本文關(guān)鍵詞：2012-2013四川部分地區(qū)市售雞肉中沙門氏菌污染及耐藥性分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：沙門氏菌(Salmonella)是一種常見的人獸共患病原菌,廣泛存在于自然界,它不僅能夠引起家禽的各種疾病,還能夠通過污染的畜禽產(chǎn)品,威脅人體健康。據(jù)資料統(tǒng)計(jì),在我國細(xì)菌性食物中毒中,由沙門氏菌引起的位列首位,而在引起沙門氏菌中毒的食品中,約90%是肉、蛋、奶等畜禽產(chǎn)品。雞肉是我國主要的畜禽產(chǎn)品之一,肉雞在養(yǎng)殖過程中容易受到沙門氏菌感染。隨著養(yǎng)殖環(huán)節(jié)抗生素大量使用,沙門氏菌對常用抗菌藥物的耐藥率逐漸增強(qiáng),且其耐藥性可通過食物鏈傳播到人群。因此,對市售雞肉中沙門氏菌、特別是耐藥性沙門氏菌污染情況和耐藥情況進(jìn)行研究,對食品安全具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)從四川部分地區(qū)采集雞肉樣品400份,從中分離出61株沙門氏菌,并進(jìn)行耐藥性分析、Ⅰ類整合子／基因盒、耐磺胺基因檢測,主要結(jié)果如下。1.市售雞肉中沙門氏菌的分離鑒定及血清分型2012年至2013年,從四川成都、遂寧、雅安等地采集雞肉樣品400份,按照GB 4789.4-2010的方法,分離沙門氏菌疑似菌株,并以沙門氏菌的invA基因和hut基因?yàn)榘谢蛟O(shè)計(jì)兩對特異性引物,對疑似菌株進(jìn)行二重PCR鑒定。結(jié)果顯示,從市售雞肉中準(zhǔn)確鑒定出61株沙門氏菌,污染率為15.3%。通過血清學(xué)實(shí)驗(yàn),判定其中腸炎沙門氏菌占45.90%(28/61),鼠傷寒沙門氏菌占37.70%(23/61)。2.市售雞肉中沙門氏菌的耐藥性分析采用紙片瓊脂法,對61株沙門氏菌進(jìn)行10種抗生素的耐藥性分析,結(jié)果表明沙門氏菌分離菌株對萘啶酸(100%)、氨芐西林(90.16%)、四環(huán)素(68.85%)、環(huán)丙沙星(60.66%)、大觀霉素(47.54%)、甲氧芐啶／磺胺異嗯唑(39.34%)的耐藥率較高；對阿莫西林／克拉維酸(19.67%)、氟苯尼考(14.75%)、頭孢曲松(9.84%)、慶大霉素(8.20%)的耐藥率較低。但值得注意的,對阿莫西林／克拉維酸的中介耐藥率較高,為54.10%。同時(shí)61株沙門氏分離菌對10種抗菌藥物產(chǎn)生了22種耐藥譜,44株菌株產(chǎn)生了多重耐藥性(72.13%)。3.多重耐藥沙門氏菌耐藥基因檢測(1)多重耐藥沙門氏菌的Ⅰ類整合子/基因盒PCR檢測將本研究中44株具有多重耐藥性的沙門氏菌進(jìn)行Ⅰ類整合子int1基因的PCR擴(kuò)增,有17株檢出intl基因,陽性率為38.64%；其中有16株具有五種以上的耐藥譜的菌株。17株Ⅰ類整合子陽性菌株中有15株擴(kuò)增出基因盒,經(jīng)過測序15株全部攜帶基因片段bln(OXA-30)-aadAl,該基因編碼可能與β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類和磺胺類抗生素的耐藥相關(guān)。而其中兩株還同時(shí)帶有dfrA1-orfC基因盒,這兩株菌的耐藥譜也更加廣泛,耐藥種類達(dá)到9種。(2)多重耐藥沙門氏菌的耐磺胺基因的PCR檢測本研究中的24株甲氧芐啶/磺胺異嗯唑耐藥菌,有11株檢出sull,22株檢出sul2,10株檢出sul3,sul基因的檢出率為91.67%,與藥敏實(shí)驗(yàn)相比,耐藥基因的符合率為91.67%。在17株檢出intl基因的菌株中同時(shí)有3株攜帶sul1+sul2耐磺胺基因,有1株攜帶sul1+sul2+sul3耐磺胺基因,也證明了沙門氏菌磺胺類耐藥基因與Ⅰ類整合子關(guān)系密切。本文對2012-2013年間,四川部分地區(qū)市售雞肉中沙門氏菌的污染和耐藥性做了詳細(xì)分析,并對多重耐藥菌株進(jìn)行整Ⅰ類整合子/基因盒、耐磺胺基因的PCR檢測,為沙門氏菌風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測控制提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù),為今后食品安全工作中沙門氏菌的有效監(jiān)測和防止提供參考,同時(shí)為指導(dǎo)養(yǎng)雞業(yè)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)合理用藥、降低耐藥菌株產(chǎn)生,控制其傳播提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：沙門氏菌 二重PCR 耐藥性 Ⅰ類整合子 耐磺胺類基因
