本文關(guān)鍵詞：銅離子感應(yīng)基因MAC1轉(zhuǎn)錄機(jī)理的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：銅離子是人體內(nèi)不可缺少的微量元素之一,這主要是由于銅離子是多種在人體中起重要作用的酶的必要的輔劑。因此人體必須吸收足夠的銅離子來維持生命,長期缺銅會導(dǎo)致貧血。然而,過量的銅對人體和其他生物體都是有害的;銅離子的毒性被認(rèn)為與癌癥還有神經(jīng)退行性疾病有關(guān)聯(lián)。正因?yàn)殂~離子在生物體中的這一特性,生物體必須嚴(yán)格控制細(xì)胞內(nèi)銅離子的濃度,維持在一個(gè)不高不低的水平。有關(guān)細(xì)胞是怎樣防止體內(nèi)積累過多銅的分子機(jī)理已被深入研究,相關(guān)的基因以及調(diào)控機(jī)理已被闡明。在銅匱乏的環(huán)境下,細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)激活其攝取銅的分子機(jī)制�？墒�,至于細(xì)胞是怎樣感應(yīng)銅匱乏,同時(shí)這一生物信號的性質(zhì)是什么,是傳導(dǎo)機(jī)制來激活銅離子的攝取還沒有被闡明。這些問題的解決對闡明營養(yǎng)是怎樣調(diào)控細(xì)胞的生長有重要的意義,也將對癌癥的營養(yǎng)饑餓療法起重要的指導(dǎo)作用。本論文研究是以酵母細(xì)胞為模型,研究轉(zhuǎn)錄因子Mac1自身的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)理。已知該因子在銅匱乏的條件下激活酵母細(xì)胞攝取銅的機(jī)制,闡明MAC1基因轉(zhuǎn)錄的機(jī)理有助測定細(xì)胞感應(yīng)、傳導(dǎo)銅匱乏的生物信號。我們實(shí)驗(yàn)室的前期研究確定了MAC1基因啟動(dòng)子的一些順式作用元件,其中包括轉(zhuǎn)錄因子Pho2,Gcn4,Ace2和Swi5的結(jié)合位點(diǎn)。本論文研究是在這些前期研究結(jié)果的基礎(chǔ)上,通過敲除PHO2,GCN4,ACE2或者SWI5基因是否影響MAC1基因的表達(dá)來進(jìn)一步確證這些轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控MAC1基因表達(dá)過程中的重要作用。已知PHO2在細(xì)胞磷酸的平衡過程中起重要作用,GCN4是細(xì)胞維持氨基酸平衡的關(guān)鍵因子,而ACE2和SWI5基因是細(xì)胞周期這一重要過程的關(guān)鍵調(diào)控因子。本論文研究實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),敲除PHO2降低了MAC1的表達(dá),使酵母細(xì)胞在缺銅條件下的生長受阻。敲除ACE2或者SWI5基因?qū)湍讣?xì)胞的影響和敲除PHO2基因相似。而敲除GCN4基因的作用卻相反。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果在基因的水平上證明Pho2,Gcn4,Ace2和Swi5在MAC1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程中起重要作用。同時(shí),也表明銅匱乏的生物信號的傳導(dǎo)是與細(xì)胞磷酸和氨基酸的平衡過程以及細(xì)胞周期緊密聯(lián)系的。
【關(guān)鍵詞】：銅 MAC1 PHO2 GCN4 ACE2 SWI5
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R151.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-18
• 1.1 銅與人類健康9-12
• 1.1.1 銅離子在人體內(nèi)的作用9
• 1.1.2 人體內(nèi)銅離子的穩(wěn)態(tài)平衡9-10
• 1.1.3 銅離子的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制10-11
• 1.1.4 Ctr1 在銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用11-12
• 1.2 酵母細(xì)胞的銅離子穩(wěn)態(tài)12-13
• 1.2.1 酵母細(xì)胞的銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)12-13
• 1.2.2 Ctr1 在酵母細(xì)胞銅轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用13
• 1.3 Mac1 在酵母細(xì)胞銅轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用13-15
• 1.3.1 Mac1p的結(jié)構(gòu)14
• 1.3.2 Mac1 在銅轉(zhuǎn)運(yùn)過程中的調(diào)控機(jī)制14-15
• 1.4 本論文研究的主要內(nèi)容15-18
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法18-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18-24
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑18-19
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器19
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)所用的酵母菌株19-21
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)所用的PCR引物21
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)方法21-24
• 2.2 質(zhì)粒構(gòu)建24-30
• 2.3 酵母菌株的構(gòu)建30-38
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-46
• 3.1 引言38-40
• 3.2 轉(zhuǎn)錄因子Pho2 在MAC1 基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用40-42
• 3.3 轉(zhuǎn)錄因子Gcn4 在MAC1 基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用42-44
• 3.4 轉(zhuǎn)錄因子Ace2/Swi5 在MAC1 基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用44-46
• 第四章 討論46-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 附錄54-59
• 附錄A 大腸桿菌培養(yǎng)基54-55
• 附錄B 酵母培養(yǎng)基55-57
• 附錄C 瓊脂糖凝膠電泳步驟57-58
• 附錄D 瓊脂糖凝膠DNA回收步驟58-59
• 致謝59

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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2 王寶羅;王加連;丁靜;;食用醉螺中Cu、Pb、Cr元素含量的分析測定[J];化學(xué)世界;2008年11期

3 ;Formaldehyde stress[J];Science China(Life Sciences);2010年12期

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5 王寶羅;王加連;;泥螺腹足中銅元素的積累量測定[J];理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊);2008年11期

6 張紹軍;孟泉科;張力;;火焰原子吸收光譜法測定蘋果中銅鋅鉛[J];理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊);2009年10期

7 權(quán)美平;;渭南地區(qū)加工小食品和食用菌中重金屬含量的測定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2013年09期

8 晉曉蘋;黃愛平;;非酶催化法測定食品中微量銅的研究進(jìn)展[J];化學(xué)研究;2014年02期

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李儀;土壤和灰塵中銅鋅鉛生物可接受性的體外消化方法研究[D];浙江大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：銅離子感應(yīng)基因MAC1轉(zhuǎn)錄機(jī)理的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：396012