本文關(guān)鍵詞：雙酚A對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化影響的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景人工合成化學(xué)物雙酚A (Bisphenol A, BPA)已經(jīng)成為世界上最高產(chǎn)量的化學(xué)物之一。主要用于聚碳酸酯塑料和環(huán)氧樹(shù)脂的生產(chǎn)。聚碳酸酯塑料廣泛用于飲料容器和食品包裝袋的生產(chǎn)。環(huán)氧樹(shù)脂主要用于食品罐頭的食物接觸面。在加熱及堿性或者酸性環(huán)境下,BPA單體會(huì)從這些包裝容器里釋放出來(lái)進(jìn)入到環(huán)境和食物中。人們?cè)谑秤眠@些容器包裝的食物時(shí),會(huì)攝入BPA。生物監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)表明,超過(guò)90%的人暴露于BPA,在他們的血液和尿液中都可以檢測(cè)到BPA或其代謝產(chǎn)物。BPA是一種已知的環(huán)境內(nèi)分泌干擾化學(xué)物(environmental endocrine disrupting chemical, EDC),具有弱雌激素活性,可以對(duì)包括內(nèi)分泌、神經(jīng)行為、生殖發(fā)育等產(chǎn)生不良影響。大量的研究表明,BPA暴露與肥胖以及肥胖相關(guān)的胰島素抵抗具有明顯的相關(guān),而肥胖是機(jī)體處于一種全身低度的慢性炎癥狀態(tài),表現(xiàn)為脂肪組織中大量脂肪組織巨噬細(xì)胞(adipose tissue macrophages, ATMs)浸潤(rùn)。在肥胖發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中,浸潤(rùn)在內(nèi)臟脂肪組織的巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,損害脂肪細(xì)胞分泌有益的脂肪因子和儲(chǔ)存脂質(zhì)的功能。巨噬細(xì)胞在脂肪組織的聚集和浸潤(rùn)與其極化狀態(tài)明顯相關(guān)。巨噬細(xì)胞可分為經(jīng)典激活的發(fā)揮促炎作用的M1型(F4/80+CD11c+ CD206-)和替代活化的發(fā)揮抗炎作用的M2型(F4/80+CD11c-CD206+)。然而,BPA對(duì)巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)的影響,至今也尚未見(jiàn)報(bào)道。但這對(duì)研究BPA引起胰島素抵抗的作用機(jī)制非常有意義。研究目的通過(guò)分析不同濃度BPA對(duì)體外誘導(dǎo)極化的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞亞型(M1和M2型)表面分子、分泌的細(xì)胞因子、調(diào)控巨噬細(xì)胞極化轉(zhuǎn)錄因子IRF-4和IRF-5的影響,探討B(tài)PA對(duì)體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞極化的影響,為BPA誘導(dǎo)肥胖等代謝紊亂發(fā)病機(jī)制提供試驗(yàn)依據(jù)。研究方法SPF級(jí)健康6-8周齡雄性C57BL/6J小鼠。斷頭法處死小鼠,無(wú)菌條件下向腹部注入含雙抗(100 U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素)的DMEM培養(yǎng)基5 m1,用注射器抽取腹腔液約4 ml,常溫下1000 r·min-1離心8 min,棄上清。調(diào)整細(xì)胞至所需濃度,接種于6孔培養(yǎng)板,37℃,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)3h。PBS洗去未貼壁的細(xì)胞。細(xì)胞正常培養(yǎng)24h后,用10ng/mL的IFN-γ和500 ng/mL的LPS誘導(dǎo)其向M1型極化,用10ng/mL的IL-4誘導(dǎo)其向M2型極化。在加入誘導(dǎo)劑的同時(shí)用0.1、1和10 μmol/L的BPA處理細(xì)胞,用DMSO作溶劑對(duì)照。誘導(dǎo)向M1型極化時(shí),先用10 ng/mL的IFN-γ誘導(dǎo)24h,再加入500 ng/mL的LPS刺激細(xì)胞24h,然后收集上清和細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)檢測(cè)M1型和M2型巨噬細(xì)胞比例。ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清中的細(xì)胞因子IL-6, iNOS, MCP-1, IL-10,和Arg-1的表達(dá)水平。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real time-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)檢測(cè)IL-6, iNOS, MCP-1, CD11c, IL-10, Arg-1, CD206, IRF4, IRF5的基因表達(dá)水平。用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果1小鼠腹腔巨噬細(xì)胞體外誘導(dǎo)極化結(jié)果1.1誘導(dǎo)前后細(xì)胞形態(tài)變化小鼠腹腔巨噬細(xì)胞用M1型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后,細(xì)胞呈圓形(M1型巨噬細(xì)胞形態(tài)),用M2型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后,細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣(M2型巨噬細(xì)胞形態(tài))。1.2誘導(dǎo)前后M1型和M2型巨噬細(xì)胞的數(shù)量變化FCM檢測(cè)M1型巨噬細(xì)胞的比例較誘導(dǎo)前升高2.50倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；M2型巨噬細(xì)胞的比例升高2.33倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。1.3誘導(dǎo)前后M1型和M2型巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的變化ELISA檢測(cè)M1型巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子iNOS明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01), M2型巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子Arg-1明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2不同劑量BPA對(duì)體外誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞向M1型極化的影響2.1對(duì)M1型巨噬細(xì)胞數(shù)量的影響與空白對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組和0.1μmol/L BPA組的M1比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而1和10μmol/L BPA組的M1比例升高(P0.05,P0.01)。