目的探討低劑量亞砷酸鈉致人支氣管上皮(human bronchial epithelial,HBE)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中,細(xì)胞氧化還原狀態(tài)變化情況及Keap1/Nrf2-ARE抗氧化信號通路相關(guān)基因表達(dá)動態(tài)變化趨勢,為闡明砷致癌作用的分子機(jī)制開辟新的研究途徑。方法1.HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化鑒定用1μmol/L亞砷酸鈉連續(xù)染毒HBE細(xì)胞,同時設(shè)立傳代對照組。通過形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞計數(shù)法檢測生長動力學(xué)改變、Elisa法檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)以及軟瓊脂克隆實驗鑒定細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化情況。2.HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中Keap1/Nrf2-ARE信號通路相關(guān)指標(biāo)表達(dá)檢測將1μmol/L亞砷酸鈉染毒組定義為染毒組,將代數(shù)匹配對照組定義為傳代對照組。建立低劑量亞砷酸鈉致HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化模型后,分別于暴露1、8、15、22、29、36、43代,以流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞活性氧(ROS)水平,以硫代巴比妥酸(TBA)比色法檢測細(xì)胞丙二醛(MDA)含量,以WST-1法檢測細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)活力,以Western blot方法檢測Keap1/Nrf2-ARE抗氧化通路相關(guān)蛋白Nrf2、Keap1及下游...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖143代HBE細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化(x200)

低劑量亞砷酸鈉致HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中Keap1/Nrf2-ARE信號通路的作用第一部分較時，若方差齊時，采用SNK檢驗（Student-Newman-Keuls法）；若方差不齊時，采用Games-Howell檢驗。以p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2....

圖243代HBE細(xì)胞在軟瓊脂中的集落形成情況（×100）

A傳代對照B1μmol/L亞砷酸鈉圖243代HBE細(xì)胞在軟瓊脂中的集落形成情況（×100）討論長期暴露于低劑量無機(jī)砷可以引起人類多組織、臟器腫瘤，如皮膚癌、肺癌、膀胱癌等等，然而，砷化物致癌的動物模型一直沒有成功建立，因此，砷致細(xì)性轉(zhuǎn)化模型的建立對于研究無機(jī)砷....

圖1HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中ROS.MDA變化情況

低劑量亞砷酸鈉致HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中Keap1/Nrf2-ARE信號通路的作用第二部分件處理后，采用ImageJ2x軟件對免疫印跡條帶掃描后進(jìn)行半定量分析并用同一張膜上相應(yīng)泳道的GAPDH(全細(xì)胞和細(xì)胞漿)或者HistoneH3(細(xì)胞核)條帶的灰度進(jìn)行校....

圖2HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中SOD變化情況

圖2HBE細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中SOD變化情況5表示與對照組HBE細(xì)胞（0代）比較，差異具有統(tǒng)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中HO-1蛋白表達(dá)情況著染砷代數(shù)的增加至發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化這段期間，全細(xì)表達(dá)均維持在一個較高水平，且細(xì)胞核中HO-1蛋白在見圖3）。

本文編號：3949184