本文關(guān)鍵詞：米糠α-生育酚抗腸炎的功能評價及初步機理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：米糠作為我國糧油資源的重大寶庫,有效加強其基礎(chǔ)研究,尤其是探索其所含生理活性成分的功能及作用的分子機理,將對米糠資源深度開發(fā)和利用起到重要推動作用。米糠α-生育酚作為米糠生理活性成分中備受矚目的一員,具有潛在的預(yù)防、治療和／或控制多種疾病的作用,提供了稻米所含傳統(tǒng)營養(yǎng)之外的健康益處。炎癥性腸病(IBD)是一種與遺傳、腸道感染、免疫失調(diào)、環(huán)境及精神狀態(tài)等息息相關(guān)的非特異性腸道炎癥疾病,對其病因、病機和治療正處于不斷探索中。本文以米糠α-生育酚為研究對象,分別以葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導的小鼠腸炎模型和脂多糖(LPS)誘導的巨噬細胞RAW264.7體外炎癥模型探討其抗炎功效及初步抗炎機理。 在以1.0%DSS連續(xù)飲用12d誘導的C57BL/6小鼠腸炎模型中,DSS模型組小鼠精神恍惚,毛發(fā)暗淡,體重明顯減輕,肉眼血便,嚴重腹瀉；大體觀察可見結(jié)腸與周圍組織粘連,難剝離,腸壁增厚,腸管僵硬,腸黏膜充血、水腫、糜爛,結(jié)腸縮短、變重,脾臟腫大；組織病理學評分上升,切片觀察顯示,炎癥累及黏膜及黏膜下層,腸上皮脫落,炎癥細胞浸潤,杯狀細胞減少,腺體及隱窩破壞,并以遠端結(jié)腸為重；生化指標顯示,MPO活性增高,中性粒細胞浸潤增多。上述不良癥狀經(jīng)米糠α-生育酚干預(yù)后明顯好轉(zhuǎn),體重下降、結(jié)腸縮短變重得到抑制,脾臟重量、疾病活動指數(shù)、組織病理學評分、MPO活性均下降,炎癥得到減輕,其中空白對照組、DSS模型組、α-生育酚干預(yù)組,DAI評分分別為：0.20±0.42、9.10±0.87、7.40±1.58; MPO活性分別為：0.29±0.05U/g、0.83±0.23U/g、0.67±0.19U/g,表明米糠α-生育酚對DSS誘導的小鼠腸炎具有抑制作用。 在對結(jié)腸組織勻漿中SOD活性及MDA含量生化法檢測中,DSS模型組結(jié)腸勻漿SOD活性下降明顯,MDA含量則明顯增加；用米糠a-生育酚干預(yù)后SOD活性得到提升,MDA含量則減少,表明米糠α-生育酚對DSS引起的小鼠氧化應(yīng)激具有緩解作用。在對促炎因子IL-6和TNF-α mRNA表達的檢測中,DSS模型組兩種促炎因子均高表達,而米糠α-生育酚則在mRNA水平有效抑制其表達,此外NO的含量在DSS模型組中較高,干預(yù)組中減少。其中空白對照組、DSS模型組、α-生育酚干預(yù)組,MDA含量分別為：0.97±0.11nmol/mg protein、3.91±0.36nmol/mg protein、2.73±0.71nmol/mg protein; SOD活性分別為：67.69±3.64U/mg protein、27.23±6.57U/mg protein、40.58±8.38U/mg protein; NO含量分別為：0.75±0.07nmol/mg protein、1.87±0.41nmol/mg protein、1.42±0.43nmol/mg protein; IL-6mRNA相對表達量分別為：1.34±0.14、51.91±31.71、18.91±13.73; TNF-α mRNA相對表達量分別為：1.44±0.24、12.88±4.23、9.33±5.52。這些說明米糠α-生育酚在DSS誘導的小鼠腸炎模型中可能通過抑制小鼠氧化應(yīng)激而干預(yù)相關(guān)信號轉(zhuǎn)導途徑,減輕炎癥介質(zhì)NO、TNF-α、IL-6的釋放。 在對LPS誘導的巨噬細胞RAW264.7體外炎癥模型中,采用MTS法確定細胞活性,在不高于120μg/mL濃度下的α-生育酚和1μg/mL LPS對細胞均無明顯毒副作用。1μg/mL LPS誘導,30μg/mL、60μg/mL、120μg/mL米糠α-生育酚干預(yù)后,ELISA檢測RAW264.7細胞IL-6和TNF-α蛋白表達,LPS模型組中兩種促炎因子蛋白表達升高明顯,在經(jīng)米糠α-生育酚干預(yù)后,兩種促炎因子蛋白表達下降,并隨著α-生育酚干預(yù)濃度的增加,下降更為明顯。同時對細胞NO釋放量的測定中,LPS刺激明顯增加其含量,α-生育酚干預(yù)后含量減少,且隨α-生育酚干預(yù)濃度的增加效果更為明顯。這些說明米糠α-生育酚在體外抗炎模型中亦能有效抑制LPS誘導的巨噬細胞炎性介質(zhì)IL-6、TNF-α、NO的釋放。
