本文關(guān)鍵詞：鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯的卵巢毒性及其分子機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在聚氯乙烯(PVC)等塑料制品的工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中,通常添加鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯(di(2-ethylhexyl)-phthalate,DEHP)用來(lái)增加塑料的彈性和韌性。目前DEHP已成為一種全球性的環(huán)境污染物,前人諸多研究表明DEHP具有生殖毒性、免疫毒性、神經(jīng)毒性、三致作用等。為了探討DEHP的雌性生殖毒性及其分子機(jī)制,本研究分別從細(xì)胞和動(dòng)物水平開(kāi)展實(shí)驗(yàn),首先采用不同劑量DEHP對(duì)中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)進(jìn)行染毒,使用CCK8試劑盒測(cè)定DEHP染毒CHO細(xì)胞24h和48h的半數(shù)抑制濃度IC50,利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)DEHP處理24h后細(xì)胞凋亡基因(Bcl-2、caspase-8、caspase-9)和癌基因(c-fos、k-ras、p53)m RNA表達(dá)水平的改變。然后選擇SPF級(jí)雌性SD大鼠進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn),將動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組(玉米油)、DEHP低劑量組(100mg/kg/d)、DEHP中劑量組(500 mg/kg/d)、DEHP高劑量組(1500mg/kg/d)4個(gè)劑量組,每組10只,每天灌胃1次,每周5次,連續(xù)染毒6周。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后稱量大鼠體重及卵巢濕重,計(jì)算卵巢臟器系數(shù);HE染色后普通光學(xué)顯微鏡觀察大鼠卵巢病理改變,透射電子顯微鏡觀察卵巢顆粒細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化;利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)DEHP染毒后大鼠卵巢組織凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、k-ras、p53)m RNA表達(dá)水平的變化。利用Western blot技術(shù)檢測(cè)DEHP染毒后卵巢中激素受體蛋白黃體生成素受體(luteinizing hormone receptor,LHR)和促性腺激素釋放激素受體(gonadotropin releasing hormone receptor,Gn RHR)蛋白表達(dá)水平的變化。本研究獲得如下主要結(jié)果:1、DEHP對(duì)卵巢細(xì)胞的毒性:DEHP染毒CHO細(xì)胞24h的IC50為612μmol/L,染毒48h的IC50為336μmol/L。DEHP較高劑量(150μmol/L和300μmol/L)染毒條件下,凋亡基因Bcl-2 m RNA表達(dá)水平相較對(duì)照組顯著降低(p0.05或p0.01);300μmol/L DEHP染毒條件下,caspase-8和caspase-9 m RNA表達(dá)水平相較對(duì)照組顯著升高(p0.05或p0.01);300μM DEHP染毒條件下,p53和k-ras m RNA表達(dá)水平相較對(duì)照組顯著升高(p0.05);c-fos m RNA表達(dá)水平與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異。2、DEHP對(duì)雌性大鼠卵巢的病理?yè)p害:DEHP染毒組大鼠卵巢重量和臟器系數(shù)相較對(duì)照組無(wú)顯著性差異(p0.05);普通光學(xué)顯微鏡觀察卵巢的病理改變,DEHP染毒組均可見(jiàn)初級(jí)卵泡中卵母細(xì)胞核消失,DEHP中劑量組觀察到卵泡閉鎖,中劑量和高劑量組觀察到卵母細(xì)胞周圍的顆粒細(xì)胞發(fā)生排列紊亂和脫落的現(xiàn)象。透射電子顯微鏡觀察卵巢顆粒細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變,結(jié)果顯示DEHP染毒組的顆粒細(xì)胞中出現(xiàn)線粒體結(jié)構(gòu)異常、核染色質(zhì)凝聚、形成凋亡小體等凋亡現(xiàn)象,DEHP高劑量組顆粒細(xì)胞出現(xiàn)變性壞死的病理改變。3、DEHP對(duì)雌性大鼠卵巢組織凋亡基因和癌基因表達(dá)水平的影響:DEHP高劑量組Bcl-2 m RNA表達(dá)水平相較對(duì)照組顯著降低(p0.01);Caspase-3、Caspase-8 m RNA表達(dá)量在DEHP中劑量組和高劑量組與對(duì)照組相比顯著升高(p0.01或p0.05);Caspase-9 m RNA表達(dá)量在DEHP高劑量組與對(duì)照組相比顯著升高(p0.05);DEHP染毒組c-fos m RNA表達(dá)量與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(p0.05);k-ras、p53 m RNA表達(dá)量在DEHP中劑量組和高劑量組顯著高于對(duì)照組(p0.01)。4、DEHP對(duì)雌性大鼠卵巢組織中激素受體蛋白LHR和Gn RHR表達(dá)的影響:DEHP中劑量組和高劑量組中,LHR蛋白表達(dá)水平比對(duì)照組下降25%~35%(p0.05或p0.01),Gn RHR蛋白表達(dá)水平比對(duì)照組下降60%~80%(p0.01)。本研究通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn),獲得如下結(jié)論:1、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)水平,DEHP染毒引起CHO細(xì)胞活力下降,DEHP可能通過(guò)內(nèi)源性線粒體促凋亡途徑介導(dǎo)CHO細(xì)胞凋亡。高劑量的DEHP處理誘導(dǎo)CHO細(xì)胞原癌基因異常表達(dá),提示DEHP可能具有一定程度的致癌效應(yīng)。2、形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)DEHP處理引起大鼠卵巢卵泡結(jié)構(gòu)受損,顆粒細(xì)胞出現(xiàn)凋亡,高劑量DEHP暴露誘導(dǎo)細(xì)胞變性壞死。3、DEHP可能通過(guò)內(nèi)源性線粒體促凋亡途徑誘導(dǎo)卵巢顆粒細(xì)胞凋亡,同時(shí)DEHP可誘導(dǎo)原癌基因的異常表達(dá)發(fā)揮潛在的致癌效應(yīng);DEHP還能通過(guò)影響激素受體表達(dá)水平引起顆粒細(xì)胞凋亡,發(fā)揮卵巢毒性。
【關(guān)鍵詞】：DEHP 卵巢 凋亡 線粒體 超微結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：深圳大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 前言11-21
• 1.1 DEHP的物理性質(zhì)11
• 1.2 DEHP的用途11
• 1.3 DEHP的來(lái)源與接觸途徑11-13
• 1.4 DEHP在人體內(nèi)的吸收、代謝和排泄13
• 1.5 DEHP的毒性13-21
• 第2章 DEHP對(duì)卵巢細(xì)胞的毒性研究21-33
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法22-26
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26
• 2.4 結(jié)果26-31
• 2.5 討論31-33
• 第3章 DEHP對(duì)雌性大鼠卵巢病理?yè)p害33-44
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料33-34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法34-37
• 3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析37
• 3.4.結(jié)果37-41
• 3.5 討論41-44
• 第4章 DEHP對(duì)雌性大鼠基因與蛋白質(zhì)表達(dá)的影響44-59
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料44-46
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法46-50
• 4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析50
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-55
• 4.5 討論55-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 附錄67-68
• 致謝68-69
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果69-70

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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  本文關(guān)鍵詞：鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯的卵巢毒性及其分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：505804