2.2對(duì)M1型巨噬細(xì)胞表面分子CD11c mRNA表達(dá)水平的影響與空白對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組和0.1 μimol/L BPA組的CD11c mRNA表達(dá)水平差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而1μmol/L BPA組和10μmol/L BPA的CDllc表達(dá)水平明顯升高(P0.01,P0.01)2.3對(duì)M1型巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的影響2.3.1對(duì)M1巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子含量或活性的影響與空白對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組和0.1μmol/L BPA組的M1型巨噬細(xì)胞分泌的促炎性細(xì)胞因子IL-6, iNOS, MCP-1差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而1和10μmol/L BPA組IL-6, iNOS, MCP-1表達(dá)升高(P0.01,P0.01)2.3.2對(duì)M1型巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平的影響與空白對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組和0.1μmol/L BPA組的M1型巨噬細(xì)胞分泌的足炎性細(xì)胞因子IL-6, iNOS, MCP-1 mRNA表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而1μmol/L BPA組和10μmol/L BPA組IL-6, iNOS, MCP-1 mRNA表達(dá)與空白對(duì)照組相比,顯著升高(P0.01,P0.01,P0.01)。3不同劑量BPA對(duì)體外誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞向M2型極化的影響3.1對(duì)M2型巨噬細(xì)胞數(shù)量的影響與空白對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組和0.1μmol/L BPA組的M2比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而1和10μmol/L BPA組的M2比例下降(P0.05,P0.01)。3.2對(duì)M2型巨噬細(xì)胞表面分子CD206 mRNA表達(dá)水平的影響與空白對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組和0.1μmol/L BPA組的M2型巨噬細(xì)胞表面分子CD206 mRNA表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而1和10μmol/L BPA組的CD206mRNA表達(dá)顯著降低(P0.05,P0.01)。3.3對(duì)M2型巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的影響3.3.1對(duì)M2型巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子含量或活性的影響與空白對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組和0.1μmol/L BPA組的M2型巨噬細(xì)胞分泌的抗炎性細(xì)胞因子IL-10和Arg-1差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而1μmol/L BPA組和10μmol/LBPA組IL-10和Arg-1表達(dá)下降(P0.01,P0.01)。3.3.2對(duì)M2型巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平的影響與空白對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組和0.1μmol/L BPA組M2型巨噬細(xì)胞分泌抗炎主細(xì)胞因子IL-10和Arg-1 mRNA表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而1μmol/L BPA組IL-10和Arg-1 mRNA表達(dá)顯著降低(P0.05,P0.01),10μmol/L BPA組IL-10和Arg-1 mRNA表達(dá)也顯著降低(P0.05,P0.05)。4 BPA對(duì)體外誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化中IRF4和IRF5 mRNA水平的影響4.1 BPA對(duì)體外誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化中IRF4和IRF5 mRNA水平的影響M1型極化中：各劑量BPA組的轉(zhuǎn)錄因子IRF4 mRNA表達(dá)水平差異均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與空白對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組和0.1 μmol/L BPA組的IRF5的mRNA表達(dá)水平差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而1 μmol/L BPA組和10μmool/L BPA組IRF5mRNA表達(dá)水平明顯升高(P0.01,P0.01)。M2型極化中：與空白對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組,0.1μmol/L BPA組和1μmol/LBPA組IRF4的mRNA表達(dá)水平差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而10μmol/L BPA組IRF4表達(dá)水平明顯降低(P0.01)；各劑量BPA組的轉(zhuǎn)錄因子IRF5 mRNA表達(dá)水平差異均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.2轉(zhuǎn)錄因子IRF4和IRF5與巨噬細(xì)胞亞型比例的相關(guān)性相關(guān)性分析顯示,轉(zhuǎn)錄因子IRF5與M1型巨噬細(xì)胞有顯著正相關(guān)性(相關(guān)系數(shù) r=0.629,P=0.012)。結(jié)論1體外條件下,IFN-γ能夠誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1型極化；IL-4能夠誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型極化。型巨噬細(xì)胞的數(shù)量,升高M(jìn)1型巨噬細(xì)胞特異性表面分子CD11c的mRNA的表達(dá),足進(jìn)M1型巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-6, iNOS, MCP-1的表達(dá)。3體外條件下,低濃度的BPA抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞向M2型極化,減少M(fèi)2型巨噬細(xì)胞的數(shù)量,降低M2型巨噬細(xì)胞特異性表面分子CD206的mRNA的表達(dá),抑制M2型巨噬細(xì)胞分泌的抗炎性細(xì)胞因子IL-10, Arg-1的表達(dá)。4 BPA可能通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子IRF5調(diào)控巨噬細(xì)胞向M1型極化。
【關(guān)鍵詞】：雙酚A M1型巨噬細(xì)胞 M2型巨噬細(xì)胞 極化
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要5-10
• Abstract10-16
• 1.引言16-18
• 2.材料和方法18-24
• 3.結(jié)果24-37
• 4.討論37-40
• 5.結(jié)論40
• 6.參考文獻(xiàn)40-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45-46
• 致謝46-47
• 綜述47-57
• 參考文獻(xiàn)53-57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 劉黎;胡靜平;岳艷;;雌激素通過(guò)調(diào)節(jié)IRF4促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型極化[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2013年04期

2 李春燕;李素梅;;脂肪組織巨噬細(xì)胞與胰島素抵抗關(guān)系的研究進(jìn)展[J];國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志;2012年04期

  本文關(guān)鍵詞：雙酚A對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化影響的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：492431