本文關(guān)鍵詞：雙酚A誘導(dǎo)大鼠胰島INS-1細(xì)胞DNA損傷及機(jī)制探討

  更多相關(guān)文章： 雙酚A 大鼠胰島β細(xì)胞（INS-1） DNA鏈斷裂 氧化應(yīng)激 p53 p-Chk2(T68)

【摘要】：目的：雙酚A（Bisphenol A，BPA）是一種雌激素干擾物，廣泛用于聚碳酸酯和環(huán)氧樹(shù)脂的生產(chǎn)過(guò)程以及產(chǎn)品中。隨著塑料制品在日常生活中的廣泛應(yīng)用，人們暴露于雙酚A的機(jī)會(huì)也逐漸增多。許多動(dòng)物試驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí)雙酚A具有生殖毒性作用，，并且能夠影響正常的代謝功能。也有研究表明，雙酚A能夠影響胰島細(xì)胞的功能并誘發(fā)胰島素抵抗。本試驗(yàn)旨在了解雙酚A是否會(huì)對(duì)INS-1細(xì)胞產(chǎn)生DNA損傷，并初步探討其可能存在的毒性效應(yīng)機(jī)制。 方法：本實(shí)驗(yàn)選擇大鼠胰島β細(xì)胞（INS-1），在不同濃度雙酚A25、50、100μM條件下，采用單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)（SCGE）和蛋白質(zhì)印跡法（western blot）檢測(cè)雙酚A誘導(dǎo)的DNA損傷及DNA損傷相關(guān)蛋白表達(dá)的情況。為了進(jìn)一步探討研究這種DNA損傷的可能機(jī)制，本次試驗(yàn)采用熒光分子探針2’,7’—二氫二氯熒光素（DCFH）及羥基喜樹(shù)堿熒光素（OPT）的方法，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧類物質(zhì)（ROS）和細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽（GSH）的變化情況，并通過(guò)N-乙酰半胱氨酸（NAC）的抗氧化干預(yù)試驗(yàn)，進(jìn)而說(shuō)明氧化應(yīng)激性損傷在DNA損傷中的作用。試驗(yàn)結(jié)果用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS v11.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：彗星試驗(yàn)顯示雙酚A能夠引起INS-1細(xì)胞DNA鏈斷裂，呈彗星樣拖尾，隨著雙酚A試驗(yàn)劑量的增加核DNA向彗星尾部遷移增多，尾長(zhǎng)增加，尾矩以及尾DNA%明顯增大，與DMSO溶劑對(duì)照組相比差別顯著，不同劑量組間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。蛋白印跡法顯示DNA損傷相關(guān)蛋白p53及p-Chk2(T68)的表達(dá)水平明顯升高。發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)活性氧類物質(zhì)生成明顯增多，還原型谷胱甘肽水平顯著下降，提示了氧化應(yīng)激狀態(tài)存在。經(jīng)N-乙酰半胱氨酸（NAC）抗氧化劑干預(yù)后，顯示細(xì)胞內(nèi)活性氧物質(zhì)生成減少，同時(shí)細(xì)胞DNA鏈斷裂情況減輕，DNA損傷蛋白p53及p-Chk2(T68)的表達(dá)水平相應(yīng)下降。 結(jié)論:雙酚A能夠引起INS-1細(xì)胞的DNA損傷，造成DNA損傷蛋白（p53，p-Chk2(T68)）的表達(dá)增加。雙酚A能夠誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞中活性氧物質(zhì)生成增多，使細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，N-乙酰半胱氨酸（NAC）干預(yù)試驗(yàn)顯示，INS-1細(xì)胞內(nèi)活性氧物質(zhì)生成明顯減少，細(xì)胞DNA鏈斷裂程度減輕，損傷蛋白表達(dá)水平明顯下降，說(shuō)明DNA損傷作用機(jī)制與氧化應(yīng)激有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：雙酚A 大鼠胰島β細(xì)胞（INS-1） DNA鏈斷裂 氧化應(yīng)激 p53 p-Chk2(T68)
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• （一）前言11-12
• （二）材料與方法12-19
• 2.1.主要藥品與試劑12-13
• 2.2.主要儀器13
• 2.3.試驗(yàn)方法13-19
• 2.4.統(tǒng)計(jì)方法19
• （三）結(jié)果19-25
• 3.1.細(xì)胞活性試驗(yàn)19
• 3.2.雙酚 A 誘導(dǎo) INS-1 細(xì)胞 DNA 鏈斷裂19-21
• 3.3.雙酚 A 對(duì) DNA 損傷蛋白（p53 和 p-Chk2 (T68)）表達(dá)的影響21
• 3.4.雙酚 A 對(duì) INS-1 細(xì)胞內(nèi) ROS 水平的影響21-22
• 3.5.雙酚 A 對(duì) INS-1 細(xì)胞內(nèi) GSH 水平的影響22-23
• 3.6.氧化應(yīng)激對(duì)雙酚A誘發(fā)的DNA損傷的影晌23-25
• （四）討論25-31
• 1.雙酚 A 引起 INS-1 細(xì)胞的 DNA 損傷26-28
• 2.雙酚 A 誘發(fā) INS-1 細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激28-29
• 3.氧化應(yīng)激與 DNA 損傷的關(guān)系29-31
• （五）結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-38
• 綜述38-51
• 參考文獻(xiàn)44-51
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況51-52
• 致謝52-53

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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本文編號(hào)：636157