甲狀腺干擾物對去卵巢大鼠甲狀腺功能影響的聯(lián)合作用研究

發(fā)布時間：2017-08-09 02:07

本文關鍵詞：甲狀腺干擾物對去卵巢大鼠甲狀腺功能影響的聯(lián)合作用研究

【摘要】：研究目的 1.篩選甲狀腺干擾作用的敏感指標和適宜暴露周期。 2.研究丙基硫脲嘧啶(PTU)、多氯聯(lián)苯(PCBs)和高氯酸銨(AP)甲狀腺干擾作用的劑量-反應關系,建立基準劑量方法,獲得三種物質(zhì)的毒理學參考點。 3.研究PTU、PCBs和AP基于甲狀腺干擾的聯(lián)合作用及其模式,比較3x2析因設計的方差分析法和“劑量相加”法的優(yōu)缺點。研究方法本研究分三部分： 1.PTU甲狀腺干擾作用的時效關系研究按體重將50只健康雌性SD大鼠隨機分為5組：假手術(Sham)對照組、去卵巢(OVX)對照組、OVX給藥4d組、OVX給藥8d組、OVX給藥12d組。給藥組分別灌胃給予5mg/kg bw的PTU玉米油懸浮液4天、8天和12天,對照組給予溶劑對照。檢測指標包括：肝臟I型5’-脫碘酶(5'-DI)活性,肝臟蘋果酸酶(ME)活性,血清T3、T4和TSH水平,組織病理學檢查,甲狀腺臟器系數(shù)和甲狀腺表皮/膠質(zhì)比等,分析不同給藥時間對上述指標的影響。 2. PTU、PCBs和AP甲狀腺干擾作用的劑量-反應關系研究按體重將140只健康雌性SD大鼠隨機分為14組：sham對照組,OVX對照組,PTU4組(劑量：0.1,0.5,1.0,5.0mg/kg bw), PCBs4組(劑量：0.1,1.0,5.0,10.0mg/kg bw), AP4組(劑量：50,100,250,500mg/kg bw)。對照組分別灌胃給予溶劑對照,連續(xù)灌胃8天。檢測指標包括：5’-DI酶活性,血清T3、T4和TSH水平,組織病理學檢查,甲狀腺臟器系數(shù)和甲狀腺表皮/膠質(zhì)比等。分析各受試物的未觀察到有害作用劑量(NOAEL)和觀察到有害作用的最小劑量(LOAEL)。使用基準劑量軟件(BMDS)擬合各受試物每個指標的劑量-反應關系,計算各受試物對每項指標的基準劑量(BMD)和基準劑量下線(BMDL)。 3.PTU、PCBs和AP甲狀腺干擾作用的聯(lián)合作用模式研究按體重將60只大鼠隨機分為6組：OVX對照組,以LOAEL劑量聯(lián)合染毒組(PTU+PCBs, PTU+AP, PCBs+AP, PTU+PCBs+AP),以BMDL劑量聯(lián)合染毒組(PTU+PCBs+AP)。對照組灌胃給予溶劑對照,其余組按上述劑量組合給予受試物,連續(xù)灌胃8天。檢測指標包括：血清T3、T4水平,組織病理學檢查,甲狀腺臟器系數(shù)和甲狀腺表皮/膠質(zhì)比等。使用3×2析因設計的方差分析對PTU、PCBs和AP的交互作用進行分析,根據(jù)方差分析結(jié)果判斷有無交互作用及聯(lián)合作用模式類型。以PTU作為指示化合物,根據(jù)“劑量相加”法基本原理分析三種受試物的聯(lián)合劑量及其對應效應,通過與實測效應比對,分析三種受試物的聯(lián)合作用模式。研究結(jié)果 1.PTU甲狀腺干擾作用的時效關系研究試驗結(jié)束時,各OVX組平均體重和增重均顯著高于sham對照組(P0.01),而OVX各組間體重無顯著差別(P0.05)。各染毒組血清T3, T4, TSH,5'-DI酶活性,甲狀腺臟器系數(shù),表皮/膠質(zhì)比等指標的改變均有統(tǒng)計學意義(P0.05),ME酶活性差異均未見統(tǒng)計學意義(P0.05)。各給藥組甲狀腺均出現(xiàn)不同程度的濾泡上皮增生、濾泡間質(zhì)毛細血管充血、濾泡內(nèi)膠質(zhì)減少等組織病理學變化。血清T3、TSH、5'-DI活性和病理學檢查等指標在給藥4天后就表現(xiàn)出有統(tǒng)計學意義的改變(P0.05),除ME酶活性外,其它檢測指標均在8天時出現(xiàn)顯著改變(P0.05)；同12天組相比,8天組大部分指標(如血清T3、T4、5-DI活性、表皮/膠質(zhì)比等)的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2. PTU、PCBs和AP甲狀腺干擾作用的劑量-反應關系研究試驗結(jié)束時,各OVX組體重和增重均顯著高于sham對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05,P0.01), OVX各組間大鼠體重無顯著差異(P0.05)。