本文關(guān)鍵詞：光譜法結(jié)合高效液相色譜法定量分析殼聚糖

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【摘要】：研究目的建立功能性食品等樣品中殼聚糖準(zhǔn)確定量的方法體系。研究方法殼聚糖在弱酸性溶液中由于質(zhì)子化而產(chǎn)生氨基陽(yáng)離子,利用靜電引力和疏水作用力與陰離子染料結(jié)合成穩(wěn)定的離子締合物,根據(jù)結(jié)合后體系光譜學(xué)特征的改變,建立多種共振瑞利散射法和熒光猝滅法定量分析殼聚糖。優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件;探索分子量的影響,并尋找解決解決殼聚糖分子量影響的方法;探索多種共存物質(zhì)的影響并尋找合適的離子掩蔽劑;利用所建立的共振瑞利散射及熒光猝滅新方法測(cè)定樣品中殼聚糖含量。并將熒光猝滅法與共振瑞利散射法測(cè)定結(jié)果相比較。HPLC法先將殼聚糖在氮?dú)獗Ｗo(hù)下水解成氨基葡萄糖,通過(guò)測(cè)定氨基葡萄糖衍生化產(chǎn)物間接測(cè)定殼聚糖含量,并將此結(jié)果與紫外分光光地法測(cè)得氨基葡萄糖結(jié)果相比較。研究結(jié)果1、胭脂紅、剛果紅作探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖的含量胭脂紅、剛果紅與殼聚糖在B-R緩沖溶液體系中結(jié)合,能引起溶液的共振瑞利散射(RRS)顯著增強(qiáng)�？疾炝诉m宜的結(jié)合條件、影響因素以及共振瑞利散射與殼聚糖濃度的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)一定濃度的殼聚糖與散射增強(qiáng)(ΔI)成正比。據(jù)此,建立了殼聚糖含量的測(cè)定的新方法,且方法的靈敏度較高,其中殼聚糖-胭脂紅體系檢測(cè)限0.019μg/mL,剛果紅-殼聚糖體系檢測(cè)限0.044μg/mL。胭脂紅作探針的共振瑞利散射法在低濃度時(shí)不受殼聚糖分子量的影響。剛果紅作探針的共振瑞利散射法不受殼聚糖分子量的影響。用于現(xiàn)有保健藥品中殼聚糖和殼聚糖負(fù)載鑭除氟后水樣中殼聚糖的定量分析,結(jié)果令人滿(mǎn)意。2、水溶性苯胺藍(lán)、萘酚綠b作探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖的含量在弱酸性條件下,考察了殼聚糖與水溶性苯胺藍(lán)、萘酚綠b的結(jié)合情況,建立了兩種水浴條件下大大增強(qiáng)殼聚糖-染料離子締合物共振瑞利散射強(qiáng)度的新方法。結(jié)果顯示在適宜的反應(yīng)條件下,水溶性苯胺藍(lán)、萘酚綠b與殼聚結(jié)合形成離子締合物,能引起溶液的共振瑞利散射(rrs)顯著增強(qiáng)。殼聚糖-水溶性苯胺藍(lán)體系在0.01~3.5μg/ml范圍內(nèi)與殼聚糖濃度呈線(xiàn)性關(guān)系,其檢測(cè)限6.94ng/ml。殼聚糖-萘酚綠b體系在0.01~5.5mg/ml范圍內(nèi)與殼聚糖濃度呈線(xiàn)性關(guān)系,其檢測(cè)限8.87ng/ml。更為重要的是,本文研究了殼聚糖分子量對(duì)測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的影響,發(fā)現(xiàn)這兩種方法均不受殼聚糖分子量的影響。水溶性苯胺藍(lán)、萘酚綠b作探針的共振瑞利散射法是兩種優(yōu)越的檢測(cè)方法,有簡(jiǎn)單、高靈敏度、準(zhǔn)確性好的特點(diǎn)。3、殼聚糖-活性紅4締合體系的熒光猝滅與共振瑞利散射光譜研究及其在殼聚糖定量分析中的應(yīng)用在弱酸性b-r緩沖體系中,殼聚糖對(duì)活性紅4存在熒光猝滅作用,在λex/λem=285nm/341nm波長(zhǎng)處,0.050~2.00μg/ml的濃度范圍內(nèi),其熒光猝滅程度與殼聚糖濃度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。線(xiàn)性方程為:Δf=68.78c+2.648(c,μg/ml),r2=0.9992,檢出限為0.039μg/ml。在相同的介質(zhì)環(huán)境下,殼聚糖-活性紅4離子締合體系于λ=342nm有共振瑞利散射特征峰,在0.050~6.00μg/ml的濃度范圍內(nèi),線(xiàn)性方程為:Δi=681.31c+114.95(c,μg/ml),r2=0.9991,檢測(cè)限0.033μg/ml。據(jù)此,建立了以活性紅4為探針定量分析殼聚糖的兩種新方法:熒光猝滅法和共振瑞利散射法。同時(shí),將兩種方法就殼聚糖分子量對(duì)測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的影響進(jìn)行了研究。