目的本實(shí)驗(yàn)購入人胚肺成纖維細(xì)胞（MRC-5細(xì)胞），通過RNA干擾技術(shù)將CXCL11-SiRNA和CXCR3-SiRNA干擾質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染入人胚肺成纖維細(xì)胞內(nèi)，對(duì)矽肺纖維化相關(guān)基因CXCL11及CXCR3進(jìn)行基因沉默，并用矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清刺激人胚肺成纖維細(xì)胞，觀察細(xì)胞I、III型膠原表達(dá)情況，探討CXCL11及CXCR3在矽肺纖維化中的作用。 方法1獲取矽肺患者肺泡灌洗液，離心收集肺泡巨噬細(xì)胞（AM），觀察AM形態(tài)，并做常規(guī)HE染色、抗酸染色及瑞氏染色鑒定。用含SiO2的空白培養(yǎng)基刺激AM18h，收集上清并過濾保存?zhèn)溆谩?構(gòu)建ShRNA表達(dá)質(zhì)粒：在Pubmed網(wǎng)站查詢獲得人類基因CXCL11及CXCR3的序列號(hào)，由上海吉瑪公司構(gòu)建兩種基因的干擾質(zhì)粒及相應(yīng)的陰性質(zhì)粒，質(zhì)粒選取pGPU6/GFP/Neo-shGAPDH為載體。3CXCL11-SiRNA和CXCR3-SiRNA由LipofectamineTM2000脂質(zhì)體介導(dǎo)分別轉(zhuǎn)染入人胚肺成纖維細(xì)胞內(nèi)，用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察質(zhì)粒轉(zhuǎn)染情況；轉(zhuǎn)染36～48h后提取各組細(xì)胞總mRNA和總蛋白分別用realtime-PCR和Weste...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
引言
第1章 實(shí)驗(yàn)研究
    1.1 材料與方法
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及材料
        1.1.2 矽肺患者 AM 的收集及條件上清的制備
        1.1.3 人胚肺成纖維細(xì)胞（MRC-5）的培養(yǎng)
        1.1.4 CXCL11 及 CXCR3 基因干擾質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.1.5 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染率的測定
        1.1.6 Realtime-PCR 檢測人胚肺成纖維細(xì)胞中 CXCL11 及 CXCR3mRNA 的表達(dá)
        1.1.7 Western-blot 法檢測人胚肺成纖維細(xì)胞中 CXCL11 及 CXCR3 蛋白的表達(dá)
        1.1.8 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測轉(zhuǎn)染質(zhì)粒對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞 I、III 型膠原表達(dá)的影響
        1.1.9 Western-blot 法檢測轉(zhuǎn)染質(zhì)粒對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞 I、III 型膠原表達(dá)的影響
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞的獲取及鑒定
        1.2.2 人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5 的形態(tài)觀察
        1.2.3 重組質(zhì)粒的測序結(jié)果
        1.2.4 激光掃描共聚焦顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染率
        1.2.5 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入人胚肺成纖維細(xì)胞后 Realtime-PCR 檢測 CXCL11 及CXCR3 的 mRNA 的表達(dá)
        1.2.6 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入人胚肺成纖維細(xì)胞后 Western-blot 法檢測 CXCL11 及CXCR3 的蛋白的表達(dá)
        1.2.7 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后人胚肺成纖維細(xì)胞中 I、III 型膠原的表達(dá)
        1.2.8 Western-blot 法檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后人胚肺成纖維細(xì)胞中 I、III 型膠原的表達(dá)
    1.3 討論
        1.3.1 矽肺的研究現(xiàn)狀
        1.3.2 RNA 干擾技術(shù)的研究進(jìn)展
        1.3.3 轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化
        1.3.4 趨化因子 CXCL11 及其受體 CXCR3 的研究
        1.3.5 矽肺患者支氣管肺泡灌洗液肺巨噬細(xì)胞 AM 上清的獲取
        1.3.6 矽肺纖維化相關(guān)膠原的表達(dá)情況
        1.3.7 矽肺纖維化差異表達(dá)基因的選擇及基因沉默效果的檢測
    1.4 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第2章 綜述 CXCL11 及其受體 CXCR3 與肺纖維化
    2.1 CXCL11 的結(jié)構(gòu)
    2.2 CXCR3 的結(jié)構(gòu)
    2.3 CXCL11-CXCR3 在肺纖維化中的作用
    2.4 展望
    參考文獻(xiàn)
致謝
導(dǎo)師簡介
作者簡介
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集



本文編號(hào)：3834803