目的通過給予PI3K抑制劑LY294002、m TOR抑制劑雷帕霉素(RAPA)、抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC),觀察大鼠肺泡巨噬細(xì)胞NR8383的自噬活動(dòng)變化,探討PI3K/Akt/m TOR信號(hào)通路在染塵NR8383細(xì)胞自噬活動(dòng)的調(diào)控作用及抗氧化劑NAC是否通過該通路來影響矽肺的發(fā)生和發(fā)展。方法常規(guī)培養(yǎng)NR8383細(xì)胞,染塵3h、6h、12h、20h、24h后,分別收集細(xì)胞上清液并采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長因子-βⅠ(TGF-βⅠ)的分泌水平,確定體外巨噬細(xì)胞染塵模型時(shí)間。在確定的染塵時(shí)間點(diǎn)給予LY294002、RAPA和NAC,采用ELISA法檢測、方差分析或者Kruskal-Wallis H法分析TNF-α、TGF-βⅠ的表達(dá)水平;采用蛋白免疫印跡方法測定細(xì)胞內(nèi)Akt和p-m TOR蛋白水平;采用細(xì)胞免疫熒光法和蛋白免疫印跡方法(Western blotting)觀察和測定自噬的發(fā)生情況。方差分析或者Kruskal-Wallis H法分析各組自噬蛋白表達(dá)情況。結(jié)果1 NR8383細(xì)胞染塵3h、6h、12h、20h...

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
引言
第1章 實(shí)驗(yàn)研究
    1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
        1.1.2 細(xì)胞的處理及分組
    1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及器材
        1.2.1 主要儀器及材料
        1.2.2 主要試劑
        1.2.3 主要溶液配制
    1.3 研究內(nèi)容和方法
        1.3.1 ELISA法檢測NR8383細(xì)胞上清液中TNF-α 和TGF-βⅠ的分泌水平
        1.3.2 Western blotting法檢測蛋白的表達(dá)
        1.3.3 激光共聚焦法觀察自噬的表達(dá)
    1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    1.5 結(jié)果
    1.6 討論
    1.7 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第2章 綜述 自噬及其在器官纖維化中的研究進(jìn)展
    2.1 自噬的概述
        2.1.1 自噬的發(fā)展、分類及功能
        2.1.2 自噬的發(fā)生過程和發(fā)生機(jī)制
        2.1.3 自噬的方法
    2.2 自噬信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    2.3 自噬與器官纖維化
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
致謝
導(dǎo)師簡介
作者簡介
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集



本文編號(hào)：3963590