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略詞表8-11
• 1 前言11-21
• 1.1 食品中沙門氏菌的污染情況11-12
• 1.1.1 國外食品中沙門氏菌污染情況11
• 1.1.2 國內(nèi)食品中沙門氏菌的污染情況11-12
• 1.2 沙門氏菌的分離鑒定方法12-13
• 1.2.1 常規(guī)生化鑒定方法12
• 1.2.2 分子生物技術(shù)鑒定方法12-13
• 1.3 沙門氏菌血清學(xué)研究現(xiàn)狀13-14
• 1.4 沙門氏菌的耐藥情況分析14-17
• 1.4.1 細(xì)菌耐藥性及藥敏試驗(yàn)14-15
• 1.4.2 國外沙門氏菌的耐藥情況15-16
• 1.4.3 國內(nèi)沙門氏菌耐藥耐藥情況16-17
• 1.5 沙門氏菌耐藥機(jī)制研究17-19
• 1.5.1 沙門氏菌1類整合子/基因盒系統(tǒng)研究17-18
• 1.5.2 沙門氏菌耐磺胺類藥物研究18-19
• 1.5.3 沙門氏菌Ⅰ類整合子/基因盒與磺胺類耐藥的關(guān)系19
• 1.6 研究的目的和意義19-20
• 1.7 研究的內(nèi)容和技術(shù)路線20-21
• 1.7.1 研究內(nèi)容20
• 1.7.2 技術(shù)路線20-21
• 2 材料與方法21-30
• 2.1 材料21-23
• 2.1.1 樣品來源21
• 2.1.2 菌株21
• 2.1.3 引物21-22
• 2.1.4 培養(yǎng)基22
• 2.1.5 主要試劑22
• 2.1.6 主要儀器22-23
• 2.1.7 藥敏抗生素紙片23
• 2.2 方法23-30
• 2.2.1 市售雞肉中沙門氏菌的分離鑒定23-25
• 2.2.2 沙門氏菌分離菌株的血清分型25
• 2.2.3 沙門氏菌分離菌株的藥敏實(shí)驗(yàn)25-27
• 2.2.4 多重耐藥沙門氏菌耐藥機(jī)制分析27-30
• 3 結(jié)果與分析30-39
• 3.1 市售雞肉中沙門氏菌的污染情況30-32
• 3.1.1 疑似沙門氏菌的分離純化結(jié)果30-31
• 3.1.2 PCR引物特異性試驗(yàn)結(jié)果31
• 3.1.3 疑似沙門氏菌的二重PCR鑒定結(jié)果31-32
• 3.1.4 市售雞肉中沙門氏菌的污染情況32
• 3.2 市售雞肉中沙門氏菌的血清型分布情況32
• 3.3 市售雞肉中沙門氏菌的藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-34
• 3.3.1 沙門氏菌分離菌株的耐藥情況32-33
• 3.3.2 沙門氏菌分離菌株的多重耐藥性及耐藥譜33-34
• 3.4 多重耐藥沙門氏菌耐藥基因檢測結(jié)果34-39
• 3.4.1 沙門氏菌Ⅰ類整合子/基因盒系統(tǒng)的攜帶情況35-36
• 3.4.2 沙門氏菌耐磺胺類藥物sul基因的檢測結(jié)果36-39
• 4 討論39-41
• 4.1 市售雞肉中沙門氏菌的檢測方法分析39
• 4.2 市售雞肉中沙門氏菌的污染情況分析39
• 4.3 市售雞肉中沙門氏菌的血清分型39
• 4.4 市售雞肉中沙門氏菌的耐藥性分析39-40
• 4.5 多重耐藥沙門氏菌株的Ⅰ類整合子/基因盒系統(tǒng)分析40
• 4.6 多重耐藥沙門氏菌株耐磺胺基因分析40-41
• 4.7 沙門氏菌Ⅰ類整合子/基因盒與耐磺胺基因攜帶關(guān)系41
• 5 結(jié)論與展望41-43
• 5.1 結(jié)論41-42
• 5.2 展望42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 致謝46

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本文編號：378892