所有PTU染毒組血清T3、T4和甲狀腺表皮/膠質(zhì)比的改變有統(tǒng)計學意義(P0.05),甲狀腺出現(xiàn)不同程度的濾泡上皮增生,濾泡膠質(zhì)減少或消失,濾泡間質(zhì)毛細血管充血。部分PTU染毒組血清TSH、5'-DI酶活性和甲狀腺臟器系數(shù)的變化有統(tǒng)計學意義(P0.05)。所有PCBs染毒組血清T4均顯著低于OVX對照組(P0.01),而5'-DI酶活性和甲狀腺臟器系數(shù)的改變無統(tǒng)計學意義(P0.05)；部分PCBs染毒組血清T3、TSH、表皮/膠質(zhì)比的改變有統(tǒng)計學意義(P0.05)。PCBs低劑量組(0.1mg/kg bw)無顯著組織病理學變化,其余組隨著劑量增加甲狀腺組織病理學損傷加重。所有AP染毒組血清T4,TSH,甲狀腺臟器系數(shù)和表皮/膠質(zhì)比的改變均有統(tǒng)計學意義(P0.05),而5'-DI酶活性的改變均無統(tǒng)計學意義(P0.05)；部分AP染毒組的血清T3顯著低于OVX對照組(P0.01)。AP染毒各組甲狀腺出現(xiàn)不同程度的組織病理學損傷。綜合各指標數(shù)據(jù),PTU、PCBs和AP甲狀腺干擾作用的LOAEL分別為0.1,0.1和50mg/kg bw;基準劑量法分析獲得各受試物甲狀腺干擾作用的BMD和BMDL分別為：0.03和O.Olmg/kg bw (PTU),0.06和0.02mg/kg bw (PCBs),22和15mg/kg bw (AP)。 3. PTU、PCBs和AP甲狀腺干擾作用的聯(lián)合作用模式研究實驗結(jié)束時,所有組大鼠體重差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。所有聯(lián)合染毒組的OVX大鼠血清T4,甲狀腺臟器系數(shù)和表皮/膠質(zhì)比的改變均有統(tǒng)計學意義(P0.05)；所有聯(lián)合染毒組均可見不同程度的甲狀腺組織病理學損傷。析因設計的方差分析結(jié)果顯示：PTU和PCBs聯(lián)合對血清T3為協(xié)同作用,對血清T4和甲狀腺臟器系數(shù)為相加作用,而對表皮/膠質(zhì)比表現(xiàn)為拮抗作用；PTU和AP聯(lián)合對甲狀腺表皮/膠質(zhì)比為拮抗作用,而對血清T3、T4和甲狀腺臟器系數(shù)的影響均為相加作用；PCBs和AP聯(lián)合對血清T3為協(xié)同作用,而對血清T4、甲狀腺臟器系數(shù)和表皮膠質(zhì)比的影響均為相加作用；PTU、PCBs和AP三種TDCs共同染毒,對血清T3、T4皆為協(xié)同作用,對甲狀腺表皮/膠質(zhì)比為拮抗作用,而對甲狀腺臟器系數(shù)的影響為相加作用。劑量相加法分析結(jié)果顯示,以LOAEL和BMDL劑量聯(lián)合染毒對OVX大鼠血清T4的影響表現(xiàn)出協(xié)同作用。研究結(jié)論 1.PTU對OVX大鼠甲狀腺干擾作用存在顯著的時效關系,8天是適宜暴露周期,敏感指標有血清T3、T4、TSH、肝臟5'-DI酶活性、甲狀腺臟器系數(shù)和表皮/膠質(zhì)比。 2. PTU、PCBs和AP對OVX大鼠甲狀腺干擾作用呈顯著的劑量-反應關系,三種TDCs的LOAEL分別為0.1,0.1和50mg/kg bw,而BMDL分別為：0.01,0.02和15mg/kg bw。 3. PTU、PCBs和AP同時暴露,對OVX大鼠的影響主要表現(xiàn)為相加或協(xié)同作用。但受作用機制,分析方法的影響,三種物質(zhì)的聯(lián)合作用模式仍需進一步深入研究和分析。
【關鍵詞】：甲狀腺干擾物 時效關系 劑量-反應關系 毒理學參考點 析因設計 劑量相加 聯(lián)合作用模式
【學位授予單位】：中國疾病預防控制中心
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：