本文關(guān)鍵詞：激肽釋放酶激肽系統(tǒng)活化上調(diào)NF-κB介導(dǎo)的三氯乙烯免疫性腎損傷

  更多相關(guān)文章： 三氯乙烯 BALB/c小鼠 激肽釋放酶-激肽系統(tǒng) 核因子NF-κB

【摘要】：研究背景三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)在工業(yè)上被廣泛應(yīng)用為清洗劑、脫脂劑、殺菌劑,低濃度長期接觸會引起“TCE藥疹樣皮炎”(Occupationnal Dermatitis Medicamentosa-like of Trichloroethylene,ODMLT)并伴隨嚴(yán)重的多臟器損傷,腎臟損傷引發(fā)的腎功能衰竭也成為患者死亡的主要原因。三氯乙烯在工業(yè)上用量非常巨大并且短期內(nèi)不能夠被禁止使用,隨著工業(yè)的不斷發(fā)展,職業(yè)性接觸三氯乙烯的人群越來越龐大,因此對于三氯乙烯引發(fā)的腎臟損傷機(jī)制研究在ODLMT患者的預(yù)防和治療中尤為重要。大量臨床病例顯示以往的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)并不能完全解釋腎臟損傷機(jī)制,本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)TCE致敏小鼠腎臟存在血漿激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)(kallikrein-kinin system,KKS)以及核因子NF-κB的活化,并且兩者的活化能夠加重TCE致敏小鼠腎臟損傷。另有國外實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,KKS的活化對細(xì)胞的損傷可能通過上調(diào)核因子NF-κB的表達(dá),從而上調(diào)細(xì)胞因子的表達(dá),加重腎臟炎癥反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)通過建立成熟TCE致敏小鼠模型,使用KKS抑制劑PKSI-527來研究KKS激活加重腎臟損傷的機(jī)制。研究目的通過建立三氯乙烯致敏小鼠模型,采用腹腔注射KKS抑制劑PKSI-527特異性抑制KKS活化,研究KKS相關(guān)指標(biāo)和NF-κB相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性,明確KKS在三氯乙烯致敏小鼠模型中腎臟免疫性損傷的作用機(jī)制。研究方法選取健康雌性6-8周BALB/c小鼠40只,在本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后隨機(jī)分為空白對照組(共5只),溶劑對照組(共5只),TCE處理組(共15只),PKSI-527+TCE處理組(共15只)(在TCE處理的基礎(chǔ)上每只小鼠給予KKS抑制劑PKSI-52750mg/kg)。于末次激發(fā)后24小時(shí)后觀察并記錄實(shí)驗(yàn)小鼠背部受試區(qū)皮膚反應(yīng)情況并按照《化學(xué)品毒性鑒定技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行評分分組,將TCE處理組分為TCE致敏陽性組和TCE未致敏組,PKSI-527+TCE處理組分為PKSI-527+TCE致敏陽性組和PKSI-527+TCE未致敏組。收集小鼠血清,在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生化室檢測各組小鼠血清CR,BUN水平;在無菌條件下取小鼠腎臟組織,一只凍存于-80℃冰箱,用于實(shí)時(shí)定量PCR檢測腎臟P65,Tnf-α,IL-1β,IL-6,IL-17基因水平上的表達(dá),免疫蛋白印記法檢測小鼠腎臟磷酸化P65蛋白的表達(dá)水平;另一只置于10%多聚甲醛溶液中固定,用于蘇木素-伊紅染色,觀察小鼠腎臟病理變化,免疫熒光方法檢測小鼠PK表達(dá)情況。結(jié)果1致敏情況所有受試動物均未出現(xiàn)意外死亡,經(jīng)皮膚致敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)空白和溶劑對照組小鼠皮膚均未出現(xiàn)紅斑或者水腫現(xiàn)象,15只TCE處理的小鼠中,有6只出現(xiàn)紅斑水腫,致敏率為40%;PKSI-527+TCE處理組共15只小鼠中,有4只出現(xiàn)紅斑水腫,致敏率為26.67%。2腎臟損傷病理檢查結(jié)果空白對照組和溶劑對照組小鼠腎臟沒有出現(xiàn)病理學(xué)改變;與溶劑對照組小鼠相比,TCE致敏陽性組小鼠腎臟中出現(xiàn)腎小球旁器畸形增生和腎小管結(jié)構(gòu)的改變,部分腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)溶解現(xiàn)象。與TCE致敏陽性組小鼠相比,PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟中腎小球旁器增生和腎小管畸形明顯減少,病理改變明顯改善。3腎功能檢查結(jié)果腎功能監(jiān)測結(jié)果顯示:與空白組小鼠相比,溶劑對照組小鼠血清Cr,BUN水平無明顯變化,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏陽性組以及PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠血清BUN,Cr水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與相應(yīng)未致敏組相比,TCE致敏陽性組以及PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠血清BUN,Cr水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與TCE致敏陽性組相比以及PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠血清Cr,BUN水平明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4 