發(fā)布時(shí)間：2017-07-04 16:19

  本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型評(píng)估納米銀的體內(nèi)體外毒性

  更多相關(guān)文章： 納米銀(AgNPs) 毒性 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

【摘要】：第一部分:目的:探討納米銀(Ag NPs)對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞(RAW264.7)毒性效應(yīng)的影響,為Ag NPs生物安全性的研究提供依據(jù)。方法:將不同濃度的Ag NPs(0,6.25,12.5,25,50,60,80μg/m L)和RAW264.7共同培養(yǎng),8或24 h后采用甲基噻唑基四唑比色法(MTT)法測(cè)定各組細(xì)胞的活力,選取2.5μg/m L和5μg/m L兩個(gè)無明顯細(xì)胞毒性的濃度進(jìn)行后續(xù)研究,檢測(cè)應(yīng)激相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的變化;酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中炎癥因子TNF-α和IL-6的表達(dá)。結(jié)果:用2.5μg/m L和5μg/m L的Ag NPs處理細(xì)胞:24 h后相差顯微鏡下可見納米顆粒進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),且5μg/m L組的細(xì)胞形態(tài)有明顯改變;8和24小時(shí)后ELISA結(jié)果顯示IL-6無明顯變化,在5μg/m L的24 h處理組TNF-α表達(dá)有顯著升高,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的基因和蛋白在5μg/m L的24 h處理組表達(dá)明顯上調(diào)。結(jié)論:RAW264.7細(xì)胞暴露于低劑量的納米銀后表現(xiàn)出明顯的應(yīng)激反應(yīng),并且與暴露的劑量和作用的時(shí)間存在正相關(guān)性;Ag NPs的能夠進(jìn)入RAW264.7細(xì)胞,可能是其產(chǎn)生毒性效應(yīng)的必要條件。低劑量的Ag NPs會(huì)干擾細(xì)胞的正常生理功能,長(zhǎng)期暴露可能產(chǎn)生不可逆的損傷,應(yīng)引起高度關(guān)注。第二部分:目的:研究納米銀經(jīng)靜脈注射后的主要靶器官分布及應(yīng)激效應(yīng),為評(píng)估Ag NPs對(duì)人體健康和環(huán)境的毒性影響提供理論依據(jù)。方法:Balb/c小鼠經(jīng)尾靜脈注射不同劑量(0.2、2、5 mg/kg)的Ag NPs 8 h后,檢測(cè)Ag NPs在體內(nèi)各器官的生物分布、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、氧化應(yīng)激等,評(píng)估小鼠暴露Ag NPs后早期毒性效應(yīng)。結(jié)果:應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志性的蛋白質(zhì)和基因呈劑量依賴性的顯著上調(diào),其中在脾、肝、肺、腎中最為明顯,并且導(dǎo)致急性毒性反應(yīng);表明小鼠暴露于Ag NPs后,脾、肝、肺、腎是Ag NPs毒性的主要靶器官;心臟和腦中也有Ag NPs存在,但本研究并未檢測(cè)到毒性反應(yīng)。結(jié)論:組織細(xì)胞早期暴露于Ag NPs后會(huì)產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng),如果應(yīng)激反應(yīng)逐步增加可以對(duì)靶器官造成永久的毒性損害,提示在Ag NPs的毒性的評(píng)估中需認(rèn)識(shí)到應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志物的重要性。
【關(guān)鍵詞】：納米銀(AgNPs) 毒性 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第1章 前言12-16
• 第2章 低劑量納米銀對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7 應(yīng)激效應(yīng)研究16-37
• 2.1 引言16-17
• 2.2 材料與方法17-28
• 2.2.1 材料與試劑17
• 2.2.2 儀器17-18
• 2.2.3 AgNPs的表征18
• 2.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)及活力檢測(cè)18-19
• 2.2.5 細(xì)胞形態(tài)和攝入狀態(tài)檢測(cè)19-20
• 2.2.6 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）20-21
• 2.2.7 熒光定量PCR分析21-23
• 2.2.8 蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）23-27
• 2.2.9 數(shù)據(jù)分析27-28
• 2.3 結(jié)果28-33
• 2.3.1 AgNPs的TEM28
• 2.3.2 不同濃度的AgNPs對(duì)細(xì)胞活力的影響28-29
• 2.3.3 細(xì)胞形態(tài)及AgNPs攝入情況29-30
• 2.3.4 RAW254.7 細(xì)胞與AgNPs共培養(yǎng)后相關(guān)炎癥因子表達(dá)情況30-31
• 2.3.5 相關(guān)基因的表達(dá)情況31-32
• 2.3.6 AgNPs對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)的影響32-33
• 2.4 討論33-36
• 2.5 結(jié)論36-37
• 第3章 小鼠單次尾靜脈注射納米銀后各器官的生物效應(yīng)研究37-65
• 3.1 引言37-38
• 3.2 材料與方法38-45
• 3.2.1 材料與試劑38
• 3.2.2 動(dòng)物處理38-39
• 3.2.3 反轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)定量PCR39
• 3.2.4 蛋白質(zhì)印跡法39-40
• 3.2.5 病理組織學(xué)觀察（ HE染色）40-41
• 3.2.6 ICP-MS檢測(cè)納米顆粒的組織攝入量41-42
• 3.2.7 血液學(xué)檢測(cè)42
• 3.2.8 細(xì)胞凋亡分析42-44
• 3.2.9 統(tǒng)計(jì)分析方法44-45
• 3.3 結(jié)果45-55
• 3.3.1 靜脈注射AgNPs后的組織分布45
• 3.3.2 應(yīng)激水平的評(píng)估45-51
• 3.3.3 AgNPs引起組織急性毒性損傷51-55
• 3.4 討論55-57
• 3.5 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-65
• 第4章 文獻(xiàn)綜述 AGNPS對(duì)哺乳動(dòng)物的生物安全性研究進(jìn)展65-73
• 4.1 前言65-66
• 4.2 AGNPS的生物效應(yīng)研究66-70
• 4.2.1 AgNPs的生物分布66-67
• 4.2.2 潛在的毒性67-70
• 4.3 影響AGNPS毒性的因素70-71
• 4.3.1AgNPs本身特性70-71
• 4.3.2 環(huán)境因素71
• 4.4 結(jié)語(yǔ)71-73
• 參考文獻(xiàn)73-78
• 附錄 主要英文縮略語(yǔ)索引78-80
• 碩士期間的研究成果80-81
• 致謝81

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本文編號(hào)：518470