本文關鍵詞：脂氧合酶在四種細胞系的表達及SV-HUC細胞中介導聯(lián)苯胺氧化應激，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]研究四種人正常細胞系(SV-HUC、HBE、HTR-8、HaCat)脂氧合酶同工酶蛋白表達及誘導表達情況,并比較5-LOX與CYP1B1/2E1蛋白表達水平；同時探討聯(lián)苯胺(BZD)對其致癌主要的靶細胞人膀胱上皮細胞(SV-HUC)的氧化應激作用及5-LOX對其作用的影響；為LOX協(xié)同氧化外源性化學物及其損傷提供進一步的線索。[方法]①蛋白印跡法測定5-LOX.12-LOX.15-LOX-2、CYP1B1CYP2E1蛋白表達水平；②以SV-HUC細胞為氧化應激研究目標細胞,不同濃度BZD(50、100、200μmol)染毒SV-HUC細胞24h,采用熒光分光光度計測定細胞內ROS水平,分光光度計超氧歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和抗氧化劑(GSH)含量的變化,酶標儀檢測細胞內丙二醛(MDA)的含量；同時測定5-LOX特異性抑制劑AA861對上述氧化應激指標的影響。[結果]①四種正常細胞中均有5-LOX、15-LOX-2的表達,苯并(a)芘、BZD可誘導5-LOX表達增加；SV-HUC細胞中5-LOX蛋白表達水平與CYP2E1相差不大,高于CYP1B1;在正常HBE、HaCat、HTR-8細胞中,5-LOX蛋白表達水平低于CYP1B1;②BZD可誘導SV-HUC細胞內ROS水平、CAT酶活力及MDA含量增加,BZD為100、200μmol/L時ROS和CAT活力顯著增加(p0.05),200μmol/L BZD時MDA增加具有統(tǒng)計學差異(p0.05),細胞內SOD酶活力隨著BZD濃度增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(p0.05),細胞內GSH含量隨著毒物濃度升高而下降,BZD為200μmol/L時降低具有統(tǒng)計學意義(p0.05)；預先使用不同濃度的抑制劑AA861的高濃度BZD組,AA861對上述氧化應激指標起到保護作用,以濃度為10μmol/L的AA861較好。[結論]5-LOX可能是上述四種人正常細胞系中協(xié)同氧化外源性化學物的主要的LOX同工酶；5-LOX抑制劑AA861對BZD所致其致癌作用主要靶細胞SV-HUC細胞氧化應激具有保護作用,提示BZD在該細胞中可能通過5-LOX代謝活化,導致氧化應激,可能與聯(lián)苯胺致膀胱癌有關；AA861可以抑制BZD引起的氧化應激。圖
【關鍵詞】：脂氧合酶 聯(lián)苯胺 氧化應激 AA861
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目錄7-9
• 英文縮略表9-11
• 1 前言11-16
• 1.1 脂氧合酶11-13
• 1.2 聯(lián)苯胺、氧化應激與脂氧合酶13-16
• 2 材料和方法16-30
• 2.1 研究技術路線16-17
• 2.2 材料17-20
• 2.2.1 細胞來源17
• 2.2.2 主要儀器和耗材17-18
• 2.2.3 主要試劑18-19
• 2.2.4 主要試劑的配制19-20
• 2.3 檢測指標及測定方法20-29
• 2.3.1 MTT法檢測細胞活性20-21
• 2.3.2 蛋白免疫印跡法(Western blot)分析蛋白表達水平21-23
• 2.3.3 細胞內活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的測定23-24
• 2.3.4 細胞內CAT、SOD、GSH的測定24-28
• 2.3.5 細胞內丙二醛(MDA)的測定28-29
• 2.4 統(tǒng)計分析29-30
• 3 結果30-42
• 3.1 苯并(a)芘和聯(lián)苯胺對細胞存活率的影響(MTT)30-32
• 3.1.1 苯并(a)芘對HBE、HTR-8、和HaCat細胞存活率的影響30-31
• 3.1.2 聯(lián)苯胺及AA861對SV-HUC存活率的影響31-32
• 3.2 各種細胞系蛋白表達情況32-36
• 3.2.1 SV-HUC細胞LOX及CYP1B1/2E1的蛋白的表達32-35
• 3.2.2 HBE、HTR-8、HaCat細胞LOX蛋白表達35-36
• 3.3 5-LOX介導聯(lián)苯胺所致SV-HUC細胞氧化應激36-42
• 3.3.1 聯(lián)苯胺及AA861對細胞內ROS的影響36-37
• 3.3.2 聯(lián)苯胺及AA861對細胞內抗氧化酶CAT、SOD的影響37-39
• 3.3.3 聯(lián)苯胺及AA861對細胞內抗氧化物GSH的影響39-40
• 3.3.4 聯(lián)苯胺及AA861對細胞內MDA的影響40-42
• 4 討論42-49
• 4.1 某些肝外組織細胞系脂氧合酶蛋白表達42
• 4.2 5-LOX在聯(lián)苯胺引起SV-HUC細胞氧化應激的作用42-49
• 4.2.1 聯(lián)苯胺對SV-HUC細胞ROS形成的影響及AA861的拮抗作用44-45
• 4.2.2 聯(lián)苯胺對SV-HUC細胞SOD、CAT酶活力影響及AA861的拮抗作用45-46
• 4.2.3 聯(lián)苯胺對SV-HUC細胞GSH含量的變化及AA861的拮抗作用46-47
• 4.2.4 聯(lián)苯胺對SV-HUC細胞MDA的形成的影響及AA861的拮抗作用47
• 4.2.5 SV-HUC細胞中5-LOX在聯(lián)苯胺引起的氧化應激中的可能作用47-49
• 5、結論49-50
• 參考文獻50-55
• 綜述55-70
• 參考文獻63-70
• 攻讀學位期間主要的研究成果70-71
• 致謝71

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 陳慶;康維鈞;;聯(lián)苯胺類化合物的毒性研究進展[J];河北醫(yī)科大學學報;2007年06期

2 陳勇;黃云;胡建安;熊敏如;羅莎菲;武越;;茶多酚對脂氧合酶介導酚噻嗪類與聯(lián)苯胺等氧化相互作用的抑制[J];毒理學雜志;2008年02期

3 高銘;;REACH紡織品召回案例評析[J];印染;2011年04期

4 戴捷,梅啟明,周培疆,劉輝;聯(lián)苯胺對線粒體抗氧化酶活性及同工酶的影響[J];中國環(huán)境科學;2003年04期

5 劉紅玲;于紅霞;徐鐵蓮;王曉蓉;;聯(lián)苯胺對錦鯉肝臟酶活性的影響[J];中國環(huán)境科學;2007年03期

6 胡建安;譚慶平;黃云;武越;;人支氣管上皮細胞5-脂氧合酶的表達與聯(lián)苯胺的活化及細胞毒性[J];毒理學雜志;2007年04期

  本文關鍵詞：脂氧合酶在四種細胞系的表達及SV-HUC細胞中介導聯(lián)苯胺氧化應激，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：403022