KKS系統(tǒng)相關(guān)指標(biāo)表達(dá)情況實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示:與空白組相比,溶劑對照組小鼠腎臟PK水平無明顯變化,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏陽性組以及PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟PK水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與相應(yīng)未致敏組相比,TCE致敏陽性組以及PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟PK水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而與TCE致敏陽性組相比,PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟PK水平明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5核因子NF-κB相關(guān)指標(biāo)表達(dá)情況實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果均顯示:與空白組相比,溶劑對照組小鼠腎臟核因子P65核轉(zhuǎn)錄水平無明顯變化,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏陽性組以及PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟核因子P65核轉(zhuǎn)錄水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與相應(yīng)未致敏組相比,TCE致敏陽性組以及PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟核因子P65核轉(zhuǎn)錄水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與TCE致敏陽性組相比,PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟核因子P65核轉(zhuǎn)錄水平明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫蛋白印記實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與空白組相比,溶劑對照組P-P65蛋白水平無明顯變化,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏陽性組以及PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟P-P65蛋白水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與TCE致敏陽性組相比,PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟P-P65蛋白水平明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6炎性細(xì)胞因子表達(dá)情況實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示:與空白組相比,溶劑對照組細(xì)胞因子Tnf-α,IL-1β,IL-6,IL-17核轉(zhuǎn)錄水平無明顯變化,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏陽性組和PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟細(xì)胞因子Tnf-α,IL-1β,IL-6,IL-17核轉(zhuǎn)錄水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與相應(yīng)未致敏組相比,TCE致敏陽性組和PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟細(xì)胞因子Tnf-α,IL-1β,IL-6,IL-17核轉(zhuǎn)錄水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與TCE致敏陽性組相比,PKSI-527+TCE致敏陽性組小鼠腎臟細(xì)胞因子Tnf-α,IL-1β,IL-6,IL-17核轉(zhuǎn)錄水平明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1一定劑量TCE對BALB/c小鼠皮膚染毒可以引起致敏效應(yīng),并有腎臟損傷。2 TCE致敏小鼠導(dǎo)致腎臟損傷可能通過以下機(jī)制實(shí)現(xiàn):KKS激活后,上調(diào)了NF-κB細(xì)胞信號系統(tǒng),引起下游炎癥因子的表達(dá)增多導(dǎo)致。
【關(guān)鍵詞】：三氯乙烯 BALB/c小鼠 激肽釋放酶-激肽系統(tǒng) 核因子NF-κB
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R135
【目錄】：

• 英文縮略詞5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 1 前言15-17
• 2 材料準(zhǔn)備和實(shí)驗(yàn)方法17-30
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法17-30
• 3 結(jié)果30-36
• 3.1 小鼠致敏情況30
• 3.2 TCE致敏小鼠腎臟損傷結(jié)果30-31
• 3.3 KKS在TCE致敏小鼠腎臟損傷中的作用31-32
• 3.4 NF-KB與KKS相關(guān)性32-35
• 3.5 各組實(shí)驗(yàn)小鼠腎臟細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)錄情況35-36
• 4 討論36-38
• 5 結(jié)論38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 附錄42-43
• 致謝43-44
• 綜述44-51
• 參考文獻(xiàn)48-51

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本文編號：545229