本文關(guān)鍵詞：TaqMan探針熒光PCR法定量檢測(cè)水中大腸埃希氏菌方法建立和應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 1．應(yīng)用TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)(RT-qPCR)，建立大腸埃希氏菌的快速定量檢測(cè)方法。 2．優(yōu)化水中細(xì)菌富集和DNA提取方法，以便應(yīng)用RT-qPCR方法的進(jìn)行水中大腸埃希氏菌的檢測(cè)。 3．采用RT-qPCR和多管發(fā)酵法同時(shí)檢測(cè)實(shí)際水樣，驗(yàn)證RT-qPCR方法的準(zhǔn)確性。 方法： 1．根據(jù)大腸埃希氏菌的ydiJ基因，設(shè)計(jì)引物和探針，并分析其特異性和靈敏性。 2．將分離的目標(biāo)片斷與T載體連接重組，制備大腸埃希氏菌的質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)品。 3．優(yōu)化RT-qPCR反應(yīng)檢測(cè)體系，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。 4．通過比較各種水中細(xì)菌富集和DNA提取的方法，確定最佳前處理方法組合。 5．采用RT-qPCR檢測(cè)20份水樣，所得結(jié)果與多管發(fā)酵法比較，以驗(yàn)證所建立方法的準(zhǔn)確性。 結(jié)果： 1．引物ydiJ577的特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，，所有的大腸埃希氏菌和志賀氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株均為陽性,9株其它非大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株均為陰性; 2．制備大腸埃希氏菌的質(zhì)粒DNA經(jīng)測(cè)序比對(duì)，結(jié)果: Identities=90/91(99%),Gaps=0/91(0%)。，標(biāo)準(zhǔn)品純度：OD260/OD280=0.047/0.026=1.81 3．加標(biāo)水源水經(jīng)膜洗脫（L型棒洗脫法），磁珠法提取DNA，所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍2.3×100～2.3×106CFU/mL (R2:0.996)、檢測(cè)限可達(dá)到2.3CFU/mL。 4． RT-qPCR和多管發(fā)酵法檢測(cè)實(shí)際水樣所得結(jié)果具有相關(guān)性，r=0.991, P0.01 結(jié)論： 1． RT-qPCR方法有很好的特異性，能夠快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)水中大腸埃希氏菌。 2． RT-qPCR方法特別適合在中高程度污染的水樣中定量檢測(cè)大腸埃希氏菌。 3． RT-qPCR法可以作為現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法的補(bǔ)充，能夠更加準(zhǔn)確、及時(shí)地評(píng)價(jià)水體受糞便污染程度。
【關(guān)鍵詞】：水 大腸埃希氏菌 PCR 定量檢測(cè)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R123.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 第一部分 TaqMan探針熒光 PCR 定量檢測(cè)大腸埃希氏菌方法的研究11-18
• 1 材料11-12
• 2 方法12-14
• 3 結(jié)果14-16
• 4 討論16-18
• 第二部分 飲用水中大腸埃希氏菌富集和 DNA 提取方法優(yōu)化18-23
• 1 材料18
• 2 方法18-20
• 3 結(jié)果20-22
• 4 討論22-23
• 第三部分 TaqMan探針熒光 PCR 方法定量檢測(cè)水中大腸埃希氏菌及方法比對(duì)23-30
• 1 材料23-24
• 2 方法24-25
• 3 結(jié)果25-28
• 4 討論28
• 5 結(jié)論28-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 綜述 熒光 PCR 方法定量檢測(cè)大腸埃希氏菌的研究進(jìn)展33-41
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 攻讀學(xué)位期間本人公開發(fā)表的論文41-42
• 附錄 （部分測(cè)序圖及序列對(duì)比結(jié)果）42-44
• 中英文縮略詞對(duì)照表44-45
• 致謝45-46

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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  本文關(guān)鍵詞：TaqMan探針熒光PCR法定量檢測(cè)水中大腸埃希氏菌方法建立和應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：390942