本文關(guān)鍵詞：環(huán)境高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)環(huán)境樣品污染物去甲基化表觀遺傳毒性研究

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【摘要】：目的：對(duì)化學(xué)物去甲基化表觀遺傳毒性QDMP評(píng)價(jià)方法進(jìn)行性能測(cè)試，應(yīng)用此方法定量評(píng)價(jià)某環(huán)境高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)環(huán)境樣品的去甲化表觀遺傳毒性，并探索影響環(huán)境樣品表觀遺傳毒性大小的主要成分。 方法：將pEGFP-C3質(zhì)粒人工甲基化處理，處理后的C3質(zhì)粒熒光蛋白基因啟動(dòng)子區(qū)處于高甲基化狀態(tài)，隨后將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)人類HepG-2肝癌細(xì)胞株，以需檢測(cè)污染物為受試物與改造后的細(xì)胞株(EGFP-HepG2)共培養(yǎng)，依據(jù)細(xì)胞綠色熒光強(qiáng)度來(lái)定量檢測(cè)和評(píng)價(jià)污染物的去甲基化表觀遺傳毒性的強(qiáng)弱（簡(jiǎn)稱QDMP方法），對(duì)QDMP方法的靈敏性和穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)試，并依據(jù)此方法，選取某環(huán)境高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)的地表水、地下水、土壤和底泥樣品為代表性的環(huán)境樣品，應(yīng)用QDMP方法檢測(cè)和評(píng)價(jià)其去甲基化表觀遺傳毒性，并對(duì)環(huán)境樣品污染物提取液的主要成分進(jìn)行掃描檢測(cè)分析。 結(jié)果：QDMP方法性能測(cè)試結(jié)果顯示，該方法的評(píng)價(jià)靈敏度為0.00004μM；對(duì)濃度范圍介于0.00016，0.0008，0.004，0.02，0.1μM之間的5-Aza-CdR樣品進(jìn)行測(cè)試，發(fā)現(xiàn)同一樣品5個(gè)平行樣品之間的熒光檢測(cè)變異程度介于7.5~23.9%之間，顯示出該方法具有一定的穩(wěn)定性。環(huán)境樣品檢測(cè)結(jié)果顯示，在9個(gè)測(cè)試樣（2個(gè)地表水、3個(gè)地下水、2個(gè)土壤、2個(gè)底泥）中，有7個(gè)樣品去甲基化能力較強(qiáng)，占總個(gè)測(cè)試樣品的78%，其去甲基化表觀遺傳毒性介于0.065-0.257μM的5-AZA-CdR當(dāng)量之間。一個(gè)底泥樣品提取液毒性最高，毒性當(dāng)量為0.257μM；重金屬檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其中的Cd的濃度為1.62mg/Kg，超過(guò)土壤中的標(biāo)準(zhǔn)限值1.00mg/Kg；一個(gè)地下水樣品的毒性較高，毒性當(dāng)量為0.142μM；重金屬檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其中的Mn的濃度為4868.87ug/L，超過(guò)土壤中的標(biāo)準(zhǔn)限值300ug/L。四個(gè)土壤或底泥樣品中，三個(gè)樣品的去甲基化能力較強(qiáng)，，重金屬檢測(cè)發(fā)現(xiàn)四個(gè)樣品的重金屬均超標(biāo)，環(huán)境樣品表觀遺傳毒性檢測(cè)結(jié)果與環(huán)境分析結(jié)果具有基本一致的趨勢(shì)。 結(jié)論：QDMP方法具有良好的靈敏性和穩(wěn)定性；部分環(huán)境樣品的去甲基化表觀遺傳毒性較強(qiáng)，對(duì)于環(huán)境樣品污染物表觀遺傳毒性效應(yīng)應(yīng)該足夠重視；環(huán)境樣品去甲基化表觀遺傳毒性可能與當(dāng)?shù)氐闹亟饘傥廴居嘘P(guān)。
【關(guān)鍵詞】：環(huán)境樣品 pEGFP-C3 去甲基化 表觀遺傳
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 1、引言10-14
• 2、材料和方法14-24
• 2.1 主要材料14-16
• 2.1.1 材料與儀器14-15
• 2.1.2 主要試劑15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-24
• 2.2.1 QDMP 方法基本原理與性能測(cè)試16-18
• 2.2.2 環(huán)境樣品去甲基化表觀遺傳毒性測(cè)試18-23
• 2.2.3 環(huán)境樣品重金屬提取液成分檢測(cè)23-24
• 3、結(jié)果24-31
• 3.1 C3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 HepG2 細(xì)胞株24
• 3.2 細(xì)胞綠色熒光的實(shí)驗(yàn)效果24-25
• 3.3 綠色熒光流式細(xì)胞檢測(cè)效果25-26
• 3.4 定量標(biāo)準(zhǔn)曲線26
• 3.5 QDMP 方法性能測(cè)試結(jié)果26-28
• 3.5.1 QDMP 方法的靈敏性結(jié)果26-27
• 3.5.2 QDMP 方法的穩(wěn)定性結(jié)果27-28
• 3.6 環(huán)境樣品的表觀遺傳毒性評(píng)價(jià)結(jié)果28
• 3.7 環(huán)境樣品提取液成分檢測(cè)結(jié)果28-31
• 4、討論31-34
• 5、結(jié)論34-39
• 6、附錄39-41
• 7、致謝41-42
• 8、綜述42-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 9、附件52-55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 王先良;滿江紅;王春輝;江艷;王小利;楊怡姝;王菲菲;趙秀閣;李琴;段小麗;張衍q

本文編號(hào)：521969