本文關鍵詞：環(huán)境高風險區(qū)環(huán)境樣品污染物去甲基化表觀遺傳毒性研究

  更多相關文章： 環(huán)境樣品 pEGFP-C3 去甲基化 表觀遺傳

【摘要】：目的：對化學物去甲基化表觀遺傳毒性QDMP評價方法進行性能測試，應用此方法定量評價某環(huán)境高風險區(qū)環(huán)境樣品的去甲化表觀遺傳毒性，并探索影響環(huán)境樣品表觀遺傳毒性大小的主要成分。 方法：將pEGFP-C3質粒人工甲基化處理，處理后的C3質粒熒光蛋白基因啟動子區(qū)處于高甲基化狀態(tài)，隨后將該質粒轉染進人類HepG-2肝癌細胞株，以需檢測污染物為受試物與改造后的細胞株(EGFP-HepG2)共培養(yǎng)，依據細胞綠色熒光強度來定量檢測和評價污染物的去甲基化表觀遺傳毒性的強弱（簡稱QDMP方法），對QDMP方法的靈敏性和穩(wěn)定性進行測試，并依據此方法，選取某環(huán)境高風險區(qū)的地表水、地下水、土壤和底泥樣品為代表性的環(huán)境樣品，應用QDMP方法檢測和評價其去甲基化表觀遺傳毒性，并對環(huán)境樣品污染物提取液的主要成分進行掃描檢測分析。 結果：QDMP方法性能測試結果顯示，該方法的評價靈敏度為0.00004μM；對濃度范圍介于0.00016，0.0008，0.004，0.02，0.1μM之間的5-Aza-CdR樣品進行測試，發(fā)現同一樣品5個平行樣品之間的熒光檢測變異程度介于7.5~23.9%之間，顯示出該方法具有一定的穩(wěn)定性。環(huán)境樣品檢測結果顯示，在9個測試樣（2個地表水、3個地下水、2個土壤、2個底泥）中，有7個樣品去甲基化能力較強，占總個測試樣品的78%，其去甲基化表觀遺傳毒性介于0.065-0.257μM的5-AZA-CdR當量之間。一個底泥樣品提取液毒性最高，毒性當量為0.257μM；重金屬檢測發(fā)現其中的Cd的濃度為1.62mg/Kg，超過土壤中的標準限值1.00mg/Kg；一個地下水樣品的毒性較高，毒性當量為0.142μM；重金屬檢測發(fā)現其中的Mn的濃度為4868.87ug/L，超過土壤中的標準限值300ug/L。四個土壤或底泥樣品中，三個樣品的去甲基化能力較強，，重金屬檢測發(fā)現四個樣品的重金屬均超標，環(huán)境樣品表觀遺傳毒性檢測結果與環(huán)境分析結果具有基本一致的趨勢。 結論：QDMP方法具有良好的靈敏性和穩(wěn)定性；部分環(huán)境樣品的去甲基化表觀遺傳毒性較強，對于環(huán)境樣品污染物表觀遺傳毒性效應應該足夠重視；環(huán)境樣品去甲基化表觀遺傳毒性可能與當地的重金屬污染有關。
【關鍵詞】：環(huán)境樣品 pEGFP-C3 去甲基化 表觀遺傳
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 1、引言10-14
• 2、材料和方法14-24
• 2.1 主要材料14-16
• 2.1.1 材料與儀器14-15
• 2.1.2 主要試劑15-16
• 2.2 實驗方法16-24
• 2.2.1 QDMP 方法基本原理與性能測試16-18
• 2.2.2 環(huán)境樣品去甲基化表觀遺傳毒性測試18-23
• 2.2.3 環(huán)境樣品重金屬提取液成分檢測23-24
• 3、結果24-31
• 3.1 C3 質粒轉染 HepG2 細胞株24
• 3.2 細胞綠色熒光的實驗效果24-25
• 3.3 綠色熒光流式細胞檢測效果25-26
• 3.4 定量標準曲線26
• 3.5 QDMP 方法性能測試結果26-28
• 3.5.1 QDMP 方法的靈敏性結果26-27
• 3.5.2 QDMP 方法的穩(wěn)定性結果27-28
• 3.6 環(huán)境樣品的表觀遺傳毒性評價結果28
• 3.7 環(huán)境樣品提取液成分檢測結果28-31
• 4、討論31-34
• 5、結論34-39
• 6、附錄39-41
• 7、致謝41-42
• 8、綜述42-52
• 參考文獻49-52
• 9、附件52-55

【參考文獻】

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1 王先良;滿江紅;王春輝;江艷;王小利;楊怡姝;王菲菲;趙秀閣;李琴;段小麗;張衍q

本文編號：521969