發(fā)布時(shí)間：2017-07-19 14:08

  本文關(guān)鍵詞：亞硝酸鹽暴露致海馬損傷和不孕效應(yīng)的研究

  更多相關(guān)文章： Brd U 細(xì)胞凋亡 氧化應(yīng)激 NO信號(hào)通路 不孕

【摘要】：哺乳動(dòng)物的海馬位于腦顳葉內(nèi),是組成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分,在日常學(xué)習(xí)和記憶形成等生理過(guò)程中起到重要作用。亞硝酸鹽作為食品添加劑,人們?cè)谌粘Ｉ罱佑|的機(jī)率較高,并且,亞硝酸鹽作為小分子物質(zhì),可透過(guò)胎盤屏障,會(huì)對(duì)胎兒產(chǎn)生影響�；诤ｑR重要的生理功能,我們對(duì)孕期亞硝酸鹽暴露是否會(huì)對(duì)仔鼠海馬造成損傷進(jìn)行了研究。同時(shí),在建模的過(guò)程中,通過(guò)實(shí)驗(yàn)手段探討了亞硝酸鹽的不孕效應(yīng)。目的:①探討孕期亞硝酸鹽暴露對(duì)仔鼠海馬損傷的作用;②探討亞硝酸鹽的不孕效應(yīng)。方法:①孕期亞硝酸鹽暴露模型的建立:將孕鼠分為對(duì)照組(生理鹽水)、低劑量亞硝酸鹽組(60 mg/kg)和高劑量亞硝酸鹽組(120 mg/kg)。收集P0(postnatal day 0)、P7(postnatal day 7)、P14(postnatal day 14)、P30(postnatal day 30)各年齡點(diǎn)仔鼠大腦,用于免疫組織熒光染色、彗星實(shí)驗(yàn)、Western blotting蛋白半定量分析,以對(duì)海馬損傷進(jìn)行研究;②雌鼠亞硝酸鹽暴露模型的建立:將雌鼠也分為對(duì)照組、低劑量亞硝酸鹽組、高劑量亞硝酸鹽組,然后對(duì)亞硝酸鹽暴露后雌鼠的不孕率進(jìn)行統(tǒng)計(jì);收集對(duì)照組和暴露組卵巢,用HE染色法觀察卵巢內(nèi)部結(jié)構(gòu)及各級(jí)卵泡數(shù)目的變化;用TUNEL試劑盒和Western blotting蛋白半定量分析對(duì)卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞凋亡進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:①孕期亞硝酸鹽暴露對(duì)仔鼠海馬損傷的影響:不論是暴露組還是對(duì)照組,仔鼠齒狀回增殖的神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)目均隨著年齡的增長(zhǎng)逐漸減少;在P0、P7、P14和P30年齡點(diǎn),暴露組仔鼠增殖的神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)量明顯比對(duì)照組少,且具有劑量依賴性(P0.05,n=96),為了鑒別這種抑制作用是否具有選擇性,我們對(duì)P0仔鼠室管膜下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖情況進(jìn)行了觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn)暴露組室管膜下區(qū)的神經(jīng)干細(xì)胞增殖較對(duì)照組也減少,同樣具有劑量依賴性(P0.05);暴露組仔鼠發(fā)生了氧化應(yīng)激且門區(qū)凋亡細(xì)胞的數(shù)目比對(duì)照組多,具有劑量依賴性(P0.05);彗星實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:暴露組P0仔鼠海馬細(xì)胞的彗尾比對(duì)照組長(zhǎng),具有劑量依賴性(P0.01);與對(duì)照組P0仔鼠相比,暴露組仔鼠海馬組織內(nèi)Caspase 8和NF-κB蛋白的表達(dá)量較高(P0.05);②亞硝酸鹽暴露的不孕效應(yīng):亞硝酸鹽暴露可致不孕且具有劑量依賴性(P0.05,n=66);亞硝酸鹽暴露可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)、可使卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞凋亡增加(P0.01,n=20)。結(jié)論:①孕期亞硝酸鹽暴露可通過(guò)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激、抑制神經(jīng)干細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡而對(duì)仔鼠海馬造成損傷。②亞硝酸鹽可通過(guò)促進(jìn)顆粒細(xì)胞凋亡引起卵泡閉鎖進(jìn)而導(dǎo)致雌鼠不孕。