【關(guān)鍵詞】：米糠 α-生育酚 炎癥性腸病 葡聚糖硫酸鈉 脂多糖
【學位授予單位】：中南林業(yè)科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：TS201.4;R151
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英文縮略詞表9-13
• 1 緒論13-19
• 1.1 米糠簡介13
• 1.2 米糠與α-生育酚13-14
• 1.3 α-生育酚的生理功能14-17
• 1.3.1 促進生殖發(fā)育15
• 1.3.2 抗氧化15-16
• 1.3.3 抗腫瘤16
• 1.3.4 心血管效應(yīng)16
• 1.3.5 其他16-17
• 1.4 研究思路17-19
• 2 米糠α-生育酚對DSS誘導小鼠腸炎的抑制作用19-33
• 2.1 引言19-20
• 2.2 材料與方法20-25
• 2.2.1 實驗動物20
• 2.2.2 實驗試劑20-21
• 2.2.3 實驗儀器21
• 2.2.4 實驗方法21-24
• 2.2.5 統(tǒng)計學分析24-25
• 2.3 結(jié)果25-30
• 2.3.1 米糠α-生育酚對DSS誘導小鼠一般情況及疾病活動指數(shù)(DAI)的影響25-26
• 2.3.2 米糠α-生育酚對DSS誘導小鼠結(jié)直腸和脾臟的影響26-28
• 2.3.3 米糠α-生育酚對DSS誘導小鼠結(jié)腸病理組織學評分的影響28-30
• 2.3.4 米糠α-生育酚對DSS誘導小鼠結(jié)腸MPO的影響30
• 2.4 討論30-33
• 3 米糠α-生育酚抑制DSS誘導小鼠腸炎初步機理33-49
• 3.1 引言33-34
• 3.2 材料與方法34-41
• 3.2.1 實驗試劑34-35
• 3.2.2 實驗儀器35
• 3.2.3 實驗方法35-40
• 3.2.4 統(tǒng)計學分析40-41
• 3.3 結(jié)果41-46
• 3.3.1 米糠α-生育酚對DSS誘導小鼠腸炎結(jié)腸組織MDA水平的影響41
• 3.3.2 米糠α-生育酚對DSS誘導小鼠腸炎結(jié)腸組織SOD活性的影響41-42
• 3.3.3 米糠α-生育酚對DSS誘導小鼠腸炎結(jié)腸組織NO水平的影響42-43
• 3.3.4 結(jié)腸組織總RNA完整性分析43
• 3.3.5 米糠α-生育酚對DSS誘導小鼠腸炎結(jié)腸組織IL-6 mRNA的影響43-44
• 3.3.6 米糠α-生育酚對DSS誘導小鼠腸炎結(jié)腸組織TNF-α mRNA的影響44-46
• 3.4 討論46-49
• 4 米糠α-生育酚對LPS刺激RAW264.7釋放細胞因子的影響49-59
• 4.1 引言49
• 4.2 材料與方法49-54
• 4.2.1 細胞株49
• 4.2.2 實驗試劑49-50
• 4.2.3 實驗儀器50
• 4.2.4 實驗方法50-53
• 4.2.5 統(tǒng)計學分析53-54
• 4.3 結(jié)果54-56
• 4.3.1 米糠α-生育酚對LPS誘導RAW264.7細胞毒性結(jié)果54
• 4.3.2 米糠α-生育酚對LPS誘導RAW264.7釋放NO的影響54-55
• 4.3.3 米糠α-生育酚對LPS誘導RAW264.7釋放TNF-α的影響55-56
• 4.3.4 米糠α-生育酚對LPS誘導RAW264.7釋放IL-6的影響56
• 4.4 討論56-59
• 5 結(jié)論59-61
• 6 創(chuàng)新點61-63
• 參考文獻63-71
• 附錄A 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文71-73
• 附錄B 碩士學位論文資金資助73-75
• 致謝75

【參考文獻】

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本文編號：477201