本文關(guān)鍵詞：銅蛋白組在鉛致大鼠海馬神經(jīng)損傷中的作用研究

  更多相關(guān)文章： 鉛暴露 銅相關(guān)蛋白 蛋白質(zhì)組 海馬 神經(jīng)損傷

【摘要】：目的本研究探討銅蛋白組中銅相關(guān)蛋白在鉛致大鼠海馬神經(jīng)損傷中的作用。以其為進(jìn)一步闡明鉛的神經(jīng)毒性作用機(jī)制、從而進(jìn)行鉛暴露標(biāo)志物的篩選。本研究結(jié)果對(duì)鉛中毒進(jìn)行有效的預(yù)防、治療以及早期篩查提供理論依據(jù)。方法1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理及分組:健康雄性SPF級(jí)F344大鼠30只,隨機(jī)分為對(duì)照組和鉛暴露組,采用自由飲水的方式染毒,醋酸鉛組給予0.03%醋酸鉛飲水,對(duì)照組給予0.03%醋酸鈉飲水,連續(xù)染毒9周。2應(yīng)用Morris水迷宮對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為測(cè)試。3應(yīng)用HE染色法觀察大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)變化。4應(yīng)用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS)分析大鼠海馬組織中鉛、銅元素含量。5應(yīng)用ELISA和試劑盒方法檢測(cè)大鼠海馬中晚期糖基化終末產(chǎn)物含量、過氧化氫含量和抑制羥自由基能力。6采用i TRAQ標(biāo)記技術(shù)聯(lián)合液相色譜分離和串聯(lián)質(zhì)譜鑒定的方法對(duì)鉛暴露大鼠模型海馬組織銅差異蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)銅差異表達(dá)蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。7采用蛋白免疫印跡法對(duì)蛋白質(zhì)組中差異銅相關(guān)蛋白CTR1、ATP7A蛋白表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定,驗(yàn)證質(zhì)譜結(jié)果準(zhǔn)確性。8應(yīng)用試劑盒檢測(cè)大鼠海馬中銅相關(guān)蛋白超氧化物歧化酶Cu/Zn SOD、銅藍(lán)蛋白CP的活性。9應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法測(cè)定海馬組織中銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(atp7a、atp7b、ctr1、dmt1)、銅伴侶蛋白(atox1、cox17)和銅儲(chǔ)存蛋白(mt1a、mt2a、mt3)等差異銅相關(guān)蛋白m RNA表達(dá)情況。數(shù)據(jù)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0分析,計(jì)量資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)描述以表(?)±s示,組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn),P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1與對(duì)照組比較,鉛暴露組大鼠的逃逸潛伏期長(zhǎng),穿臺(tái)次數(shù)減少(P0.05)。2光鏡下觀察可見,鉛暴露組大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞排列紊亂,大量細(xì)胞死亡,表現(xiàn)為細(xì)胞核固縮、破裂。3與對(duì)照組比較,鉛暴露組大鼠海馬組織鉛含量是對(duì)照組大鼠海馬組織鉛含量的3.71倍;鉛暴露組大鼠海馬組織中銅的含量是對(duì)照組大鼠海馬組織銅含量的2.87倍。4鉛暴露大鼠海馬組織中過氧化氫和晚期糖基化終末產(chǎn)物的含量均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);鉛暴露大鼠海馬組織抑制羥自由基能力比對(duì)照組下降了9.75%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5鉛暴露大鼠模型海馬組織中共檢測(cè)出5166個(gè)蛋白質(zhì),根據(jù)蛋白的豐度比即差異倍數(shù)大于1.2倍,P值小于0.05等條件篩選,共檢測(cè)出鉛暴露組相對(duì)對(duì)照組共有312個(gè)蛋白質(zhì)有顯著差異。其中,有16個(gè)銅差異蛋白上調(diào),有12個(gè)銅差異蛋白下調(diào)。6蛋白免疫印跡顯示CTR1蛋白的表達(dá)顯著升高,而ATP7A蛋白表達(dá)水平降低,與質(zhì)譜鑒定結(jié)果一致。