【關(guān)鍵詞】：Brd U 細(xì)胞凋亡 氧化應(yīng)激 NO信號(hào)通路 不孕
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第一部分：孕期亞硝酸鹽暴露對(duì)仔鼠海馬損傷的作用11-39
• 引言11-13
• 1 材料、儀器與方法13-21
• 1.1 實(shí)驗(yàn)試劑13
• 1.2 常用試劑配方13-16
• 1.3 主要儀器16
• 1.4 動(dòng)物模型與分組16-17
• 1.4.1 動(dòng)物16-17
• 1.4.2 孕期亞硝酸鹽暴露模型的建立及分組17
• 1.5 振蕩切片的制備及免疫組織化學(xué)染色17
• 1.6 BrdU標(biāo)記技術(shù)17-18
• 1.7 彗星實(shí)驗(yàn)18
• 1.8 Western blotting檢測(cè)Caspase8、NF-κB蛋白表達(dá)量18-19
• 1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理19-21
• 2 結(jié)果21-29
• 2.1 孕期暴露與仔鼠海馬齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞增殖21-23
• 2.2 孕期暴露與仔鼠氧化應(yīng)激的發(fā)生23-25
• 2.3 孕期暴露與仔鼠海馬門區(qū)細(xì)胞凋亡25-29
• 3 討論29-31
• 3.1 孕期暴露與仔鼠神經(jīng)干細(xì)胞的增殖29
• 3.2 孕期暴露與氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡29-31
• 4 參考文獻(xiàn)31-33
• 5 附圖及圖版說(shuō)明33-37
• 6 結(jié)論37-39
• 第二部分：亞硝酸鹽不孕效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)性研究39-55
• 引言39-41
• 1 材料、儀器與方法41-45
• 1.1 實(shí)驗(yàn)試劑41
• 1.2 主要儀器41
• 1.3 動(dòng)物模型建立與分組41-42
• 1.4 石蠟切片的制備42
• 1.5 HE染色42
• 1.6 TUNEL免疫熒光標(biāo)記法42
• 1.7 Western blotting檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的Caspase 8、c-fos蛋白含量42-43
• 1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理43-45
• 2 結(jié)果45-47
• 2.1 亞硝酸鹽暴露的致不孕情況45
• 2.2 亞硝酸鹽暴露與卵泡發(fā)育45
• 2.3 亞硝酸鹽暴露后卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞凋亡情況45-47
• 3 討論47-49
• 3.1 亞硝酸鹽的不孕效應(yīng)與氧化應(yīng)激47
• 3.2 亞硝酸鹽的不孕效應(yīng)與卵泡凋亡47-49
• 4 參考文獻(xiàn)49-51
• 5 附圖及圖片說(shuō)明51-53
• 6 結(jié)論53-55
• 綜述55-65
• 1 機(jī)體內(nèi)NO的來(lái)源55-56
• 2 NO的生理功能56-58
• 2.1 NO促進(jìn)血管擴(kuò)張56-57
• 2.2 NO抑制血小板聚集57
• 2.3 NO對(duì)細(xì)胞增殖的影響57
• 2.4 NO對(duì)細(xì)胞凋亡的影響57-58
• 3 NO的病理學(xué)作用58-61
• 3.1 NO與癌癥58-59
• 3.2 NO與心血管疾病59
• 3.3 NO與Ⅱ型糖尿病59-60
• 3.4 NO與不孕癥60-61
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 附錄65-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄67-69
• 致謝69-70

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