本文關(guān)鍵詞：牛乳過(guò)敏原酶聯(lián)免疫分析方法的建立

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【摘要】：牛乳中酪蛋白,β-乳球蛋白和α-乳白蛋白是重要的食品過(guò)敏原,尤其在嬰幼兒中引起過(guò)敏反應(yīng)。本論文制備了牛乳全蛋白,并通過(guò)免疫動(dòng)物制備了特異性識(shí)別牛乳蛋白的多克隆抗體,優(yōu)化建立了牛乳過(guò)敏原蛋白問(wèn)接競(jìng)爭(zhēng)免疫分析方法,并用于實(shí)際樣品的檢測(cè)。 分別以牛乳全蛋白,β-乳球蛋白為免疫原免疫動(dòng)物制備了兔多克隆抗體、鼠抗多克隆抗體。通過(guò)對(duì)包被量,抗體稀釋倍數(shù),蛋白稀釋液pH等檢測(cè)條件的優(yōu)化,針對(duì)牛乳全蛋白和β-乳球蛋白分別建立了問(wèn)接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法。 β-乳球蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的工作條件為：包被蛋白0.05μg/we11,封閉液為1%BSA/PBS,抗體稀釋倍數(shù)為1：10000,蛋白稀釋液為pH8.5的PBS, IC50為3.08±0.24μ/mL。交叉實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,p-乳球蛋白抗體與酪蛋白交叉反應(yīng)率為1.59%,與其余幾種常見(jiàn)食物過(guò)敏原蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。 牛乳全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)全蛋白的工作條件為：包被量為0.05μg/well,封閉液為1%BSA/PBS,抗體稀釋倍數(shù)為1：100000,蛋白稀釋液為pH8.5的PBS,IC50為3.19±0.17μg/mL,同時(shí)該方法可有效檢測(cè)酪蛋白、6-乳球蛋白、α-乳白蛋白,IC50分別是：酪蛋白3.52±0.46μg/mL,β-乳球蛋白3.91±0.84μg/mL,α-乳白蛋白16.27±0.06μg/mL。交叉試驗(yàn)表明該方法與大豆、芝麻、花生、雞蛋等幾種常見(jiàn)過(guò)敏原蛋白無(wú)交叉反應(yīng),顯示了較好的特異性。板內(nèi)變異系數(shù)為0.25%～8.53%,板問(wèn)變異系數(shù)為0.75%-11.72%,證明該方法具有良好的重現(xiàn)性。 將牛乳全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法用于檢測(cè)白面包,添加回收率為81.79%～95.96%,板內(nèi)和板問(wèn)變異系數(shù)分別為6.41%～8.93%,0.18～6.70%。餅干的添加回收率為81.17%～89.30%,板內(nèi)和板問(wèn)變異系數(shù)分別為1.82%～3.52%,3.02～14.11%。說(shuō)明所建立方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確,能有效用于食品中牛乳蛋白含量的準(zhǔn)確測(cè)定。
【關(guān)鍵詞】：牛乳過(guò)敏原 β-乳球蛋白 α-乳白蛋白 酪蛋白 酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R155.5
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-23
• 1.1 食物過(guò)敏8
• 1.2 食物過(guò)敏原及研究現(xiàn)狀8-12
• 1.2.1 食物過(guò)敏原8-9
• 1.2.2 食物過(guò)敏的機(jī)制9-10
• 1.2.3 食物過(guò)敏原的檢測(cè)方法10-11
• 1.2.4 食物過(guò)敏原的安全管理11-12
• 1.3 免疫分析技術(shù)概述12-14
• 1.3.1 免疫分析基本理論12-13
• 1.3.2 酶聯(lián)免疫分析概述13-14
• 1.4 牛乳過(guò)敏原14-21
• 1.4.1 牛乳的概述14
• 1.4.2 牛乳蛋白的性質(zhì)14-16
• 1.4.3 牛乳過(guò)敏原蛋白的研究進(jìn)展16-19
• 1.4.4 牛乳過(guò)敏原蛋白的檢測(cè)方法19-21
• 1.5 論文研究的目的及意義21
• 1.6 研究?jī)?nèi)容21-23
• 2 材料與方法23-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料23-26
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物23
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品23-24
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑24
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器與材料24
• 2.1.5 待測(cè)樣品24
• 2.1.6 實(shí)驗(yàn)溶液的配制24-26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法26-35
• 2.2.1 牛乳主要過(guò)敏原蛋白的制備和鑒定26-27
• 2.2.2 牛乳過(guò)敏原全蛋白多克隆抗體的制備27-29
• 2.2.3 β-乳球蛋白多克隆抗體的制備29-30
• 2.2.4 β-乳球蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA的建立30-31
• 2.2.5 β-乳球蛋白雙抗夾心ELISA方法的建立31-32
• 2.2.6 牛乳過(guò)敏原全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立32
• 2.2.7 牛乳過(guò)敏原全蛋白雙抗夾心ELISA方法的建立32
• 2.2.8 牛乳過(guò)敏原全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的精密度32-33
• 2.2.9 牛乳過(guò)敏原蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的特異性33
• 2.2.10 牛乳過(guò)敏原全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法用于樣品的檢測(cè)33-35
• 3 結(jié)果與討論35-58
• 3.1 牛乳過(guò)敏原蛋白的制備與鑒定35
• 3.2 牛乳過(guò)敏原蛋白多克隆抗體的制備35-38
• 3.2.1 牛乳全蛋白抗體35-37
• 3.2.2 β-乳球蛋白抗體37-38
• 3.3 β-乳球蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立38-41
• 3.3.1 β-乳球蛋白包被量和抗體稀釋倍數(shù)的優(yōu)化38-39
• 3.3.2 β-乳球蛋白稀釋液pH的優(yōu)化39-40
• 3.3.3 β-乳球蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制40-41
• 3.4 β-乳球蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的特異性41-42
• 3.5 β-乳球蛋白雙抗體夾心ELISA方法的建立42-43
• 3.6 牛乳過(guò)敏原蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立43-52
• 3.6.1 牛乳過(guò)敏原全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立43-46
• 3.6.2 牛乳全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)酪蛋白的有效性46-48
• 3.6.3 牛乳全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)β-乳球蛋白的有效性48-50
• 3.6.4 牛乳全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)α-乳白蛋白的有效性50-52
• 3.7 牛乳過(guò)敏原全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的精密度52-54
• 3.7.1 板內(nèi)變異53
• 3.7.2 板間變異53-54
• 3.8 牛乳過(guò)敏原全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的特異性54-55
• 3.9 基質(zhì)影響的消除55-56
• 3.9.1 面包基質(zhì)影響消除55
• 3.9.2 餅干基質(zhì)影響消除55-56
• 3.10 添加回收56-58
• 3.10.1 面包樣品的添加回收56-57
• 3.10.2 餅干樣品的添加回收57-58
• 4 結(jié)論58-59
• 5 展望59-60
• 6 參考文獻(xiàn)60-67
• 7 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況67-68
• 8 致謝68

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：524957