7鉛暴露組大鼠海馬組織中Cu/Zn-SOD活性降低了2.73%;CP活性降低了61.08%。8與對(duì)照組比較,鉛暴露組海馬組織中銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白atp7a、atp7b、dmt1的m RNA表達(dá)下降,ctr1的m RNA表達(dá)上升;銅伴侶蛋白atox1、cox17的表達(dá)上升;銅儲(chǔ)存蛋白mt1a、mt2a、mt3的m RNA表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論鉛暴露后導(dǎo)致銅在大鼠海馬中蓄積;蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選出鉛暴露大鼠海馬組織中16個(gè)上調(diào)銅相關(guān)蛋白,12個(gè)下調(diào)銅相關(guān)蛋白,主要是銅轉(zhuǎn)運(yùn)和清除蛋白,這可能是鉛神經(jīng)毒性的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：鉛暴露 銅相關(guān)蛋白 蛋白質(zhì)組 海馬 神經(jīng)損傷
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-13
• 第1章 銅蛋白組在鉛致大鼠海馬神經(jīng)損傷中的作用研究13-43
• 1.1 材料與方法13-29
• 1.1.1 主要儀器和試劑13-14
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和處理14-15
• 1.1.3 Morris水迷宮行為實(shí)驗(yàn)測(cè)試大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力15
• 1.1.4 HE染色法觀察海馬組織病理變化15
• 1.1.5 應(yīng)用ICP-MS檢測(cè)鉛暴露大鼠海馬組織中鉛、銅含量變化15-16
• 1.1.6 應(yīng)用試劑盒檢測(cè)鉛暴露海馬組織中氧化損傷情況16-20
• 1.1.7 鉛暴露海馬組織蛋白質(zhì)組的質(zhì)譜鑒定20-23
• 1.1.8 鉛暴露海馬組織中銅相關(guān)差異蛋白免疫印跡法驗(yàn)證23-25
• 1.1.9 應(yīng)用試劑盒檢測(cè)鉛暴露海馬中銅相關(guān)蛋白質(zhì)含量變化25-27
• 1.1.10 鉛暴露海馬中銅相關(guān)差異蛋白mRNA表達(dá)水平檢測(cè)27-29
• 1.2 結(jié)果29-37
• 1.2.1 鉛暴露對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響29-30
• 1.2.2 鉛暴露對(duì)大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)的影響30
• 1.2.3 鉛暴露對(duì)大鼠海馬組織中鉛銅含量的影響30-31
• 1.2.4 鉛暴露對(duì)海馬組織氧化損傷的影響31-32
• 1.2.5 鉛暴露對(duì)大鼠海馬組織中差異表達(dá)蛋白的影響32-33
• 1.2.6 鉛暴露后海馬中銅相關(guān)差異表達(dá)蛋白的生物學(xué)分析33-35
• 1.2.7 鉛暴露海馬中銅相關(guān)差異蛋白ATP7A和CTR1免疫印跡法驗(yàn)證35-36
• 1.2.8 鉛暴露對(duì)大鼠海馬銅相關(guān)蛋白活性的影響36
• 1.2.9 鉛暴露對(duì)大鼠海馬組織中銅相關(guān)蛋白mRNA表達(dá)的影響36-37
• 1.3 討論37-39
• 1.4 結(jié)論39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 第2章 綜述 蛋白質(zhì)組學(xué)與鉛暴露導(dǎo)致疾病的機(jī)制研究43-55
• 2.1 鉛暴露危害及毒性機(jī)制43-45
• 2.2 蛋白質(zhì)組學(xué)及技術(shù)應(yīng)用45-47
• 2.3 金屬組及金屬蛋白導(dǎo)致疾病研究47
• 2.4 蛋白質(zhì)組在鉛暴露導(dǎo)致疾病的研究及技術(shù)應(yīng)用47-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 結(jié)論55-56
• 致謝56-57
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介57-58
• 作者簡(jiǎn)介58-59
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集59

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10 王忻s，

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