抗生素抗性基因與細(xì)菌耐藥性密切相關(guān),其在食品中的存留狀況越來(lái)越受到關(guān)注。奶酪是一種即食性發(fā)酵食品,在我國(guó)的消費(fèi)量呈快速增長(zhǎng)的趨勢(shì),本研究利用熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)對(duì)國(guó)內(nèi)外干酪和再制干酪樣品中8大類抗生素抗性基因進(jìn)行了檢測(cè),以期揭示其在奶酪制品中的存留和分布特點(diǎn)。結(jié)果顯示:干酪和再制干酪這兩類奶酪中存留了高豐度的抗性基因,除萬(wàn)古霉素類抗性基因外,其余7大類抗性基因在干酪和再制干酪樣品中均檢出,再制干酪中的各大類抗性基因檢出率明顯低于干酪樣品,其中再制干酪中檢出率較高的是氨基糖苷類、四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)脂類-林可酰胺類-鏈陽(yáng)性菌素B(MLSB)類抗性基因,干酪樣品中檢出率較高的是FCA(氟喹諾酮類、喹諾酮類、氟苯尼考、氯霉素和酰胺醇)類和氨基糖苷類抗性基因。分離自樣品的18株乳酸菌藥敏測(cè)試結(jié)果顯示:耐藥率較高的藥物為磺胺惡唑(90.9%)和苯唑西林(86.36%);敏感率較高的是四環(huán)素(100%)和氨芐西林(100%)、氯霉素(81.8%);中介率最高的是環(huán)丙沙星(72.7%)和諾氟沙星(67.9%),上述研究結(jié)果表明市售奶酪中殘留的抗生素抗性基因是一個(gè)不容忽視的問(wèn)題。

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【部分圖文】：

圖1奶酪抽提細(xì)菌總DNA16SrDNA鑒定

用試劑盒從奶酪中抽提的細(xì)菌總DNA用16SrDNAV3區(qū)段的通用引物進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示所有樣品的的細(xì)菌DNA抽提驗(yàn)證正確如圖1所示。本研究采用的QPCR技術(shù)對(duì)不同來(lái)源奶酪中8大類抗性基因的存留情況進(jìn)行了檢測(cè),如表2所示,根據(jù)不同的抗性基因,設(shè)計(jì)對(duì)應(yīng)的引物予以檢測(cè),例如氨基糖苷類....

圖3奶酪制品中4大抗性機(jī)制ARG統(tǒng)計(jì)結(jié)果

進(jìn)一步根據(jù)抗性基因的4種抗性機(jī)制,對(duì)每個(gè)奶酪樣品ARGs做統(tǒng)計(jì)分析見(jiàn)圖3(a)和圖3(b),圖中展現(xiàn)出每類樣品總共檢出的基因中不同抗性機(jī)制ARG的所占百分比,圖中的參照列為待檢測(cè)的不同抗性機(jī)制ARGS所占百分比,結(jié)果顯示不同樣品中不同抗性機(jī)制ARGs檢出數(shù)目存在差異,在干酪樣品中....

圖4分離菌16SrDNA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

分離菌株的16SrDNA特異引物擴(kuò)增結(jié)果顯示,各分離菌株均擴(kuò)增出大小在1.5kb左右的片段(見(jiàn)圖4),將目的片段進(jìn)行回收,并將回收片段送至上海生工生物公司進(jìn)行測(cè)序,測(cè)序結(jié)果經(jīng)BLAST(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)比對(duì)分析,....

圖2奶酪制品中8大類抗性基因檢出比率

表3奶酪制品中8大類抗性機(jī)制對(duì)應(yīng)檢出基因個(gè)數(shù)FCA氨基糖苷大環(huán)內(nèi)酯其他磺胺四環(huán)素萬(wàn)古霉素β內(nèi)酰胺JKL427101626017SWISS1018111031604KB17304409021GLTB182....

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