凋亡21-22
• 2.2.9 BBP、DBP、MBP的毒性比較22
• 2.3 BBP對昆明小鼠學習和記憶能力影響的實驗方法22-29
• 2.3.1 染毒方法22-24
• 2.3.2 Morris水迷宮實驗24-25
• 2.3.3 懸尾實驗25
• 2.3.4 強迫游泳實驗25-26
• 2.3.5 組織勻漿的制備26
• 2.3.6 氧自由基水平的測定26-27
• 2.3.7 丙二醛(MDA)含量的測定27
• 2.3.8 谷胱甘肽(GSH)含量的測定27
• 2.3.9 小鼠大腦海馬組織切片分析27-28
• 2.3.10 小鼠腦組織的5-HT和p-CREB的測定28
• 2.3.11 統(tǒng)計學分析28-29
• 3. 實驗結果29-45
• 3.1 BBP體外毒性研究結實驗結果29-35
• 3.1.1 N_2a細胞形態(tài)29
• 3.1.2 MTT實驗結果29-30
• 3.1.3 細胞凋亡的染色檢驗30-31
• 3.1.4 細胞中ROS水平及細胞顯微熒光圖31-32
• 3.1.5 MDA實驗結果32-33
• 3.1.6 GSH實驗結果33
• 3.1.7 BBP、DBP、MBP的毒性比較33-35
• 3.2 BBP對小鼠學習與記憶能力影響的實驗結果35-45
• 3.2.1 昆明小鼠體重的變化35-36
• 3.2.2 Morris水迷宮的實驗結果36-38
• 3.2.3 懸尾實驗結果38
• 3.2.4 強迫游泳實驗結果38-39
• 3.2.5 BBP對昆明小鼠大腦海馬區(qū)的影響39-40
• 3.2.6 BBP對小鼠腦部、肝臟、腎臟中ROS水平的影響40-41
• 3.2.7 BBP對腦、肝、腎組織中MDA和GSH水平影響41-43
• 3.2.8 5-HT的改變43
• 3.2.9 腦組織中CREB磷酸化分析43-45
• 4. 討論45-49
• 參考文獻49-55
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文55-56
• 附錄56-57
• 致謝57

【參考文獻】

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本文編號：664816