本文關(guān)鍵詞：大氣PM2.5對小鼠樹突狀細(xì)胞毒性作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察大氣PM2.5不同濃度下對BALB/c小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DC)的毒性作用。方法:1.大氣PM2.5收集:2014年1月-2014年2月期間,收集山西省太原市相對污染區(qū)和相對潔凈區(qū)的PM2.5濾膜。將PM2.5制成凍干粉。臨用前紫外燈照射凍干粉30分鐘,用含10%胎牛血清的RPMl l640細(xì)胞培養(yǎng)液溶解PM2.5凍干粉,配成50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml濃度的顆粒懸液。2.體外誘導(dǎo)培養(yǎng)小鼠樹突狀細(xì)胞(DCs):在無菌條件下提取BALB/c小鼠骨髓細(xì)胞,分離單個核細(xì)胞,以小鼠重組粒細(xì)胞—巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)20ng/ml和白細(xì)胞介素(IL-4)2ng/ml協(xié)同誘導(dǎo)下培養(yǎng)一周,倒置顯微鏡下觀察DC的形態(tài)變化、免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色觀察樹突狀細(xì)胞表型特點。3.將活性良好的樹突狀細(xì)胞接種在12孔板中,每孔細(xì)胞數(shù)1×104。細(xì)胞分為6組,對照組用含10%胎牛血清的RPMl l640細(xì)胞培養(yǎng)液,其余5組用上述含不同濃度PM2.5的含10%胎牛血清的RPMl l640細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞24小時,收集細(xì)胞。用MTS法觀察樹突狀細(xì)胞存活率。4.細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)活性分析,判斷PM2.5對樹突狀細(xì)胞的損害程度。5.將活性良好的樹突狀細(xì)胞接種在12孔板中,每孔細(xì)胞數(shù)1×104。細(xì)胞組分為4組,分別為對照組control組、鐵胺甲磺酸酯(Deferoxamine mesylate,DFO)組、DFO+PM2.5組、PM2.5組。分別培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞24小時,MTS法觀察細(xì)胞生存率,以判斷PM2.5混合成分中是否含有金屬離子?6.DAPI/PI雙染樹突狀細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察樹突狀細(xì)胞的存活/死亡比例。結(jié)果:1.成功獲取小鼠骨髓單個核細(xì)胞,培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞活性良好。2.不同濃度PM2.5對DC存活率的影響:以對照組存活率做對照,PM2.5濃度為50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml各組DC存活率分別為88.10%、81.45%、71.48%、43.65%、21.82%,各組間較對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3.LDH活性分析:PM2.5濃度為50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml各組LDH釋放量分別為5.5%、14.8%、27%、78%、89%。LDH釋放與PM2.5濃度呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系。4.Control組、DFO組、DFO+PM2.5組、PM2.5組,以Control組做對照,其余各組分別為:95.41%、75.84%、22.38%。5.DAPI/PI雙染DC,熒光顯微鏡下觀察活細(xì)胞生存率、凋亡率、死亡率:PM2.5組與Control組、DFO組、DFO+PM2.5組之間均有顯著差異。結(jié)論:PM2.5對骨髓來源的樹突狀細(xì)胞有毒性作用,隨著劑量的增加,毒性增加。PM2.5成分復(fù)雜,對骨髓來源的樹突狀細(xì)胞的毒性作用不僅來源于可溶于水相的物質(zhì),金屬離子也發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：PM2.5 樹突狀細(xì)胞 毒性作用
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：X513;R122
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用縮寫詞中英文對照表10-11
• 前言11-13
• 1 實驗材料與方法13-16
• 1.1 實驗材料13
• 1.2 實驗方法13-15
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)處理15-16
• 2 結(jié)果16-20
• 2.1 成功獲取細(xì)胞16
• 2.2 不同濃度PM2.5 對樹突狀細(xì)胞存活率的影響16
• 2.3 LDH活性分析16
• 2.4 金屬成份對細(xì)胞影響16-17
• 2.5 DAPI/PI雙染樹突狀細(xì)胞17-20
• 3 討論20-22
• 4 結(jié)論22-23
• 參考文獻(xiàn)23-25
• 綜述25-34
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果34-35
• 致謝35-36
• 個人簡歷36

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：387943