將兩種新方法應(yīng)用于實(shí)際樣品的定量檢測(cè),測(cè)定結(jié)果基本一致,且回收率結(jié)果令人滿(mǎn)意。4、氮?dú)獗Ｗo(hù)下酸水解結(jié)合分光光度法、hplc法測(cè)定殼聚糖含量本研究以殼聚糖水解液中氨基葡萄糖的產(chǎn)率為指標(biāo),在氮?dú)獗Ｗo(hù)的環(huán)境下對(duì)殼聚糖水解條件進(jìn)行優(yōu)化,優(yōu)選最佳水解條件。tlc結(jié)果顯示氮?dú)獗Ｗo(hù)下酸水解殼聚糖的最終產(chǎn)物為氨基葡萄糖,且水解時(shí)間越長(zhǎng),其產(chǎn)率越高。UV-Vis法測(cè)定結(jié)果顯示,在100℃6 mol/L的HCl中水解54h水解產(chǎn)率更高。比較UV-Vis法和HPLC法對(duì)氨基葡萄糖的測(cè)定結(jié)果,顯示HPLC法殼聚糖含量測(cè)定結(jié)果明顯低于UV-Vis法,這可能與HPLC測(cè)定的專(zhuān)一性和殼聚糖HCl水解的不完全性有關(guān)。結(jié)論對(duì)比與殼聚糖結(jié)合的5種染料,5種染料均是帶有多個(gè)-SO3-基團(tuán)和多個(gè)剛性平面結(jié)構(gòu);5種共振瑞利散射法測(cè)定樣品結(jié)果基本一致;活性紅4共振瑞利散射法和熒光猝滅法測(cè)定樣品時(shí)所得結(jié)果基本一致;提出兩種消除殼聚糖分子量影響的方法;比較了HPLC法和紫外分光光度法測(cè)定水解后氨基葡萄糖含量,發(fā)現(xiàn)HPLC法測(cè)得結(jié)果偏低,反映出殼聚糖水解尚不徹底,水解方法還有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：殼聚糖 共振瑞利散射法 熒光猝滅法 高效液相色譜法 測(cè)定
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R155.5
【目錄】：

• 摘要7-10
• Abstract10-14
• 前言14-17
• 第一章 胭脂紅、剛果紅作探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖的含量17-28
• 1 材料與方法17-18
• 1.1 儀器與試劑17-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法18
• 2 結(jié)果與分析18-25
• 2.1 光譜分析18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化19-21
• 2.2.1 緩沖溶液19
• 2.2.2 pH的選擇19-20
• 2.2.3 染料濃度的選擇20
• 2.2.4 緩沖溶液的用量20-21
• 2.2.5 加入次序的影響21
• 2.2.6 反應(yīng)時(shí)間和穩(wěn)定時(shí)間21
• 2.2.7 離子強(qiáng)度的影響21
• 2.3 方法靈敏度21-23
• 2.3.1 線(xiàn)性關(guān)系與檢出限21-22
• 2.3.2 殼聚糖分子量的影響22
• 2.3.3 在低濃度下測(cè)定模擬殼聚糖樣品的含量22-23
• 2.4 共存物質(zhì)的影響23-24
• 2.5 樣品含量測(cè)定及加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.5.1 樣品預(yù)處理24
• 2.5.2 實(shí)際樣品測(cè)定及加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)24-25
• 3 共振瑞利散射增強(qiáng)的原因25-27
• 3.1 離子締合物形成使散射分子團(tuán)變大25-26
• 3.2 離子締合物散射位于吸收帶上使散射增強(qiáng)26-27
• 3.3 離子締合物疏水性增強(qiáng)27
• 4 小結(jié)27-28
• 第二章 水溶性苯胺藍(lán)（AB）、萘酚綠B(NGB)作探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖的含量28-42
• 1 材料與方法28-29
• 1.1 儀器與試劑28
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法28-29
• 2 結(jié)果與分析29-37
• 2.1 光譜分析29-30
• 2.2 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化30-33
• 2.2.1 緩沖溶液30
• 2.2.2 pH的選擇及緩沖用量30-31
• 2.2.3 染料濃度31-32
• 2.2.4 溫度的影響32-33
• 2.2.5 反應(yīng)時(shí)間和穩(wěn)定時(shí)間33
• 2.2.6 加入次序的影響33
• 2.2.7 離子強(qiáng)度的影響33
• 2.3 方法靈敏度33-34
• 2.3.1 線(xiàn)性關(guān)系與檢出限33-34
• 2.3.2 分子量的影響34
• 2.4 方法選擇性34-36
• 2.5 樣品含量測(cè)定及加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)36-37
• 2.5.1 樣品預(yù)處理36
• 2.5.2 樣品含量測(cè)定及加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)36-37
• 3 機(jī)制討論37-41
• 3.1 CTS-AB締合機(jī)制討論37-39
• 3.1.1 CTS-AB離子締合物光譜分析37-38
• 3.1.2 CTS-AB離子締合38-39
• 3.2 CTS-NGB締合機(jī)制討論39-41
• 3.2.1 CTS-NGB離子締合機(jī)制39-40
• 3.2.2 CTS-AB離子締合物光譜分析40-41
• 4 小結(jié)41-42
• 第三章 殼聚糖-活性紅4締合體系的熒光猝滅與共振瑞利散射光譜研究及其在殼聚糖定量分析中的應(yīng)用42-53
• 1 材料與方法42-43
• 1.1 儀器與試劑42
• 1.2 方法42-43
• 1.2.1 熒光猝滅法42
• 1.2.2 共振瑞利散射法42-43
• 2 結(jié)果與分析43-52
• 2.1 光譜分析43-44
• 2.2 熒光光譜44
• 2.3 熒光猝滅方式44-45
• 2.4 共振瑞利散射圖譜45-46
• 2.5 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化46-47
• 2.5.1 緩沖溶液及pH的選擇46-47
• 2.5.2 活性紅4溶液濃度的選擇47
• 2.5.3 緩沖溶液用量的選擇47
• 2.5.4 反應(yīng)時(shí)間和穩(wěn)定時(shí)間47
• 2.6 線(xiàn)性關(guān)系與檢出限47-48
• 2.7 共存物質(zhì)干擾48-49
• 2.8 殼聚糖分子量的影響49-51
• 2.8.1 熒光猝滅法49-50
• 2.8.2 共振瑞利散射法50-51
• 2.9 樣品分析51-52
• 2.9.1 樣品預(yù)處理51
• 2.9.2 樣品含量測(cè)定及精密度實(shí)驗(yàn)、加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)51-52
• 3 小結(jié)52-53
• 第四章 氮?dú)獗Ｗo(hù)下酸水解結(jié)合分光光度法、HPLC法測(cè)定殼聚糖含量53-64
• 1 材料與儀器54-55
• 1.1 實(shí)驗(yàn)儀器54-55
• 2 實(shí)驗(yàn)方法55-56
• 2.1 溶液的配制55
• 2.2 殼聚糖水解方法55-56
• 2.3 氨基葡萄糖含量的測(cè)定方法56
• 2.3.1 紫外分光光度法（乙酰丙酮法）56
• 2.3.2 高效液相色譜法（衍生化法）56
• 2.3.3 殼聚糖水解液中氨基葡萄糖產(chǎn)率的計(jì)算方法56
• 3 結(jié)果與討論56-63
• 3.1 殼聚糖水解生成氨基葡萄糖的驗(yàn)證56-57
• 3.2 殼聚糖水解條件優(yōu)化57-61
• 3.2.1 鹽酸和混合酸水解產(chǎn)率的比較57
• 3.2.2 不同反應(yīng)溫度條件下水解產(chǎn)率的比較57-58
• 3.2.3 不同鹽酸濃度條件下水解產(chǎn)率的比較58-59
• 3.2.4 不同固液比條件下水解產(chǎn)率的比較59-60
• 3.2.5 不同反應(yīng)時(shí)間條件下水解產(chǎn)率的比較60
• 3.2.6 100 ℃與 110 ℃不同反應(yīng)時(shí)間水解產(chǎn)率的比較60-61
• 3.3 高效液相色譜法測(cè)定殼聚糖水解液GAH含量61-63
• 3.3.1 高效液相色譜法分析條件61
• 3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制61-62
• 3.3.3 殼聚糖水解液的處理62-63
• 3.3.4 比較紫外分光光度法和高效液相色譜法測(cè)定殼聚糖含量63
• 4 小結(jié)63-64
• 結(jié)論與展望64-65
• 參考文獻(xiàn)65-72
• 綜述72-82
• 參考文獻(xiàn)77-82
• 攻讀碩士期間已發(fā)表論文和專(zhuān)利82-83
• 致謝83

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